馮建芳，李秋鳳，3，高艷霞，3，李 妍，曹玉鳳，3，李建國，3＊，李運起，3

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，河北保定 071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，河北保定 071001；3.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)養(yǎng)牛科學(xué)研究所，河北保定 071001）

科學(xué)實驗研究

全株玉米青貯飼料、苜蓿及谷草間組合效應(yīng)的研究

馮建芳1，李秋鳳1，3，高艷霞1，3，李 妍2，曹玉鳳1，3，李建國1，3＊，李運起1，3

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，河北保定 071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，河北保定 071001；3.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)養(yǎng)?？茖W(xué)研究所，河北保定 071001）

本試驗旨在研究全株玉米青貯（WCS）、苜蓿干草（AH）及谷草（MS）間的組合效應(yīng)。將WCS與AH以100∶0，80∶20，60∶40，50∶50，40∶60，20∶80，0∶100 7種比例組合，篩選出WCS與AH間的最優(yōu)組合，將此組合再與MS按照上述7種比例組合。通過體外發(fā)酵技術(shù)測定72 h產(chǎn)氣量 （GP），檢測體外培養(yǎng)液72 h的干物質(zhì)消失率（DML）、NH3-N、微生物蛋白（MCP）及揮發(fā)性脂肪酸（VFA）產(chǎn)量，并計算各個指標的單項組合效應(yīng)指數(shù)（SFAEI）和多項組合效應(yīng)指數(shù)（MFAEI）。結(jié)果表明：在不同比例WCS與AH的組合中，72 h累積GP及DML均以80∶20組合最高（P＜0.01），且隨著AH比例的增加而降低；MCP產(chǎn)量、NH3-N濃度及VFA隨著AH比例的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在60∶40組合時MCP產(chǎn)量最大（P＜0.05）；GP與DML的SFAEI在80∶20組合最大，其他指標的SFAEI均在60∶40組合最大，MFAEI以60∶40組合最大。在WCS-AH最優(yōu)組合（60∶40）與MS的組合中，72 h GP與DML以100∶0組合最高（P＜0.01），并且隨著MS比例的增加而降低；其余三個指標均為80∶20組合最大；GP及DML的SFAEI均以60∶40組合最大，其余三個指標的SFAEI及MFAEI均以80∶20組合最大。綜上，在本試驗設(shè)計條件下，WCS、AH 和MS的最適組合比例為48∶32∶20。

全株玉米青貯飼料；苜蓿干草；谷草；組合效應(yīng)

谷草作為反芻動物利用的作物秸稈，由于其蛋白質(zhì)含量低，木質(zhì)素與硅酸鹽含量高，礦物質(zhì)營養(yǎng)也不平衡，單獨飼喂可導(dǎo)致反芻動物采食量和營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率降低（王旭等，2005）。當與其他飼料或日糧一起飼喂時，它們所提供的營養(yǎng)可發(fā)生互作，繼而改變新陳代謝、采食量，但可利用能值或消化率不等于組成該日糧的各種飼料的可利用能值或消化率的加權(quán)和，即產(chǎn)生了組合效應(yīng)（盧德勛等，2000；Mould等，1983）。

在奶牛日糧中搭配比例可以發(fā)揮飼料間的正組合效應(yīng)，避免負組合效應(yīng)，對于改善飼料的營養(yǎng)利用率、降低飼養(yǎng)成本和提高奶牛的生產(chǎn)性能具有重要意義。WCS和AH作為優(yōu)質(zhì)粗飼料已被廣泛應(yīng)用于奶牛的生產(chǎn)，MS因其本身營養(yǎng)成分限制不能作為高產(chǎn)奶牛唯一粗飼料來源，而國內(nèi)外有關(guān)WCS、AH及MS三種粗飼料組合對奶牛影響的報道較少。本試驗采用體外發(fā)酵技術(shù)評價WCS、AH及MS之間組合效應(yīng)，篩選出三種粗飼料的最優(yōu)組合，為提高飼料資源的利用率、降低飼養(yǎng)成本和最大限度的發(fā)揮奶牛的生產(chǎn)性能提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 WCS、AH及MS均來自河北滿城縣同一牛場，飼料制成風(fēng)干樣品粉碎過20目篩，密封保存以備用。經(jīng)測定3種粗飼料營養(yǎng)成分見表1。

