李玉鵬， 劉醒醒， 唐德富， 羅昱芬， 年 芳*

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學動物科學與技術(shù)學院，甘肅蘭州730070；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學理學院，甘肅蘭州730070）

動物營養(yǎng)

酶解棕櫚仁粕肉仔雞氨基酸營養(yǎng)價值的評定

李玉鵬1， 劉醒醒1， 唐德富1， 羅昱芬2， 年 芳2*

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學動物科學與技術(shù)學院，甘肅蘭州730070；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學理學院，甘肅蘭州730070）

本試驗旨在研究經(jīng)甘露聚糖酶酶解后的棕櫚仁粕 （PKM-2）、甘露聚糖酶和蛋白酶酶解后的棕櫚仁粕（PKM-3）對肉仔雞回腸氨基酸消化率的影響。選用192只體重相近的1日齡科寶肉仔雞，隨機分成4組（每組設(shè)8個重復(fù)，每個重復(fù)6只雞，公母各半），分別飼喂PKM-1（未處理）、PKM-2和PKM-3配制的半純合飼糧和無氮飼糧，在35日齡時收集肉仔雞回腸后半段食糜進行測定。結(jié)果表明：（1）性別對肉仔雞內(nèi)源氨基酸基礎(chǔ)損失量無顯著影響（P＞0.05）；（2）PKM-2和PKM-3粗蛋白質(zhì)和氨基酸（除半胱氨酸外）的表觀回腸消化率極顯著提高（P＜0.01），除組氨酸和半胱氨酸外的標準回腸消化率極顯著提高（P＜0.01）；PKM-3比PKM-2的蛋白質(zhì)的表觀回腸消化率提高2.66%，但差異不顯著（P＞0.05）；PKM-2與PKM-3所有氨基酸標準回腸消化率差異均不顯著（P＞0.05）。綜上所述，酶解后的棕櫚仁粕蛋白質(zhì)和大部分氨基酸消化率均有改善。

棕櫚仁粕；肉雞；氨基酸消化率；甘露聚糖酶；蛋白酶

近年來，我國蛋白質(zhì)、能量飼料缺乏，特別是蛋白質(zhì)飼料資源的短缺，已成為限制我國畜牧業(yè)發(fā)展的主要因素之一，因此，高效利用現(xiàn)有蛋白質(zhì)資源是緩解當前蛋白質(zhì)飼料短缺的一種有效方式（阮征等，2015；施安輝等，2006）。棕櫚仁粕粗蛋白質(zhì)含量大于16%、粗脂肪約6.82%、粗纖維小于15.12%、粗灰分約6.58%、水分11.43%、無氮浸出物54.62%和還原糖2.87%（Ng，2004），且其富含亞油酸，氨基酸組成均衡，具有較高的飼用價值。飼糧中添加棕櫚仁粕可促進畜禽生長發(fā)育，提高畜禽生產(chǎn)性能，增強動物的免疫機能（馬方奎等，2011；賀丹艷等，2010；謝正軍等，2006）。然而，棕櫚仁粕含非水溶性78%甘露聚糖，3%阿拉伯糖基木聚糖、3%葡萄糖醛酸木聚糖等抗營養(yǎng)因子和12%纖維素（Düsterh?ft等，1992）。棕櫚仁粕含有的粗纖維（Sundu等，2015）和抗營養(yǎng)因子阻礙了家禽對蛋白質(zhì)的消化利用（Sundu等，2006）。

在畜禽飼養(yǎng)中，畜禽需要一定量的優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，這依賴于飼糧中粗蛋白質(zhì)的含量、氨基酸的組成以及動物對氨基酸的利用率等因素。飼料蛋白質(zhì)的利用率可通過氨基酸的利用率來進行客觀評價，氨基酸的消化率已經(jīng)被公認為是蛋白質(zhì)生物利用率的檢測器（Lemme等，2004）。目前由于受到檢測技術(shù)的限制，人們常用消化率來表示利用率，同時飼料工業(yè)常根據(jù)氨基酸的回腸消化率配制畜禽飼糧，以更符合畜禽對營養(yǎng)物質(zhì)的需求。因而如何有效利用棕櫚仁粕資源，使用棕櫚仁粕氨基酸消化率來準確配制肉仔雞飼糧，提高棕櫚仁粕氨基酸消化率及其在肉仔雞飼糧中的應(yīng)用顯得尤為重要。有選擇性的添加一些酶制劑到棕櫚仁粕中，可降低飼料中相應(yīng)的抗營養(yǎng)因子對畜禽的影響（唐茂妍等，2010），提高其氨基酸消化率（毛宗林，2013）。

