黃露露，張藝強(qiáng)，蔡唐彥，賴興泉，盛錄，張英杰，詹正烜，鄭乃熙，蘇友新（福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122）

·博碩園地·

膝骨痹康袋泡熏洗劑的抗炎鎮(zhèn)痛藥效學(xué)研究

黃露露，張藝強(qiáng)，蔡唐彥，賴興泉，盛錄，張英杰，詹正烜，鄭乃熙，蘇友新（福建中醫(yī)藥大學(xué)，福建福州350122）

目的探討膝骨痹康袋泡熏洗劑的抗炎和鎮(zhèn)痛效果，為該制劑在治療膝骨關(guān)節(jié)炎的臨床應(yīng)用提供藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)和小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)，觀察膝骨痹康袋泡熏洗劑對(duì)急性炎癥的影響；通過(guò)大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)，探討其對(duì)慢性炎癥的抑制效果；通過(guò)冰醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)和小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)，探討其鎮(zhèn)痛效果。結(jié)果膝骨痹康袋泡熏洗劑可抑制小鼠耳廓腫脹度、毛細(xì)血管通透性及大鼠棉球肉芽組織生長(zhǎng)，可明顯減少小鼠扭體次數(shù)，提高小鼠的痛閾值。結(jié)論膝骨痹康袋泡熏洗劑有顯著的抗炎和鎮(zhèn)痛效果。

膝骨痹康袋泡熏洗劑；抗炎；鎮(zhèn)痛；藥效學(xué)

膝骨關(guān)節(jié)炎（knee osteoarthritis，KOA）是中老年人常見(jiàn)病，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為其屬“膝骨痹”范疇。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對(duì)此有良好的療效［1-2］，中藥熏洗療法具有藥物與溫?zé)崂懑煹碾p重作用，其療效在KOA臨床治療中得到肯定［3-4］?！肮顷P(guān)節(jié)炎洗方”為導(dǎo)師蘇友新教授外用熏洗治療KOA的經(jīng)驗(yàn)方，由骨碎補(bǔ)、制川烏、紅花等中藥組成，具有祛風(fēng)濕、止痹痛、通經(jīng)絡(luò)、強(qiáng)筋骨之功效，適用于肝腎氣血虛損、風(fēng)寒濕瘀痹阻為基本病機(jī)的KOA患者，對(duì)緩解關(guān)節(jié)疼痛、腫脹，關(guān)節(jié)功能障礙等療效確切［5］。鑒于原方在臨床應(yīng)用過(guò)程中存在煎煮費(fèi)時(shí)、繁瑣等不便因素，課題組前期已進(jìn)行“骨關(guān)節(jié)炎洗方”的劑型改良并制成袋泡劑，命名為“膝骨痹康袋泡熏洗劑”［5］。本研究針對(duì)膝骨痹康袋泡熏洗劑抗炎鎮(zhèn)痛效應(yīng)進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)，旨在為其臨床推廣應(yīng)用提供藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1月齡昆明種小鼠，雄性120只，雌性40只，體質(zhì)量18～22 g；3月齡Wistar大鼠，雄性40只，體質(zhì)量200～220 g。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均為SPF級(jí)，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（滬）2012-0002。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑雙氯芬酸二乙胺乳膠劑（扶他林，北京諾華制藥有限公司，批號(hào)：X4290）；骨關(guān)節(jié)炎洗方藥液：按照臨床用法煎煮而得，將每劑骨關(guān)節(jié)炎洗方173 g原藥材用布包好，先加水3 000 mL，浸泡30 min，煎煮30 min，最后濃縮得藥液2 000 mL，制成每毫升含86.5 mg生藥材的水煎液；膝骨痹康袋泡熏洗劑：由福建中醫(yī)藥大學(xué)中藥制劑研究室制備，每劑173 g原藥材制得74.5 g袋泡劑顆粒，使用時(shí)用2 000 mL的90℃左右熱水沖泡，攪拌5 min，制成每毫升含37.3 mg顆粒劑的袋泡劑藥液（其生藥材濃度同洗方藥液）；冰醋酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20140422）；伊文思藍(lán)（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：W20141201）；二甲苯（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：201504 09）；水合氯醛（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20140509）；注射用青霉素鈉（80萬(wàn)U/支，上海新先鋒藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140902）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器智能熱板儀（成都泰盟軟件有限公司，型號(hào)：RB-200），萬(wàn)分之一電子分析天平（上海精天電子儀器有限公司，型號(hào)：FA604A）；足趾容積測(cè)量?jī)x（安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)：ZH-YLS-7B）；雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司，型號(hào)：TU-1901）；高速低溫離心機(jī)（美國(guó)BECKMAN公司，型號(hào)：64R）；直徑8 mm打孔器（福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心自制）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)取昆明種雄性小鼠40只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組（簡(jiǎn)稱空白組）、骨關(guān)節(jié)炎洗方組（簡(jiǎn)稱洗方組）、膝骨痹康袋泡熏洗劑組（簡(jiǎn)稱袋泡劑組）、扶他林乳膠劑組（簡(jiǎn)稱扶他林組），每組10只?？瞻捉M予（39± 1）℃的溫水濕敷右耳廓30 min；洗方組予（39±1）℃中藥水煎液濕敷右耳廓30 min；袋泡劑組予（39± 1）℃的袋泡熏洗劑濕敷右耳廓30 min；扶他林組用棉簽取扶他林乳膠劑涂擦右耳廓，每次0.05 g/20 g。以上各組均分別于每日9時(shí)與15時(shí)各干預(yù)1次，連續(xù)3 d。于末次干預(yù)30 min后，用二甲苯0.05 mL涂抹小鼠右耳廓致炎，左耳廓不涂做對(duì)照。致炎后30 min，將小鼠脫頸處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑為8 mm的打孔器在兩耳廓相同部位打下圓形耳片，隨即稱重，計(jì)算兩耳片差值作為腫脹度，以此衡量藥物的抗炎效應(yīng)。