表1 三種粗飼料的營養(yǎng)成分（干物質(zhì)基礎(chǔ)）%

1.2 試驗動物及飼養(yǎng)管理 試驗選取3頭處于泌乳中期、健康狀況良好、年齡和體重相近、裝有永久性瘤胃瘺管的成年荷斯坦奶牛用作瘤胃液供體動物。日糧組成采用馮仰廉和陸治年主編的《奶牛營養(yǎng)需要和飼料成分》（修訂第三版）進行配制。TMR飼喂，每日擠奶3次，自由活動和飲水。

1.3 試驗設(shè)計 采用單因子7處理重復(fù)試驗設(shè)計，將WCS與AH干草以100∶0，80∶20，60∶40，50∶50，40∶60，20∶80，0∶100的比例進行組合；篩選出WCS與AH的最優(yōu)組合后再與谷草以這7個比例進行組合，每個組合3個重復(fù)。

1.4 人工瘤胃

1.4.1 人工瘤胃裝置 本試驗參照Menke等（1988）注射器式培養(yǎng)系統(tǒng)進行瘤胃體外發(fā)酵培養(yǎng)。

人工瘤胃裝置主體為恒溫水浴搖床，玻璃注射器（可計量容積為100 mL，前面帶有膠管）作發(fā)酵培養(yǎng)管，注射器每次使用之前洗凈晾干，然后用少量凡士林涂在活塞筒四周，用來減少摩擦和防止漏氣。用前39℃預(yù)熱。

1.4.2 培養(yǎng)液的制備 厭氧人工瘤胃緩沖液（A、B、C、E）按照蘇海涯（2002）方法配制。

取400 mL蒸餾水+0.1 mL（A）液+200 mL（B）液+200 mL（C）液+1 mL（E）液于具塞玻璃瓶中，持續(xù)充入CO2至飽和，置于恒溫水浴中預(yù)熱至39℃待用。臨用前加入40 mL還原劑溶液（E），直至溶液由淡藍色轉(zhuǎn)變?yōu)榻咏鼰o色。

1.4.3 瘤胃液的采集 在早晨飼喂前，將真空泵管經(jīng)瘤胃瘺管進入瘤胃中，在不同位點采集瘤胃液，灌入經(jīng)預(yù)熱達39℃并通有CO2氣體的保溫瓶中，立即蓋嚴瓶口，迅速返回實驗室。將3頭牛的瘤胃液混合，經(jīng)4層紗布過濾于接收瓶中，置于39℃水浴中保存，持續(xù)通入CO2氣體。

1.4.4 體外培養(yǎng)程序 準確稱取不同粗飼料比例的飼料樣品200 mg，置于不同玻璃注射器的前端，注射器內(nèi)充入CO2保持厭氧。抽取始終用CO2氣體飽和的人工瘤胃液30 mL（瘤胃液：培養(yǎng)液體積比為1∶2），排凈注射器中的空氣，用夾子夾住膠管，密閉，記錄刻度，然后在39℃的恒溫水浴搖床中培養(yǎng)72 h。每個樣品設(shè)3個重復(fù)，另設(shè)置3個空白樣品，以消除試驗誤差。

1.5 測定指標與方法 將注射器分別培養(yǎng)72 h，發(fā)酵過程中記錄注射器0、2、4、8、12、18、24、36、48、60、72 h的刻度，計算累計產(chǎn)氣量（GP）。72 h發(fā)酵結(jié)束后，迅速將注射器放入冰水浴中終止發(fā)酵。將注射器中的發(fā)酵液，經(jīng)孔徑50 μm的尼龍布過濾，測定干物質(zhì)消失率（DML）、氨態(tài)氮（NH3-N）、微生物蛋白（MCP）及揮發(fā)性脂肪酸（TVFA）的含量（侯玉潔等，2013）。

1.5.1 GP計算公式

式中：GPt為樣品在t時刻的產(chǎn)氣量，mL；Vt為樣品發(fā)酵t時刻產(chǎn)氣量；V0為空白管t時刻產(chǎn)氣量；W0為樣品干物質(zhì)重，g。

