李璀

山東省濟(jì)南市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南 250021

免疫檢測的干擾因素分析和控制措施研究

李璀

山東省濟(jì)南市傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東濟(jì)南 250021

免疫檢測法在實(shí)際應(yīng)用過程中，能夠改變檢測物濃度或者檢測抗體結(jié)合能力，從而對(duì)檢測結(jié)果造成不同程度的影響，具體會(huì)引起檢測結(jié)果出現(xiàn)假性升高或降低的情況對(duì)醫(yī)生臨床疾病診斷評(píng)估產(chǎn)生影響。因此，檢驗(yàn)人員和臨場醫(yī)生在實(shí)際檢測工作中，如果試驗(yàn)檢測結(jié)果與實(shí)際臨床征象不相符合的情況，分析是否存在干擾因素，從而重新進(jìn)行試驗(yàn)和檢測，提升結(jié)果的正確性。

免疫檢測；干擾因素；分析；對(duì)策

在實(shí)際試驗(yàn)過程中，免疫檢測具有敏感性高、標(biāo)本容易處理的特點(diǎn)。但是在一定條件下，免疫檢測的準(zhǔn)確性會(huì)受到不同程度的影響，從而影響到最終的試驗(yàn)結(jié)果。在上個(gè)世紀(jì)70年代的臨床試驗(yàn)研究中，檢測人員就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)免疫法檢測中存在一定的干擾，很多醫(yī)生嘗試著制定解決方案。就目前而言，雖然制定了很多免檢疫檢測方法，但是仍然無法從根本上避免干擾。根據(jù)大量的實(shí)踐證明，免疫檢測干擾因素會(huì)導(dǎo)致檢測物出現(xiàn)不同程度假性升高或者降低的情況，從而影響臨床醫(yī)生對(duì)病情的診斷和評(píng)估，增加不必要的檢查，甚至出現(xiàn)錯(cuò)誤的用藥，導(dǎo)致用量過量，釀成嚴(yán)重的后果[1]。隨著免疫檢測技術(shù)的發(fā)展，在免疫檢測方法和模式上都出現(xiàn)了新的進(jìn)展，取得了一定的成果，對(duì)臨床研究提供了科學(xué)的指導(dǎo)和借鑒。就當(dāng)前的研究證明，人抗動(dòng)物抗體、自身抗體等內(nèi)源性抗體的干擾受到醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注，因此，該文在前人的研究基礎(chǔ)上，首先分析免疫檢驗(yàn)干擾的分類，接著針對(duì)免疫檢測干擾因素和控制措施展開論述，從而為臨床試驗(yàn)提供一定的參考和借鑒。

1 免疫檢測的干擾分類

免疫檢測會(huì)受到抗體特性、抗體原、試劑成分以及檢測方法的影響。在通常情況下，免疫干擾因素主要分為檢測物依賴和非依賴性干擾因素。檢測依賴的干擾因素主要是被檢測標(biāo)本中成分與試劑中的抗體發(fā)生作用，或者檢測物自身抗體與檢測物產(chǎn)生相互作用，進(jìn)一步影響到檢測抗體與檢測物的精確性[2]。檢測物非依賴干擾因素主要是指常見的物質(zhì)受到干擾的因素，具體包括溶血、黃疸以及抗凝物質(zhì)，從而導(dǎo)致樣本儲(chǔ)存存在一定的差異。

1.1 改變被檢測物濃度

對(duì)內(nèi)源性免疫檢測干擾因素而言，在實(shí)際檢測過程中，與標(biāo)本內(nèi)物質(zhì)特性有很大關(guān)系，需要改變被檢測物的濃度，從而影響到到檢測結(jié)果，具體包括激素結(jié)合蛋白和檢測物自身抗體等。

1.1.1 激素結(jié)合蛋白 在標(biāo)本中，急速結(jié)合蛋白可以通過被檢測物或者進(jìn)行解離，從而影響到激素的檢測。比如類固醇能夠有效結(jié)合性激素結(jié)合蛋白等，導(dǎo)致固醇出現(xiàn)游離的情況，降低生長激素檢測結(jié)果[3]。在實(shí)際過程中，人體內(nèi)最高有一半的生長激素與生長激素結(jié)合蛋白形成復(fù)合物，但是生長激素抗原表位就可能被遮蓋，不能與檢測檢測抗體實(shí)現(xiàn)有效的結(jié)合，從而降低檢測的濃度。因此，檢測人員可以利用結(jié)合蛋白變性抑制激素和蛋白的結(jié)合，保證檢測到真實(shí)的血清濃度。另外，在實(shí)際檢測過程中，有的物質(zhì)可以把被檢測物從激素結(jié)合蛋白中替換出來，從而影響到物質(zhì)檢測的計(jì)算方法，導(dǎo)致被檢測物出現(xiàn)升高或者下降的問題。