本試驗針對棕櫚仁粕所含抗營養(yǎng)因子，選擇在飼糧中添加甘露聚糖酶和蛋白酶，探討不同處理棕櫚仁粕對肉仔雞表觀回腸氨基酸消化率和標準回腸氨基酸消化率的影響，旨在為棕櫚仁粕的高效應(yīng)用提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料及其處理 試驗用棕櫚仁粕樣品由迪波爾有限公司提供，酶制劑購于丹尼斯克動物營養(yǎng)公司，甘露聚糖酶和蛋白酶活性分別為200000、40000 U/g，添加量分別為100、250 g/t。樣品酶解處理分兩個步驟：第一步將干燥的棕櫚仁粕與酶溶液充分混合，調(diào)節(jié)混合后物料的水分含量約為40%；第二步將上述混合后物料置于70℃的溫度下持續(xù)酶解48 h后，室溫晾干，混合產(chǎn)物即為試驗樣品。根據(jù)上述方法將棕櫚仁粕分別與甘露聚糖酶液或甘露聚糖酶和蛋白酶混合液混合得到試驗樣品2（PKM-2）和樣品3（PKM-3）。未經(jīng)處理棕櫚仁粕為樣品1（PKM-1），棕櫚仁粕樣品粗蛋白質(zhì)和氨基酸含量見表1。

表1 棕櫚仁粕樣品粗蛋白質(zhì)和氨基酸含量（風干基礎(chǔ)）%

1.2 試驗動物和飼養(yǎng)管理 試驗選取200只1日齡科寶肉仔雞[平均體重（45±2）g]，1～27日齡飼喂全價飼糧。28日齡所有肉仔雞稱重，選取192只體重相近的試雞隨機分成4組，每組設(shè)8個重復(fù)，每個重復(fù)6只雞（公母各半）。處理組1飼喂無氮飼糧，處理組2、3、4分別飼喂3種棕櫚仁粕（PKM-1、PKM-2與PKM-3）配制的半純合飼糧。28～30日齡為預(yù)飼期，31～35日齡為正式試驗期，試驗半純合飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2，無氮飼糧組成及營養(yǎng)水平見表3。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）

本試驗在甘肅農(nóng)業(yè)大學動物科學訓(xùn)練中心進行。肉雞采用三層籠養(yǎng)，試驗期間自由采食，自由飲水。試驗期內(nèi)每日記錄各組采食量和死淘數(shù)，其他飼養(yǎng)管理和免疫程序參考科寶肉仔雞飼養(yǎng)商業(yè)推薦程序進行。試驗所用外源指示劑為二氧化鈦（TiO2），添加量為0.5%。

表3 無氮飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）

1.3 樣品采集及指標測定

1.3.1 回腸食糜的收集 于35日齡末以重復(fù)為單位采用斷頸法屠宰試雞，迅速打開腹腔，分離回腸（從卵黃囊憩室到回盲瓣），用蒸餾水緩慢沖出回腸食糜，收集到樣品袋中，迅速冷凍（-20℃），并經(jīng)冷凍干燥、粉碎、過40目篩、保存待測。

1.3.2 指標測定 棕櫚仁粕樣品、飼糧和食糜中的粗蛋白質(zhì)含量測定參考AOAC（2005）的方法進行；總能使用長沙奔特“WZR-1A”型全自動熱量計測定；飼糧、回腸食糜和糞便中的二氧化鈦含量參照Short等（1996）的方法測定。棕櫚仁粕樣品、飼糧和食糜中粗蛋白質(zhì)、氨基酸含量的測定參照氨基酸的國標（GB/T 5009.124-2003）檢測法。