腫脹度/mg＝致炎后小鼠右耳平均重量－小鼠左耳平均重量。

1.4.2 小鼠毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)取昆明種雄性小鼠40只，分組及干預(yù)方法同1.4.1，給藥部位為小鼠腹部皮膚。各組小鼠末次干預(yù)后1 h，以0.1 mL/10 g的劑量尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液后，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL/只；30 min后脫頸處死小鼠，剪開(kāi)腹腔，用5 mL生理鹽水沖洗腹腔3次，收集洗滌液；3 000 r/min離心15 min，在紫外分光光度計(jì)590 nm處測(cè)定吸收度（OD值），比較各組平均OD值以評(píng)估藥物對(duì)小鼠毛細(xì)血管通透性增高的影響。

1.4.3 大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)取Wistar雄性大鼠40只，隨機(jī)分成模型組、洗方組、袋泡劑組、扶他林組，每組10只。各組大鼠在無(wú)菌環(huán)境下用10%水合氯醛麻醉，背部右側(cè)肩胛區(qū)靠腋下備皮后用碘酒消毒，75%酒精脫碘后，切開(kāi)1 cm長(zhǎng)的小口，用眼科鑷子將已稱重為20 mg的高壓滅菌棉球，從小切口植入皮下，隨即縫合皮膚后，覆蓋以一次性創(chuàng)可貼。并從手術(shù)當(dāng)日開(kāi)始，每只大鼠每日腹腔注射8萬(wàn)單位青霉素，連續(xù)3 d。各組于術(shù)后第2天開(kāi)始干預(yù)，模型組予以（39±1）℃的溫水濕敷30 min；洗方組予（39±1）℃的中藥水煎液濕敷30 min；袋泡劑組予（39±1）℃的袋泡熏洗劑濕敷30 min；扶他林組用扶他林乳膠劑涂擦，每次0.05 g/20 g。以上各組給藥部位均為離手術(shù)切口周圍1 cm的范圍（避開(kāi)手術(shù)切口），于每日9時(shí)與15時(shí)各干預(yù)1次，從手術(shù)第2天開(kāi)始連續(xù)給藥12 d。第13 d脫頸處死各組大鼠，打開(kāi)原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，放入60℃烘箱中烘干12 h稱重。將稱得的重量減去棉球原重量即得肉芽腫的重量，比較各組平均肉芽腫重量并計(jì)算抑制率以分析各組藥物對(duì)肉芽腫的抑制作用。