1.1.2 檢測物自身抗體 在進(jìn)行多種免疫檢測方法中，對(duì)自身抗體會(huì)產(chǎn)生一定的影響，在通常情況下，自身抗體為IgG型，導(dǎo)致這類抗體親和力高，對(duì)傳功的免疫鑒定法產(chǎn)生較強(qiáng)的干擾，具體包括酶類、肌鈣蛋白以及甲狀腺激素等。其中血漿巨泌乳素主要由泌乳素和自身抗體形成的巨分子復(fù)合物，在患者無腦垂體疾病的情況下，血中巨泌乳素就會(huì)到泌乳素檢測結(jié)果呈現(xiàn)出假性升高的現(xiàn)象，從而導(dǎo)致醫(yī)生臨床診斷為高泌乳素血癥，從而采取不合理的處理方法，導(dǎo)致非常嚴(yán)重的后果[4]。因此，為了滿足實(shí)際需要，在實(shí)際試驗(yàn)過程中，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室要采用泌乳素檢測系統(tǒng)受到巨泌乳素干擾受到實(shí)際情況的，對(duì)患者是否存在巨泌乳素進(jìn)行精確判斷。

1.2 通過改變被檢測物與相應(yīng)抗體結(jié)合影響檢測結(jié)果

內(nèi)源性干擾伊蘇主要通過干擾抗原體，從而影響到最終的檢測結(jié)果，具體包括異嗜性抗體、HAAA等。

①異嗜性抗體主要包括天然抗體和自然抗體，但是針對(duì)的抗原不算很明確，在通常情況，能夠與2種或者以上其他物種抗體發(fā)生反應(yīng)，親和力比較低。并且獨(dú)特型坑提能夠結(jié)合到被檢測抗原上，從而影響到免疫檢測抗原抗體的結(jié)合以及后期的檢測結(jié)果。在實(shí)際過程中，獨(dú)特型抗體和自然產(chǎn)生的免疫源性的RF，是造成異嗜性干擾的重要因素[5]。RF是患者體內(nèi)針對(duì)變形的lgG的內(nèi)源性IgM抗體，可模擬異嗜性抗體作用在實(shí)際過程中，會(huì)直接連接ELISA法，進(jìn)而捕獲抗體和檢測抗體，引起假陽性抗體。異嗜性抗體主要采用非競爭性機(jī)制，進(jìn)行干擾免疫檢測，傳統(tǒng)的雙位點(diǎn)免疫鑒定非免疫球蛋白抗原過程中，異嗜性抗體可以直接捕獲和檢測抗體，就會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果。并且實(shí)際檢測過程中，同一種異嗜性抗體對(duì)不同測試劑中抗體組合反應(yīng)就會(huì)出現(xiàn)不同的結(jié)果。因此，在利用不同監(jiān)測試劑檢測過程中，需要對(duì)異嗜性抗體干擾差異性進(jìn)行分析。

②HAAA，就是具有很高親和力特異性多克隆抗體。在實(shí)際應(yīng)用過程中，主要包括人抗免疫球蛋白、人抗動(dòng)物白蛋白。隨著動(dòng)物原型診斷和治療機(jī)制的運(yùn)用，證明了HAAA的存在，比如人抗小鼠抗體、抗兔、抗山羊體等。HAAA與抗原具有很強(qiáng)的結(jié)合性，在血清中滴度較高，可以在試劑中，根據(jù)抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，從而影響到最終的檢測結(jié)果[6]。在進(jìn)行多種物質(zhì)檢測過程中，就會(huì)受到HAAA的干擾，具體包括心臟標(biāo)志物、甲狀腺激素以及腫瘤標(biāo)志等。采用雙位點(diǎn)免疫分析分方法，更容易受到血清HAAA的干擾，當(dāng)檢測試劑中抗體的物種來源與血清中一樣，就會(huì)產(chǎn)生更加明顯的干擾，影響到檢測的效果。

在實(shí)際檢測試驗(yàn)過程中，其他影響抗體結(jié)合干擾免疫法檢測的蛋白，具體包括補(bǔ)體、副蛋白等。補(bǔ)體主要通過結(jié)合免疫球蛋白的Fc段，從而阻斷被檢測與抗體的特異性結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致干擾被檢測物，這種干擾可以有效抑制被檢測物與捕獲抗體和檢測抗體的結(jié)果。