1.5.2 DML 經(jīng)尼龍布過濾的殘渣，用蒸餾水沖洗幾遍，沉淀物65℃烘干48 h，稱重測定DML（侯玉潔等，2013）。

1.5.3 NH3-N 取10 mL濾液，采用靛酚比色法測定發(fā)酵液中的NH3-N濃度（當天測完）（馮宗慈等，1993）。

1.5.4 MCP 采用差速離心法和凱氏定氮法進行測定（Cotta等，1982）。

1.5.5 TVFA 采用外標分析法，利用安捷倫7890A氣相色譜儀（美國）測定（馮志華，2013）。

1.5.6 組合效應(yīng)值的計算 單項組合效應(yīng)指數(shù)（SFAEI）和多項組合效應(yīng)指數(shù)（MFAEI）參照王旭（2003）所用方法計算。

SFAEI=（組合后實測值-加權(quán)估算值）/加權(quán)估算值；

加權(quán)估算值=一種飼料的實際測定值×所占比例+另一種飼料的實際測定值×所占比例；

MFAEI為各單項組合效應(yīng)值之和。

1.6 數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)采用Excel軟件進行初步處理，然后利用SPSS 19.0中的ANOVA程序進行方差分析，差異顯著時用Duncan’s法進行多重比較。試驗結(jié)果用“平均數(shù)±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 WCS與AH的組合效應(yīng)

2.1.1 不同比例WCS和AH組合對GP的影響WCS與AH體外培養(yǎng)72 h產(chǎn)氣量變化曲線如圖1，各組隨著培養(yǎng)時間的增加，累積產(chǎn)氣量均逐漸升高，然后趨于平緩；隨著AH比例的增加，GP呈現(xiàn)遞減的趨勢。72 h時，80∶20組合累積GP最高，為230.63 mL，60∶40組合為227.49 mL，兩者之間差異不顯著 （P＞0.05），80∶20極顯著高于其他5個組合 （P＜0.01），它比100∶0、50∶50、40∶60、20∶80、0∶100組合分別提高了8.84%、7.36%、9.18%、12.92、19.40%。單一WCS的產(chǎn)氣量比單一AH的產(chǎn)氣量高9.71%（P＜0.01）。

2.1.2 不同比例WCS和AH組合對發(fā)酵指標的影響 由表2可知，在不同比例WCS與AH的組合中，除100∶0組合外，DML隨著WCS比例的增加而增加。其中，80∶20組合DML與60∶40差異不顯著（P＞0.05），但極顯著高于其他5個組合（P＜0.01），它比100∶0、50∶50、40∶60、20∶80、0∶100組合分別提高了 9.54%、5.41%、11.51%、13.82%、 16.53%；MCP產(chǎn)量隨著AH比例的增加，呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢，在60∶40時最大，80∶20、50∶50、40∶60、20∶80、0∶100組合間差異不顯著 （P＞0.05），單一AH的MCP產(chǎn)量高于單一WCS組（P ＜0.01）；NH3-N濃度各組合達到差異極顯著水平（P＜0.01），變化范圍為12.41～14.19 mg/dL，其中60∶40組濃度最大；TVFA的變化趨勢與MCP產(chǎn)量趨勢相同，各組之間差異極顯著（P＜0.01），60∶40組合達到了最大值67.27 mmol/L，分別比單一WCS、AH增加了9.58%、17.81%。

圖1 不同比例WCS與AH組合的產(chǎn)氣量變化曲線

表2 不同比例WCS與AH組合的72 h體外培養(yǎng)液中DML、MCP、NH3-N及TVFA濃度

2.1.3 各組合的單項組合效應(yīng)和多項組合效應(yīng)由表3可知，各比例組合間的GP和DML均產(chǎn)生了正組合效應(yīng)，且兩個指標的各比例組合效應(yīng)的變化規(guī)律一致，均在80∶20時SFAEI最高；MCP與TVFA均在60∶40時SFAEI最大，此后隨著AH比例的增加組合效應(yīng)值逐漸減小，20∶80時為負組合效應(yīng)；NH3-N濃度各比例的SFAEI均為正值，60∶40組合SFAEI最大。由MFAEI可以看出，60∶40時組合效應(yīng)值最大，即為WCS與AH的最佳比例。

