李海濤

（長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部，吉林 長春130021）

五味子是常用中藥材，具有益氣生津、收斂固澀、補腎寧心的功效[1]。五味子中木脂素類主要包括醇甲、醇乙、甲素、乙素等，其成分含量是發(fā)揮藥效的重要決定因素[2]。為觀察探究不同炮制方法對五味子中木脂素類成分含量的影響，特對經(jīng)過上述方法炮制的7種五味子樣品分別采用高效液相色譜法對木脂素類成分含量及溶出率進行檢測，并分析不同炮制方法對其成分的影響，旨在為五味子炮制及應(yīng)用提供參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：高效液相色譜儀 (Agilent 1200型) ；色譜工作站 (N22000)；電子分析天平（梅特勒AG285型）；超聲清洗器（大連依利特科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑：試驗用五味子均為成熟野生鮮品，采自黑龍江雞西，真空包裝；對照品五味子醇甲（批號：110857-201506）、醇乙（批號：110858-201509）、甲素（批號：110764-201507）、乙素（批號：110765-201509）均購自藥品檢驗所。以甲醇為色譜純、實驗用水均為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

1.3 方法

1.3.1 樣品加工及炮制方法。加工方法：將實驗樣品在室內(nèi)通風(fēng)處鋪勻，注意經(jīng)常翻動，溫度保持20～25 ℃，濕度保持30%～50%，待20 d后開始炮制。

炮制方法：①生五味子：無需特殊處理；②醋蒸：按照1∶5比例將米醋與五味子混合均勻后放置于保鮮盒中，密閉并隔水加熱，待樣品變?yōu)楹谏笸Ｖ辜訜?，干燥后稱重；③酒蒸：按照1∶5比例將黃酒與五味子混合均勻后加工，方法同上；④蜜蒸：按照1∶5比例將煉蜜與五味子混合均勻后加工，方法同上；⑤酒浸：按照1∶2比例將黃酒與五味子混合均勻后浸泡24 h，置于50 ℃干燥箱中干燥至恒重；⑥清炒：取生五味子用文火干炒至表面變?yōu)樽虾稚?，并置?0 ℃干燥箱中干燥至恒重；⑦蜜炒：按照1∶10比例將煉蜜與五味子混合均勻后用文火干炒至表面變?yōu)樽虾稚?，并置?0 ℃干燥箱中干燥至恒重。

1.3.2 供試品與對照品溶液制備。供試品溶液制備：取7種五味子炮制品適量，粉碎后過60目篩，然后將其置于105 ℃干燥箱中進行干燥處理，各精密稱取1.00 g粉末分別置于容量瓶（25 mL）中，加入適量甲醇后超聲提取30 min，并用甲醇定容，采用濾膜（0.45 μm）過濾即可。對照品溶液制備：分別取五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素置于容量瓶（25 mL）中，加入甲醇定容，溶液濃度分別為0.460、0.218、0.397、0.550 g/L，采用濾膜（0.45 μm）過濾后各取1 mL置于容量瓶（10 mL）中并用甲醇定容，得對照品溶液。

1.3.3 色譜條件：色譜柱為C18柱4.6×150 mm2，5 μm；流動相為1∶1∶1的甲醇：乙腈：重蒸餾水；流速設(shè)置為1 mL/min；檢測波長為250 nm；柱溫為25 ℃；進樣量為10 μL。分別去對照品和供試品溶液進樣，并記錄峰面積。取得較好的分離后確定對樣品測定無不良干擾。

1.3.4 方法學(xué)試驗。線性關(guān)系：分別取對照品溶液制成不同溶質(zhì)的系列質(zhì)量濃度的溶液，所用方法為倍比稀釋法，依據(jù)上述色譜條件進樣，記錄峰面積，以對照品質(zhì)量溶度C為橫坐標(biāo)，以峰面積Y為縱坐標(biāo)，行線性回歸分析，所得方程和線性系數(shù)分別為Y=26078C，r=0.9999；Y=31507C，r=0.9999；Y=36075C，r=0.9999；Y=25314C，r=0.9999，可知在0.01～0.50 g/L濃度范圍內(nèi)質(zhì)量濃度均與峰面積存在良好的線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗：按照上述色譜條件取對照品混合溶液分別于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h進樣，測得峰面積在24 h內(nèi)均無明顯變化，且RSD=1.89%，表明在24 h內(nèi)測定具有較高的穩(wěn)定性。

精密度試驗：按照色譜條件分別將對照品溶液連續(xù)6次進樣，測得峰面積的RSD分別為0.46%、0.49%、0.47%、0.49%，表明具有良好的精密度。

重復(fù)性試驗：取生五味子和清炒五味子供試品溶液分別按照色譜條件進樣，測得峰面積的RSD分別為0.87%、0.83%，證明本實驗具有較強的重復(fù)性。

加樣回收率試驗：分別取7種五味子供試品粉末加入對照品0.3mg制備溶液后按照色譜條件進樣，記錄峰面積并采用外標(biāo)法對回收率進行計算，平均回收率分別為99.26%、99.37%、99.54%、101.21%，且RSD分別為0.95%、0.85%、0.89%、0.92%，表明可采用此種方法檢測回收率。