2 免疫檢測干擾因素的分析

在實(shí)際檢測過程中，受到各種干擾因素的影響，會(huì)產(chǎn)生過重假陽性和假陰性結(jié)果，從而導(dǎo)致醫(yī)生對(duì)臨床疾病產(chǎn)生誤判和誤診，甚至進(jìn)行錯(cuò)誤的治療。因此，為了滿足實(shí)際需要，在要重視免疫檢測中的干擾因素。當(dāng)檢測結(jié)果與臨床征象出現(xiàn)不相符的情況時(shí)，臨床醫(yī)生要與檢驗(yàn)師進(jìn)行溝通和交流，從而全面了解免疫檢驗(yàn)可能出現(xiàn)的干擾因素。作為檢驗(yàn)醫(yī)師，需要了解疾病臨床知識(shí)和疾病治療方案以及動(dòng)員源性診斷和治療性抗體等病史。在實(shí)際鑒別過程中，可以采用以下方法，①采用標(biāo)本稀釋液方法，就是按照一定比例進(jìn)行稀釋以后，再進(jìn)行檢測，然后對(duì)被檢測物進(jìn)行觀察，是否存在線性的變化。②利用另外一物種來源的檢測抗體進(jìn)行，或者選擇另外一種檢測方法，從而有效降低干擾。③針對(duì)實(shí)際的標(biāo)本，采用不同濃度的阻斷劑和不同物種來源的混合阻斷劑，在進(jìn)行阻斷以后，再進(jìn)行檢測。④可以直接檢測自身抗體或者異嗜性抗體是否存在。⑤在標(biāo)本中加入一定的標(biāo)準(zhǔn)品以后，然后進(jìn)行回收，再進(jìn)行試驗(yàn)。

在實(shí)際檢測過程中，如果檢測方案會(huì)得出被檢測物具有不同的濃度，從而表明被檢測方案中，存在一定的干擾因素。作為醫(yī)生和檢驗(yàn)而言，雖然大部分檢測系統(tǒng)能夠得到相似的檢測結(jié)果，也不能從根本上排除其他干擾對(duì)檢測結(jié)果的影響。因此，在臨床實(shí)際工作過程中，醫(yī)生要結(jié)合患者實(shí)際身體結(jié)合能力出現(xiàn)的缺陷情況，進(jìn)行科學(xué)合理的分析，控制好最終的檢測結(jié)果。

3 減少免疫檢測干擾控制措施

隨著當(dāng)前檢測技術(shù)的發(fā)展，新的方法和技術(shù)不斷應(yīng)用到實(shí)際免疫檢測過程中，最大限度地減少免疫檢測干擾。就目前而言，如何減少消除免疫檢測中的干擾因素成為當(dāng)前檢驗(yàn)工作面臨的重要問題。

①采用物理化學(xué)以及免疫學(xué)方法。通過凝膠色譜層析法，從待檢標(biāo)本中提取被檢測物以后，在進(jìn)行相應(yīng)的檢測。利用聚乙二醇可以去除HAAA的干擾。對(duì)熱穩(wěn)定的被檢測物，需要進(jìn)行加熱，才能滿足實(shí)際檢測需要。另外，檢測人員還可以利用三氟乙酸沉淀法和陽離子交換層析法，從而消除自身抗體的干擾。

②加入相應(yīng)的阻斷劑。在實(shí)際試驗(yàn)過程中，針對(duì)異嗜性抗體，在通常情況下，可以采用正常動(dòng)物血清的混合物，阻斷非特異性，從而有效地吸收異嗜性抗體，有效減少檢測干擾。但是在實(shí)際過程中，異嗜性抗體具有較弱的親和力和結(jié)合力的，采用上述方法免疫干擾效果不理想。另外，由于不同個(gè)體來源標(biāo)準(zhǔn)干擾因素干擾程度不同，在實(shí)際檢測過程中，很難確定所有標(biāo)本精確的阻斷劑用量。

綜上所述，當(dāng)前對(duì)免疫檢測干擾因素作用機(jī)制進(jìn)行一定研究，但是沒有一種方案能夠完善消除所有的干擾因素。檢測人員要結(jié)合實(shí)際情況，充分認(rèn)識(shí)到干擾的可能性，采用有效的抗干擾措施，避免導(dǎo)致嚴(yán)重的后果。

[1]何淑琴,劉艷琳,張麗鈴.人輸注靜注人免疫球蛋白后對(duì)TP-ELISA法檢測梅毒的干擾因素初探[J].中南藥學(xué),2015 (12)：1256-1258.

[2]吳春龍,陳超超,袁遠(yuǎn),等.酶聯(lián)免疫反應(yīng)加速儀法檢測含干擾因素的HBsAg低值陽性血清的分析與評(píng)價(jià)[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2013(17)：3376-3378.

[3]林天浩,莫恒勤.免疫比濁法檢測糖化血紅蛋白的性能評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2013(11)：60-62.

[4]王偉佳,張秀明,闞麗娟,等.降鈣素原檢測在感染性疾病診斷中的干擾研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2013(13)：3048-3050，3053.

[5]劉蕊,李剛,崔小璠.膽紅素和血紅蛋白對(duì)不同尿白蛋白檢測方法結(jié)果干擾的研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2012(7)：564-567.

[6]陳金超,劉滌瑕,王麗,等.免疫學(xué)檢測方法中的干擾因素和對(duì)策[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2009(21)：2575-2576.

R7

A

1672-5654（2017）04（c）-0049-02

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.12.049

2017-01-26）

李璀(1976-)，女，山東濟(jì)南人，本科，主管檢驗(yàn)師，研究方向：免疫檢驗(yàn)。