2.2 不同比例WCS-AH最優(yōu)組合與MS的組合效應(yīng)

表3 不同比例WCS與AH組合體外培養(yǎng)72 h的組合效應(yīng)

2.2.1 不同比例WCS-AH最優(yōu)組合與MS組合對GP的影響 WCS-AH與MS體外培養(yǎng)72 h產(chǎn)氣量變化曲線如圖2，各組產(chǎn)氣量隨著培養(yǎng)時間的延長而增加，72 h各比例組合產(chǎn)氣量從高到低順序依次為100∶0＞80∶20＞60∶40＞50∶50＞40∶60＞20∶80＞0∶100；72 h累積產(chǎn)氣量 100∶0組達到了237.46 mL，與80∶20之間差異不顯著（P＜0.01），但極顯著高于其他組合（P＜0.01），并分別比其他組提高了4.00%、7.68%、8.83%、11.21%、15.26%。

圖2 不同比例WCS-AH與MS組合的產(chǎn)氣量變化曲線

2.2.2 不同比例WCS-AH最優(yōu)組合與MS組合對發(fā)酵指標的影響 由表4可知，各比例組合的DML隨著MS比例的增加而降低，與產(chǎn)氣量變化趨勢相同；100∶0，80∶20，60∶40組合的DML極顯著高于其他組合（P＜0.01），但三組之間差異不顯著（P＞0.05）；50∶50與40∶60組合DML之間差異不顯著（P＞0.05），但均高于20∶80（P＜0.05）和0∶100組合 （P＜0.01）。MCP產(chǎn)量在80∶20組合最高，為0.95 mg/mL，此后隨著MS比例的增加呈現(xiàn)下降的趨勢。各組之間NH3-N濃度差異不顯著 （P＞0.05），其變化趨勢與MCP產(chǎn)量的變化相同。各比例組合之間TVFA差異極顯著（P＜0.01），80∶20組濃度極顯著高于其他組合（P＜0.01），比100∶0，60∶40，50∶50，40∶60，20∶80，0∶100分別提高了6.98%，10.52%，15.28%，20.06%，22.55%，28.06%。

表4 不同比例WCS-AH最優(yōu)組合與MS組合的體外72 h培養(yǎng)液DML、MCP、NH3-N及TVFA濃度

2.2.3 各組合的單項組合效應(yīng)和多項組合效應(yīng)由表5可知，各比例組合中，80∶20，60∶40，20∶80組合的GP為正組合效應(yīng)，其他比例組合為負組合效應(yīng)，60∶40出現(xiàn)最大SFAEI，為0.015；50∶50組合的DML為負組合效應(yīng)，其他比例組合為正組合效應(yīng)，SFAEI最大組合為60∶40；80∶20組合MCP的SFAEI最大，各比例組合隨著MS比例增加，組合效應(yīng)值逐漸降低，由正值逐漸變?yōu)樨撝?；NH3-N組合效應(yīng)最大值及變化趨勢與MCP相同，但從50∶50開始已變?yōu)樨摻M合效應(yīng)；TVFA組合效應(yīng)值變化范圍為-0.011～0.106；MFAEI從大到小組合依次為80∶20、60∶40、50∶50、40∶60、20∶80，其值分別為 0.324、0.178、0.011、-0.035、-0.137，可以得出WCS-AH最優(yōu)組合與谷草最優(yōu)搭配比例為80∶20。

表5WCS-AH與MS不同比例組合體外培養(yǎng)72 h的組合效應(yīng)

3 討論

3.1 不同飼料組合對產(chǎn)氣量及其組合效應(yīng)值的影響 瘤胃中的氣體主要來源于飼料中碳水化合物和蛋白質(zhì)的發(fā)酵，瘤胃發(fā)酵的產(chǎn)氣量可綜合反映飼料的發(fā)酵程度?？砂l(fā)酵有機物含量與瘤胃微生物的活性和產(chǎn)氣量呈正相關(guān)，瘤胃微生物活力也取決于瘤胃能氮平衡程度 （孫國強等，2014；史卉玲等，2013）。