1.4 計算方法

1.4.1 表觀回腸氨基酸消化率（AIDaa）

AIDaa/%=［1-AAd×Tif/（AAf×Tid）］×100；

式中：AAd為回腸食糜氨基酸含量；Tid為回腸食糜TiO2含量；AAf為飼料氨基酸含量；Tif為飼料TiO2含量。所有含量都以干物質(zhì)為基礎(chǔ)。

1.4.2 回腸末端內(nèi)源氨基酸損失（IAAend）

式中：IAAend為對應(yīng)每單位重量的回腸末端內(nèi)源氨基酸損失的某氨基酸量，mg/kg；AAi為無氮飼糧回腸食糜某氨基酸含量 （凍干基礎(chǔ)）；Tif、Tid分別為無氮飼糧二氧化鈦含量 （干物質(zhì)基礎(chǔ)）、回腸食糜TiO2含量（凍干基礎(chǔ)）。

1.4.3 氨基酸標準回腸消化率（TID）

式中：AAd為待測飼糧干物質(zhì)狀態(tài)下某氨基酸含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析和Duncan’s多重比較，顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理棕櫚仁粕對肉仔雞回腸末端內(nèi)源氨基酸基礎(chǔ)損失量的影響 由表4可知，回腸末端內(nèi)源氨基酸基礎(chǔ)損失量在性別間差異不顯著（P＞0.05）。雌性回腸末端粗蛋白質(zhì)的基礎(chǔ)損失量比雄性回腸末端的基礎(chǔ)損失量高6.01%。所測得的16種氨基酸中，以纈氨酸的損失量最高，公母混合為950 mg/kg干物質(zhì)攝入量，其次是亮氨酸、異亮氨酸和谷氨酸，組氨酸的損失量最低，公母混合為170 mg/kg干物質(zhì)攝入量。

表4 肉仔雞回腸末端內(nèi)源氨基酸基礎(chǔ)損失量（干物質(zhì)攝入量）mg/kg

2.2 不同處理棕櫚仁粕對肉仔雞表觀回腸消化率的影響 由表5可知，PKM-2和PKM-3飼喂組肉雞粗蛋白質(zhì)的表觀回腸消化率極顯著高于PKM-1組 （P＜0.01），PKM-3比PKM-2組蛋白質(zhì)的表觀回腸消化率高2.66%，但差異不顯著（P＞0.05）。各處理組的組氨酸、蘇氨酸的表觀回腸消化率差異極顯著 （P＜0.01），PKM-2組的組氨酸和蘇氨酸的表觀回腸消化率比PKM-1分別提高17.63%和70.42%，PKM-3組的組氨酸和蘇氨酸的表觀回腸消化率比PKM-1分別提高36.62%和95.55%，PKM-3組的組氨酸和蘇氨酸的表觀回腸消化率比PKM-2分別提高16.14%和14.74%；其余氨基酸中除半胱氨酸外，PKM-2、PKM-3的表觀回腸消化率均極顯著高于PKM-1（P＜0.01）；PKM-3組半胱氨酸的表觀回腸消化率極顯著高于PKM-1和PKM-2（P＜0.01），PKM-1與PKM-2組半胱氨酸的表觀回腸消化率之間差異不顯著 （P＞0.05），但后者比前者高2.48%。

表5 不同處理棕櫚仁粕對肉仔雞表觀回腸消化率的影響 %

2.3 不同處理棕櫚仁粕對肉仔雞標準回腸消化率的影響 由表6可知，PKM-2和PKM-3飼喂組肉雞的粗蛋白質(zhì)標準回腸消化率極顯著高于PKM-1 組 （P＜0.01），PKM-3比PKM-2組蛋白質(zhì)的標準回腸消化率高3.05%，但差異不顯著（P＞0.05）。各處理組的組氨酸、半胱氨酸的氨基酸標準回腸消化率差異均不顯著（P＞0.05）；其余氨基酸標準回腸消化率，PKM-2和PKM-3組均極顯著高于PKM-1組（P＜0.01）。PKM-3與PKM-2組所測的所有氨基酸標準回腸消化率差異均不顯著（P＞0.05）。