肉芽腫抑制率/%＝［（模型組平均肉芽組織重量－給藥組平均肉芽組織重量）/模型組平均肉芽組織重量］×100%。

1.4.4 小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)取昆明種雌性小鼠40只，分組及干預(yù)方法同1.4.1，干預(yù)部位為小鼠雙后足。先將智能熱板儀接通電源，溫度至（55±0.5）℃后，將小鼠依次放入儀器內(nèi)，小鼠從放在熱板上至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間（s）作為該鼠藥前痛閾值（痛覺(jué)反應(yīng)時(shí)間），剔除舔后足時(shí)間＜5 s或＞30 s或跳躍的小鼠，以確保各組小鼠藥前痛閾值具有可比性。各組小鼠分別在末次干預(yù)后0.5、1、2 h測(cè)量藥后痛閾值，痛閾值超過(guò)60 s者按60 s計(jì)算，再統(tǒng)計(jì)藥后以上3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組痛閾提高率的平均值（藥后痛閾值－藥前痛閾值）。

1.4.5 冰醋酸致小鼠扭體實(shí)驗(yàn)取昆明種雄性小鼠40只，分組、干預(yù)方法及給藥部位同1.4.2。各組小鼠末次干預(yù)30 min后腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2 mL/只。觀察并計(jì)算各組小鼠注射冰醋酸溶液后20 min內(nèi)出現(xiàn)的平均扭體次數(shù)，再計(jì)算各組的鎮(zhèn)痛率以評(píng)價(jià)各組藥物對(duì)化學(xué)致痛的抑制效應(yīng)。鎮(zhèn)痛率/%＝［（空白組平均扭體次數(shù)－給藥組平均扭體次數(shù)）/空白組平均扭體次數(shù)］×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料屬正態(tài)分布均以x±s表示，采用t檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)法。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 各組耳廓腫脹度比較見(jiàn)表1。

表1 各組耳廓腫脹度比較

表1 各組耳廓腫脹度比較

注：與空白組比較，1）P＜0.01，2）P＜0.05。

組別空白組扶他林組洗方組袋泡劑組n 10 10 10 10左耳片13.9±1.55 13.2±2.08 12.5±0.99 12.6±11.63右耳片25.97±3.67 19.53±3.63 17.87±3.23 21.05±3.48腫脹度12.03±3.03 6.29±4.511）5.35±3.271）8.36±3.812）

2.1.2 各組吸收度比較見(jiàn)表2。

表2 各組吸收度比較

表2 各組吸收度比較

注：與空白組比較，1）P＜0.01，2）P＜0.05。

組別空白組扶他林組洗方組袋泡劑組n 10 10 10 10吸收度0.745±0.160 0.509±0.1151）0.501±0.1751）0.420±0.1052）

2.1.3各組肉芽腫抑制率比較見(jiàn)表3。

表3 各組肉芽腫抑制率比較

表3 各組肉芽腫抑制率比較

注：與模型組比較，1）P＜0.01；與扶他林組比較，2）P＜0.05；與洗方組比較，3）P＜0.05。

組別模型組扶他林組洗方組袋泡劑組n 10 10 10 10肉芽腫干重量/mg 55.95±7.504 32.71±4.621）36.47±6.661）22.06±1.901）2）3）抑制率/%—41.54 34.82 60.57

2.2 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 各組干預(yù)前后痛閾值比較見(jiàn)表4。

2.2.2 各組鎮(zhèn)痛率比較見(jiàn)表5。

3 討論

本研究抗炎藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：膝骨痹康袋泡熏洗劑在抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、醋酸所致毛細(xì)血管通透性相關(guān)表現(xiàn)的急性炎癥反應(yīng)方面，療效與扶他林和骨關(guān)節(jié)炎洗方相當(dāng)；在抑制大鼠棉球肉芽組織生長(zhǎng)相關(guān)表現(xiàn)的慢性炎癥反應(yīng)方面，療效優(yōu)于扶他林和骨關(guān)節(jié)炎洗方。鎮(zhèn)痛藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在提高小鼠痛閾值及小鼠鎮(zhèn)痛率方面，療效與扶他林相當(dāng)，但優(yōu)于骨關(guān)節(jié)炎洗方。因此，本研究證實(shí)膝骨痹康袋泡熏洗劑抗炎鎮(zhèn)痛療效確切，其劑型改良后效果沒(méi)有下降。