不同比例WCS和AH、WCS-AH和MS組合均隨著發(fā)酵時間的延長產(chǎn)氣量逐漸增加，然后趨于平緩，這是由于發(fā)酵前期底物逐漸被瘤胃微生物利用，當可降解底物越來越少時，產(chǎn)氣量也逐漸減少。當WCS與AH比例為80∶20時產(chǎn)氣量最大，可能此時能氮平衡的比例最佳，此后隨AH比例的增加產(chǎn)氣量逐漸下降，可能是因為AH增加，使飼料組合中蛋白質(zhì)含量增加，可溶性碳水化合物相對減少所致。也有研究表明，與飼料中碳水化合物相比，蛋白質(zhì)發(fā)酵產(chǎn)生的氣體較少，產(chǎn)氣量主要與碳水化合物的消化程度有關(guān)（布同良，2006）。當不同比例WCS-AH最優(yōu)組合與MS進行組合時，比例為100∶0時產(chǎn)氣量最高，而后隨著MS比例的增加，產(chǎn)氣量逐漸減少。原因可能是因為MS中木質(zhì)素含量較高，而木質(zhì)素和纖維素之間形成的酯鍵，使其緊密地鑲嵌在一起，阻礙了纖維分解菌的降解能力，產(chǎn)氣量越來越少，從而導(dǎo)致隨著MS比例的升高組合效應(yīng)值逐漸由正組合效應(yīng)變?yōu)樨摻M合效應(yīng)（郝英飛，2007）。

3.2 不同飼料組合對DML及其組合效應(yīng)值的影響 干物質(zhì)的消失主要是蛋白質(zhì)、脂肪、纖維素等物質(zhì)在培養(yǎng)過程中被消化的過程 （劉桂瑞等，2008）。DML在一定程度上反映了飼料營養(yǎng)成分在動物體內(nèi)的降解程度或利用程度。瘤胃微生物活性越強，DML越高，飼料的可利用程度越高。

本試驗中WCS和AH組合及其WCS-AH和MS組合干物質(zhì)降解率與產(chǎn)氣量的變化規(guī)律一致，這與袁翠林等（2015）、張文璐等（2009）和李莉等（2001）報道的產(chǎn)氣量與底物消失率存在高度正相關(guān)的結(jié)果相一致。WCS與AH組合，所有組合SFAEI均為正值，可能是因為兩者組合后提供了足夠的氮源和碳源，以及一些必需的礦物質(zhì)元素，比單一飼料營養(yǎng)成分和結(jié)構(gòu)更加合理，更適合微生物的生長和發(fā)酵。WCS-AH與MS組合后，60∶40組的SFAEI最大，然后隨著MS比例增加，SFAEI降低甚至出現(xiàn)負值，說明適量的MS可以提高組合效應(yīng)值，過高其組合可發(fā)酵程度降低，組合效應(yīng)值隨之減小。

3.3 不同飼料組合對NH3-N及其組合效應(yīng)值的影響 NH3-N是奶牛日糧中蛋白質(zhì)及非蛋白氮在瘤胃中的分解產(chǎn)物，其濃度不僅受日糧蛋白質(zhì)水平影響，還與瘤胃壁的吸收、瘤胃微生物對氨態(tài)氮的利用效率、瘤胃食糜的外流速率、碳水化合物特性和能氮釋放速率有關(guān)（王雅倩等，2008；馮仰廉，2004）。NH3-N濃度是衡量瘤胃氮代謝的一個重要指標，它綜合反映了日糧中可降解蛋白質(zhì)數(shù)量與瘤胃微生物蛋白質(zhì)合成狀況。NH3-N作為合成微生物蛋白質(zhì)的重要前提物質(zhì)，濃度過低會影響微生物蛋白質(zhì)的合成，過高則表明氨的釋放速度大于微生物的利用和吸收速度，導(dǎo)致氨的浪費（孫國強等，2013）。因此，保持瘤胃液中最適NH3-N濃度是保證微生物蛋白質(zhì)合成的首要條件。