3 討論

研究表明，飼料中添加酶制劑，可有效改善動物對養(yǎng)分的消化吸收及利用，影響飼料粗蛋白質(zhì)及氨基酸的消化率，但由于酶制劑的種類及劑量、試驗飼糧、試雞種類及試驗條件等各種因素的綜合影響，結(jié)果不一。飼糧中所含抗營養(yǎng)因子愈高，添加相應(yīng)的酶制劑后作用愈明顯，所以使用時應(yīng)根據(jù)飼料特性選取相應(yīng)的復(fù)合酶或單一酶有針對性的添加（姚建國，2001）。因此，針對棕櫚仁粕所含的抗營養(yǎng)因子（Sundu，2015），本試驗飼糧中添加了甘露聚糖酶或甘露聚糖酶和蛋白酶混合酶。

表6 不同處理棕櫚仁粕對肉仔雞標準回腸消化率的影響%

3.1 動物因素及內(nèi)源氨基酸基礎(chǔ)損失量對氨基酸消化率的影響 本試驗以肉仔雞性別和不同處理方法得到的棕櫚仁粕為因變量分別進行單因素方差分析，研究結(jié)果顯示，性別對肉仔雞回腸末端內(nèi)源氨基酸基礎(chǔ)損失量無顯著影響，該結(jié)果與仲菊等（2004）的研究結(jié)果一致。但也有研究者得出不同結(jié)果（宋春玲等，2007），這可能與試驗動物品種、體重、年齡、環(huán)境溫度、測定方法、采食量、纖維素含量及無氮日糧組成等有關(guān) （王旭貞，2016；Adedokun等，2011）。采食量也會影響肉仔雞回腸末端內(nèi)源氨基酸損失，豬的干物質(zhì)采食量與回腸末端內(nèi)源氨基酸及氮損失量呈顯著性相關(guān)（Butts，等）。采食量降低，內(nèi)源氨基酸中的基礎(chǔ)損失量減少（李建濤，2005）。

Ackerson等（1926）首次提出用無氮飼糧法測定母雞內(nèi)源氮損失量。內(nèi)源氨基酸基礎(chǔ)損失量是動物生命活動過程中不可避免的最低損耗，主要由消化液、黏蛋白和脫落的消化道上皮細胞、小肽、氨基酸、氨基化合物和血清白蛋白、細菌及吞噬的毛發(fā)等物質(zhì)組成（宋春玲等，2007），內(nèi)源氨基酸的組成在很大程度上受這些分泌物氨基酸組成的影響。而飼糧中的抗營養(yǎng)因子不同，內(nèi)源氨基酸的基礎(chǔ)損失量也不同（Angkanaporn等，1996）。本試驗棕櫚仁粕經(jīng)不同的方法處理后，含有的抗營養(yǎng)因子水平不同，這可能是造成內(nèi)源氨基酸損失量不同的原因之一。動物采食無氮飼糧后，胰腺分泌的消化酶/淀粉酶和脂肪酶減少，腸道分泌的蛋白質(zhì)總量也減少；而在某些內(nèi)源氨基酸分泌量減少時，有其他個別氨基酸的分泌量顯著增加。16種氨基酸中，回腸末端內(nèi)源氨基酸損失量最高的是纈氨酸，雄性和雌性的平均損失量均為0.95%，最低的是組氨酸，雄性和雌性的平均損失量分別為0.19%和0.14%。這與鄧雪娟（2008）報道基本一致。本試驗試雞自由采食，保證了一定量的采食量，同時也減小了內(nèi)源氨基酸基礎(chǔ)損失對酶解棕櫚仁粕氨基酸消化率的影響，可以有效反映肉仔雞對酶解棕櫚仁粕氨基酸的消化吸收程度，從而為準確配制肉雞飼糧提供參考。