1.3.5 樣品木脂素類成分含量測定：分別取7種五味子炮制品適量，每種炮制品分別精密稱取3份，按照供試品溶液制備方法處理后依據(jù)色譜條件進樣，記錄峰值面積，并采用外標(biāo)法利用其測定五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素，并按照公式[（炮制品木脂素類含量×炮制品質(zhì)量）-（殘渣木脂素類含量×殘渣質(zhì)量）]/（炮制品木脂素類含量×炮制品質(zhì)量）計算不同組分的溶出率。

2 結(jié) 果

生五味子、醋蒸、酒蒸、蜜蒸、酒浸、清炒、蜜炒7種方法五味子炮制品中五味子醇甲含量和溶出率分別為0.1326%和60.29%、0.1096%和52.75%、0.1589%和63.74%、0.1198%和56.93%、0.1637%和65.41%、0.0832%和36.51%、0.0729%和29.83%；五味子醇乙含量和溶出率分別為0.5987%和52.96%、0.4257%和40.73%、0.6396%和55.25%、0.3217%和50.62%、0.6689%和58.74%、0.1524%和36.82%、0.2017%和33.21%；五味子甲素含量和溶出率分別為0.2154%和22.86%、0.2031%和11.02%、0.2976%和25.78%、0.1932%和10.26%、0.2764%和24.37%、0.1137%和8.95%、0.1028%和5.73%；五味子乙素含量和溶出率分別為0.7935%和29.38%、0.5241%和9.12%、0.8129%和31.07%、0.7015%和9.85%、0.7935%和29.74%、0.3204%和6.12%、0.2950%和5.09%。酒蒸和酒浸五味子中五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素類成分含量和溶出率均最高，其次為生五味子，且炒法五味子供試品中木脂素類成分含量及溶出率均較低。

3 討 論

不同五味子炮制方法可對其中木脂素類成分含量產(chǎn)生一定影響，進而在不同程度上影響藥效的發(fā)揮。關(guān)于五味子炮制方法及工藝介紹在古代中醫(yī)典籍上有詳細(xì)的介紹，現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)家將五味子炮制方法分為生五味子、醋蒸、酒蒸、蜜蒸、酒浸、清炒、蜜炒共7類[3]。因而探究不同炮制方法對五味子中醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素類成分含量的影響對指導(dǎo)制藥和用藥均具有重大作用。

本研究采用高效液相色譜法對不同炮制方法供試品中五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素類成分含量及溶出率進行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)酒蒸和酒浸五味子中不同木脂素類成分含量及溶出率均最高，其次為生五味子，說明酒蒸和酒浸炮制的五味子中不同木脂素類成分含量均較高，可充分發(fā)揮功效。既往多項研究證實[4-6]，酒蒸和酒浸炮制的五味子中具有強壯作用的木脂素類成分含量均明顯高于生五味子和炒制品，與本研究結(jié)果一致，提示應(yīng)當(dāng)采用酒蒸和酒浸法對生五味子進行炮制以增強藥效。分析其中原因為，乙醇為黃酒中的主要成分，而多種木脂素類成分均可溶于乙醇，因而用酒蒸和酒浸法炮制五味子能夠?qū)⒏嗟哪局惓煞秩苡谄渲?。綜上，在炮制五味子時，可考慮采用酒蒸和酒浸法，以充分利用藥材中強壯成分，增強藥效。

[1] 胡俊揚,陸兔林,毛春芹,等.HPLC法同時測定不同產(chǎn)地五味子中8種木脂素類成分[J].中成藥,2012,34(2):313-316.

[2] 賀鳳成,李守信,趙志全,等.一測多評法測定五味子中4種木脂素類成分的含量[J].藥學(xué)學(xué)報,2012,47(7):930-933.

[3] 蔣益萍,張巧艷,張宏,等.正交試驗優(yōu)選五味子木脂素類成分的提取工藝[J].中成藥,2013,35(11):2390-2394.

[4] 于曉禮,皮子鳳,胡秀麗,等.高速逆流色譜結(jié)合電噴霧多級串聯(lián)質(zhì)譜方法高效分離制備、鑒定五味子木脂素類成分[J].藥學(xué)學(xué)報,2014,49(1):78-82.

[5] 竇志華,安莉萍,陳敏,等.一測多評法同時測定五味子中6種木脂素類成分含量[J].中國藥學(xué)雜志,2014,49(2):147-151.

[6] 邱宏濤,趙筱萍,李正,等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的五味子木脂素類主要藥效作用研究[J].中國中藥雜志,2015,40(3):522-527.