Preston等（1995）認為瘤胃液中NH3-N濃度范圍在6～20 mg/dL時，瘤胃微生物生長不受限制。也有研究表明瘤胃中最佳NH3-N濃度為6.3～27.5 mg/dL（Calsamiglia等，2002）。本試驗中WCS 和AH組合以及WCS-AH和MS組合NH3-N濃度的范圍分別為 12.41～14.19 mg/dL，10.46～11.55 mg/dL，均在正常范圍內(nèi)。WCS與AH組合，NH3-N濃度及其SFAEI隨著AH比例的增加，呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，由于AH干草的蛋白質(zhì)為WCS的1.84倍左右，彌補了WCS蛋白質(zhì)的不足，為瘤胃微生物提供了較充足的氮源，在60∶40時SFAEI達到最高。而后隨著AH比例的增加逐漸下降，可能是因為AH可發(fā)酵碳水化合物含量相對較低，可降解氨與可發(fā)酵碳水化合物之間比例失衡，導(dǎo)致NH3-N逐漸下降，SFAEI逐漸降低 （楊麗，2007）。不同比例WCS-AH與MS組合中，隨著MS比例的增加NH3-N濃度及SFAEI逐漸下降，主要原因是MS可降解蛋白質(zhì)含量較低所致。

3.4 不同飼料組合對MCP及其組合效應(yīng)值的影響 MCP是反芻動物重要的氮源，可以滿足反芻動物蛋白質(zhì)需要量的40%～80%。瘤胃MCP的合成關(guān)鍵取決于瘤胃內(nèi)碳水化合物、氮的利用效率和瘤胃的能氮平衡 （馬百順，2008）。許多研究表明，瘤胃氨和能量的不同步釋放會降低微生物生長和微生物蛋白質(zhì)的合成，從而影響動物生產(chǎn)性能的發(fā)揮，所以能氮比適宜，瘤胃微生物蛋白質(zhì)合成效率會得到較大地提高 （史卉玲，2013；Maeng等，1997）。

WCS和AH組合及WCS-AH和MS組合的MCP產(chǎn)量的變化趨勢與NH3-N濃度的變化趨勢一致，這與袁翠林等（2015）的試驗結(jié)果一致。WCS 和AH組合，MCP與SFAEI均在60∶40時最高，說明該組合能量及氨的利用效率最高。WCS-AH和MS組合，80∶20組合MCP及SFAEI最高，說明此時瘤胃環(huán)境有利于MCP的生成，然而隨著MS比例的增加，逐漸降低。Hoover等（1991）研究認為，日糧中非結(jié)構(gòu)性碳水化合物（NSC）與結(jié)構(gòu)性碳水化合物（SC）比例是影響MCP的重要因素，可能是由于MS比例的增加，造成NSC與SC的比例改變，抑制了微生物蛋白質(zhì)的合成。

3.5 不同飼料組合對VFA及其組合效應(yīng)值的影響 反芻動物瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生的VFA是其生存、生長、泌乳、繁殖的主要能源，約占總能量的70%～80%。瘤胃發(fā)酵產(chǎn)生的VFA主要包括乙酸、丙酸、丁酸，約占總酸的95%。瘤胃中VFA濃度是反映瘤胃中碳水化合物消化率高低和衡量瘤胃微生物活力的重要指標 （呂永艷等，2012）。WCS和AH以及WCS-AH和MS分別在60∶40、80∶20組合總揮發(fā)性脂肪酸（TVFA）濃度及組合效應(yīng)值最高，說明這兩個組合碳水化合物消化率及微生物活力都達到最佳。TVFA最高的組合與MCP最高的組合相同，這與孫麗莎等（2015）的試驗結(jié)果一致，可能是因為在飼料發(fā)酵產(chǎn)生VFA的同時也產(chǎn)生了大量的ATP，而這些ATP可被微生物作為能源用于維持和生長，特別是用于MCP的合成，所以VFA高的組合，MCP也較高。

4 結(jié)論

在本試驗條件下，WCS與AH的適宜配比為60∶40；WCS、AH和MS三種粗飼料間的適宜搭配比例為48∶32∶20。

[1]布同良.體外產(chǎn)氣法評定青貯玉米、羊草和苜蓿之間的組合效應(yīng)：[碩士學(xué)位論文][D].杭州：浙江大學(xué)，2006.