3.2 不同處理酶解棕櫚仁粕對氨基酸消化率的影響 閆奎友等（1999）和郭松林等（2000）認為，飼糧的營養(yǎng)水平、原料的理化特性及飼料的加工方式也對氨基酸消化率有所影響，從而會對酶的效果產(chǎn)生影響。本研究中探討了3種不同處理方法的棕櫚仁粕對肉仔雞氨基酸消化率的影響。

甘露聚糖是棕櫚仁粕中含量較高的抗營養(yǎng)因子，因其具有增加食糜黏性、阻礙消化酶與養(yǎng)分的充分接觸的負面作用（楊鴻昆等，2007），大大降低了營養(yǎng)物質(zhì)的可消化性，限制了棕櫚仁粕在畜禽養(yǎng)殖中的廣泛應(yīng)用。由于酶的提取成本和工藝難度等問題，復(fù)合酶制劑使用較為普遍（周小喬等，2010），目前使用的蛋白酶大都作為復(fù)合酶的一部分，蛋白酶催化蛋白質(zhì)水解為各種氨基酸，從而提高氨基酸消化利用率（張澤虎，2015）。添加外源性飼用酶制劑是消除甘露聚糖等抗營養(yǎng)因子抗營養(yǎng)作用，提高棕櫚仁粕營養(yǎng)價值的一種有效手段。Isshiki等（1984）與Tishenkova等（1986）研究結(jié)果表明，飼糧中添加單酶或復(fù)合酶制劑可提肉雞對粗蛋白質(zhì)的消化率。在棕櫚仁粕飼糧中加入甘露聚糖酶可提高蛋雛雞蛋白質(zhì)消化率 （陳權(quán)軍等，2011）。在櫻桃谷肉鴨含棕櫚仁粕的飼糧中添加甘露聚糖酶后，除了甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸外，棕櫚仁粕其他氨基酸的消化率都得到提高，總氨基酸消化率提高2.14%（張輝華，2012）。同時，棕櫚仁粕本身是極好的精氨酸來源，利用率高于90% （Nwokolo等，1976），并且與蛋氨酸和賴氨酸的營養(yǎng)需要相互關(guān)聯(lián)（Chamruspollert，2002），蛋氨酸的需要量隨精氨酸水平的增加而增加（Chamruspollert，2004）。棕櫚仁粕不能滿足肉仔雞對于必需氨基酸中蛋氨酸和賴氨酸的需求 （金靈等，2009），本研究中PKM-2和PKM-3組的蛋氨酸、賴氨酸和精氨酸消化率均顯著提高，PKM-2比PKM-1組蛋氨酸、賴氨酸和精氨酸的標準回腸消化率分別提高26.18%、37.45%和6.07%，PKM-3 比PKM-1組的蛋氨酸、賴氨酸和精氨酸的標準回腸消化率分別提高26.30%、48.60%和7.80%。因此，在肉仔雞的實際飼糧配方中需特別注意蛋氨酸和賴氨酸的量。Kocher（2002）將含有較高劑量的蛋白酶等復(fù)合酶制劑添加到肉雞飼糧中時，豆粕飼糧的回腸蛋白質(zhì)消化率提高。綜上研究結(jié)果，均與本研究結(jié)果一致。Silversides等（1999）指出，酶不但可顯著提高蛋白質(zhì)消化率，同時對氨基酸消化率的影響因氨基酸不同而異。本研究中不同處理棕櫚仁粕組的組氨酸、蘇氨酸的表觀回腸消化率之間差異極顯著 （P＜0.01）；PKM-3組半胱氨酸的表觀回腸消化率極顯著高于PKM-1和PKM-2組（P＜0.01），提高了15.18%，PKM-1與PKM-2半胱氨酸的表觀回腸消化率之間差異不顯著（P＞0.05），但后者比前者提高了2.48%。除組氨酸和半胱氨酸外，PKM-2和PKM-3的標準回腸消化率均極顯著高于PKM-1（P＜0.01）。除半胱氨酸外，PKM-2與PKM-3組的表觀回腸消化率均極顯著高于PKM-1組（P＜0.01）。表明酶解棕櫚仁粕可提高大部分氨基酸的表觀回腸消化率和標準回腸消化率。但PKM-2與PKM-3組所有氨基酸標準回腸消化率差異均不顯著 （P＞0.05），表明PKM-2與PKM-3對氨基酸消化率的作用效果幾乎一致，添加蛋白酶后的棕櫚仁粕對肉仔雞限制性氨基酸的消化率沒有顯著影響。