表4 各組干預(yù)前后痛閾值比較（

表4 各組干預(yù)前后痛閾值比較（

注：與空白組比較，1）P＜0.05。

干預(yù)后n組別空白組扶他林組洗方組袋泡劑組10 10 10 10干預(yù)前15.98±6.54 16.65±4.56 14.74±5.96 14.26±2.67 0.5 h 15.69±3.63 24.79±3.411）21.05±5.381）21.57±3.661）1 h 16.15±3.52 31.26±2.41）33.46±17.761）28.95±4.01）2 h 13.8±5.28 26.64±2.991）25.53±5.061）26.42±3.461）

表5 各組鎮(zhèn)痛率比較

表5 各組鎮(zhèn)痛率比較

注：與空白組比較，1）P＜0.05；與洗方組比較，2）P＜0.01。

組別空白組扶他林組洗方組袋泡劑組n 10 10 10 10扭體次數(shù)/（次·20 min-1）76.4±9.67 34.5±4.371）57.6±3.651）43.2±12.311）2）鎮(zhèn)痛率/%—54.97 24.87 43.46

分析膝骨痹康袋泡熏洗劑的療效可知，該制劑由骨碎補(bǔ)、續(xù)斷、伸筋草、川椒、制川烏、制草烏、威靈仙、紅花等14味中藥組方制成，多為辛溫散寒、祛風(fēng)除濕之品，能針對(duì)由肝腎氣血虛損、風(fēng)寒濕瘀痹阻引發(fā)的“膝骨痹”，發(fā)揮祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、強(qiáng)筋骨而止痹痛之功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究［6-11］表明：骨碎補(bǔ)［6］主要成分柚皮苷可抑制炎癥反應(yīng)；伸筋草［7］中生物堿和三萜類、川椒［8］中辣椒堿等成分抗炎鎮(zhèn)痛療效確切；川烏和草烏［9］中均含有多種生物堿，鎮(zhèn)痛作用明顯，可用于多種痛癥的治療；威靈仙［10］可抑制COX-1、COX-2合成；紅花［11］能抑制IL-1、IL-6的升高等。諸藥合用，共同發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛的功效。同時(shí)，膝骨痹康袋泡熏洗劑在制備過(guò)程中，將復(fù)方中一部分藥材進(jìn)行提取，更有利于藥物的有效成分溶出，并在短時(shí)間內(nèi)發(fā)揮作用，直達(dá)病所，更加快速而有效地達(dá)到抗炎、鎮(zhèn)痛的目的，故袋泡熏洗劑在鎮(zhèn)痛及抑制慢性炎癥方面療效優(yōu)于臨床洗方。

總之，膝骨痹康袋泡熏洗劑較傳統(tǒng)臨床洗方具有體積小、使用攜帶更方便等優(yōu)勢(shì)，極大地提高了患者的依從性；且劑型改良后更節(jié)約燃料及中藥材，降低了費(fèi)用，保質(zhì)期長(zhǎng)，更有利于在KOA康復(fù)中的推廣使用。本研究通過(guò)一般藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)方法初步證實(shí)了經(jīng)過(guò)劑型改良的膝骨痹康袋泡熏洗劑在鎮(zhèn)痛及抑制慢性炎癥方面療效優(yōu)于骨關(guān)節(jié)炎臨床洗方，為其應(yīng)用于臨床提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。在此基礎(chǔ)上今后課題組還將從特殊藥效學(xué)方面進(jìn)一步探討袋泡熏洗劑治療KOA的療效及機(jī)制。

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R285.5

：A

：1000-338X（2016）06-0052-03

2016-09-20

福建省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科研課題（WZSY201301）

黃露露（1990—），女，2015級(jí)碩士研究生，主要從事骨關(guān)節(jié)疾病防治與康復(fù)的基礎(chǔ)及臨床研究。

蘇友新（1969—），男，博士，教授，博士生導(dǎo)師。E-mail：suyouxin777@hotmail.com