[2]馮志華.蒺藜皂苷對奶牛瘤胃發(fā)酵，甲烷產(chǎn)量，抗氧化功能及免疫功能的影響：[博士學(xué)位論文][D].保定：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

[3]馮宗慈，高民.通過比色法測定瘤胃液氨氮含量方法的改進[J].內(nèi)蒙古畜牧科學(xué)，1993，4：40~41.

[4]馮仰廉.反當動物營養(yǎng)學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2004.122~337.

[5]郝英飛.不同粗飼料配比對奶牛消化代謝和生產(chǎn)性能的影響：[碩士學(xué)位論文][D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[6]侯玉潔，徐俊，吳春華，等.5種不同牧草在奶牛瘤胃中降解特性的研究[J].中國奶牛，2013，16：4~8.

[7]盧德勛.飼料的組合效應(yīng)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000.289~294.

[8]劉桂瑞，薛樹媛.利用體外發(fā)酵多項指標綜合評定法優(yōu)選泌乳牛日糧配方[J].中國奶牛，2008，2：14~17.

[9]李莉.體外法研究肽對瘤胃液pH、氨氮濃度、菌體蛋白氮濃度、中性洗滌纖維降解率及其產(chǎn)氣量的影響[碩士學(xué)位論文][D].呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2001.

[10]呂永艷，蔡李逢，崔海靜，等.奶牛日糧中復(fù)合處理玉米秸稈與苜蓿及精料的最佳組合研究[J].中國飼料，2012，19：14~17.

[11]馬百順.瘤胃微生物可利用能氮同步化釋放對微生物蛋白效率影響研究：[碩士學(xué)位論文][D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[12]蘇海涯.反芻動物日糧中桑葉與餅粕類飼料間組合效應(yīng)的研究：[碩士論文][D].杭州：浙江大學(xué)，2002.

[13]史卉玲，王連群，席琳喬，等.利用體外產(chǎn)氣法研究苜蓿青貯與玉米青貯組合效應(yīng)的瘤胃發(fā)酵特征[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，50（7）：1353~1359.

[14]史卉玲.不同比例苜蓿青貯與玉米青貯組合對奶牛生產(chǎn)性能的影響：[碩士學(xué)位論文][D].阿拉爾市：塔里木大學(xué)，2013.

[15]孫國強，呂永艷，張杰.利用體外瘤胃發(fā)酵法研究全株玉米青貯與花生蔓和羊草間的組合效應(yīng)[J].草業(yè)學(xué)報，2014，23（3）：224~231.

[16]孫國強，呂永艷.復(fù)合處理麥秸、青貯玉米秸和精料的組合及比例對奶牛體外瘤胃發(fā)酵的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2013，25（1）：69~76.

[17]孫麗莎，李華偉，崔慧慧，等.蠶沙和稻秸不同比例組合對瘤胃微生物體外發(fā)酵的組合效應(yīng)[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2015，27（1）：313~319.

[18]王旭，盧德勛，胡明，等.沙打旺、羊草玉、玉米秸和谷草GI指數(shù)的測定[J].動物營養(yǎng)學(xué)報，2005，17（4）：26~30.

[19]王旭.利用GI技術(shù)對粗飼料進行科學(xué)搭配及綿羊日糧配方系統(tǒng)優(yōu)化技術(shù)的研究：[碩士學(xué)位論文][D].呼和浩特：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

[20]王雅倩，俞路，王春梅，等.日糧蛋白質(zhì)水平對湖羊胃腸道pH、氨態(tài)氮及尿素氮的影響[J].畜牧與獸醫(yī)，2008，40（3）：34~39.

[21]袁翠林，林英庭，于子洋，等.體外產(chǎn)氣法評定青貯玉米秸與豆秸組合的瘤胃發(fā)酵特性[J].糧食與飼料工業(yè)，2015，5：49~53.

[22]袁翠林，于子洋，王文丹，等.豆秸、花生秧和青貯玉米秸間的組合效應(yīng)研究[J].動物營養(yǎng)學(xué)報2015，27（2）：647~654.