3.3 氨基酸消化率在生產(chǎn)中的應(yīng)用價值 氨基酸消化率是評定飼料原料營養(yǎng)價值和可利用性的重要指標，實際生產(chǎn)中配制肉雞飼糧時，氨基酸水平通常是根據(jù)飼料原料表中氨基酸的化學分析值計算所得，并沒有考慮肉雞消化吸收過程中對氨基酸的利用率，而家禽對不同飼料原料中氨基酸的消化率差異較大。研究表明，用可消化氨基酸配制飼糧，能夠使飼糧氨基酸組成滿足動物生長的需要，從而減少飼料蛋白質(zhì)的浪費，降低飼料成本，并且能夠使家禽的生產(chǎn)潛力得到最大限度的發(fā)揮（Adedokun等，2007）。本試驗結(jié)果表明，配方中棕櫚仁粕的添加量為60%，同時補充適量的蛋氨酸、賴氨酸，不影響肉雞死亡率，且用甘露聚糖酶液或甘露聚糖酶和蛋白酶混合酶液酶解后，棕櫚仁粕蛋白質(zhì)和大部分氨基酸的消化率均顯著提高（P＜0.05），可有效替代部分能量和蛋白質(zhì)飼料原料（趙大鵬，2011）。目前，棕櫚仁粕比豆粕便宜1300元/t左右，酶或復(fù)合酶的成本只有3～5元/ t，棕櫚仁粕氨基酸消化率的高低會嚴重影響飼料成本。因此，用可消化氨基酸配制肉雞飼糧，在確保不影響肉雞生產(chǎn)性能的前提下，能夠有效改善飼料成本。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，棕櫚仁粕經(jīng)甘露聚糖酶酶液或甘露聚糖酶和蛋白酶混合酶液酶解后，其蛋白質(zhì)和大部分氨基酸的消化率均得到改善，其中表觀回腸氨基酸消化率以蘇氨酸提高幅度最大，標準回腸氨基酸消化率以賴氨酸提高幅度最大。棕櫚仁粕中添加甘露聚糖酶酶液或甘露聚糖酶和蛋白酶混合酶液對標準回腸氨基酸消化率無顯著影響。

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This experiment was conducted to study the effect of mannase en扎ymatic hydrolysis palm kernel meal （PKM-2），protease en扎ymatic hydrolysis palm kernel meal（PKM-3）on ileal amino acid digestibility in broilers.A total of 192 1-day-old Cobb broilers with nearly same weights were randomly assigned to 4 treatment groups.Broilers of experimental groups were fed semi-purified diets which consisted of three kinds of PKM and nitrogen-free diet.Ileal digesta of all broilers were collected at the age of 35 day.The results showed that：（1）There was no significant difference on the broilers of basis endogenous amino acid loss for sex（P＞0.05）；（2）The apparentileal digestivility（AID）of crude protein and amino acids（without cysteine）in PKM-2 and PKM-3 were improved significantly（P＜0.01）.The standard ileal digestibility（TID）of crude protein and amino acids（without histidine and cysteine）were improved significantly（P＜0.01）. PKM-3 was higher 2.66%than PKM-2 protein AID，but there were no significant differences between PKM-2 and PKM-3 （P＞0.05）.There were no significant differences between PKM-2 and PKM-3 acids TID（P＞0.05）.In conclusion，the digestibility of the protein and majority amino acid of en扎ymatic hydrolysis palm kernel meal was improved.

palm kernel meal；broiler；amino acid digestibility；mannanase；protease

S816.7

A

1004-3314（2017）02-0029-06

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170208

*通訊作者