[23]楊麗.肉牛日糧中苜蓿、玉米秸稈、精料補充料組合效應(yīng)研究：[碩士學(xué)位論文][D].長春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[24]于騰飛，張杰杰，孫國強.花生蔓與4種粗飼料間組合效應(yīng)的研究[J].動物營養(yǎng)學(xué)報2012，24（7）：1246~1254.

[25]張文璐，李杰，呂元勛.體外產(chǎn)氣法和尼龍袋法評定粗飼料干物質(zhì)降解率的相關(guān)性分析[J].飼料工業(yè)，2009，30（7）：30~32.

[26]Cotta M A，Russelll J R.Effect of peptides and amino acids on efficiency of rumen bacterial protein synthesis in continuous culture[J].J.Dairy Sci，1982，65：226~234.

[27]Calsamiglia S，F(xiàn)erret A，Devant M.Effects of pH and pH fluctuations on microbial fermentation and nutrient flow from a dual-flow continuous culture system[J].J Dairy Sci，2002，85（3）：574~579.

[28]Hoover W H，Stokes S R.Balancing carbohydrates and protein for optimum rumen microbial yield[J].J.Dairy Sci，1991，74：3630~3644.

[29]Menke K H，Steingass H.Estimation of the energetic feed value obtained from chemical analysis and in vitro gas production using rumen fluid[J].Anim ReseDeve，1988，28：7~55.

[30]Mould F L，?rskov E R，Mann S O.Associative effects of mixedfeeds.I. Effects of type and level of supplementation and the influence of the rumen fluid pH on cellulolysis in vivoand dry matterdigestion of various roughages[J]. Anim Feed Sci Tech，1983，10（1）：15~30.

[31]Maeng W J，Park H J.The role of carbohydrate supplementation in microbial protein synthesis in the rumen.In：Onoden et al.Rumen Microbes Digestive physiology in Ruminants[J].Japan Sci.soc.Press，Tokyo karger，Basel，1997：107~119.

[32]Preston T R.Tropical Animal Feeding：A manual for research workers.Fao [M].Italy：FAO，1995：126.■

The objective of this experiment was to study the associative effects of whole corn silage（WCS），alfalfa hay （AH）and millet straw （MS）by gas production technique in vitro.First，WCS was mixed with AH in the proportion of 100∶0，80∶20，60∶40，50∶50，40∶60，20∶80 and 0∶100.Selected out the best combination of WCS and AH（WCS-AH），the WCS-AH was grouped with MS according to the 7 kinds of proportion above.The cultural medium gas production（GP），the dry matter loss（DML），ammonia nitrogen （NH3-N），microbial crude protein（MCP）and volatile fatty acids（VFA）fermented of 72 h were measured，and the single factor associative effects index （SFAEI）and multiply factors associative effects index （MFAEI）were calculated.The results showed as follows：In different proportion combinations of WCS and AH，cumulative GP and DML were the highest in 80∶20 combination（P＜0.01），and gradually decreased with the increase of AH ratio；MCP，NH3-Nand VFA concentration presented a trend that increased first and then decreased with the increase of AH ratio，and the production MCP in combination（60∶40）was the largest（P＜0.05）；SFAEI of GP and DMI were the largest in the 80：20 combination，the largest SFAEI of other indicators were in the 60：40 combination，and MFAEI was the largest in the 60∶40 combination.In the optimal combination of WCS-AH（60∶40）and MS，the GP and DML of 72 h were the highest at the ratio of 100∶0 （P＜0.01），and gradually decreased with the increase of MS ratio；the other indicators were the largest in the ratio of 80∶20.SFAEI and MFAEI of GP and DML were the largest at the ratio of 60∶40，SFAEI of other there indicators were the largest at the ratio of 80∶20.In summary，the WCS and AH combination at ratio of 60∶40，WCS-AH and MS combination at the ratio of 80∶20 were found to give the largest associative effects.So，the appropriate proportion of WCS，AH and MS combination was 48∶32∶20.

whole corn silage；alfalfa hay；millet straw；associative effects

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20170203

S816.5

A

1004-3314（2017）02-0010-06

農(nóng)業(yè)部公益性行業(yè)專項（201503134）；河北省科技計劃項目 （16226604D）；國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（CARS-37）；河北省農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系奶牛創(chuàng)新團隊（HBCT2013080201）

*通訊作者