陳亞軍，于瑩，高巖，筆雪艷，匡海學(xué)

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/黑龍江省中藥天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040)

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八仙花葉中酚酸類化合物的分離和結(jié)構(gòu)鑒定

陳亞軍，于瑩，高巖，筆雪艷，匡海學(xué)*

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)教育部北藥基礎(chǔ)與應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/黑龍江省中藥天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的：對(duì)八仙花葉的酚酸類化學(xué)成分進(jìn)行研究。方法：采用硅膠柱色譜、ODS柱色譜和HPLC等方法進(jìn)行分離純化，并通過1H-NMR，13C-NMR，MS等譜學(xué)技術(shù)確定結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從八仙花葉提取物中分離得到8個(gè)酚酸類化合物，分別為：vanilloloside(1)，5-羥甲基-2-甲氧基-苯酚-β-D-葡萄糖苷(2)，4-甲氧基-苯甲醛-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)，tachioside(4)，isotachioside(5)，阿魏酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(6)，咖啡酸(7)，對(duì)羥基苯丙酸甲酯(8)。結(jié)論:化合物1～3，6～8為八仙花屬中首次分離。

八仙花；分離純化；結(jié)構(gòu)鑒定；酚酸

八仙花(Hydrangea macrophylla)又名繡球花，為虎耳草科八仙花屬多年生草本植物[1]。八仙花為落葉灌木，枝粗壯，葉近革質(zhì)大而稍厚，邊緣有粗鋸齒，葉面鮮綠色，葉背黃綠色。花豐滿密集，粉紅色、淡藍(lán)色或白色。八仙花產(chǎn)于我國長江以南各省區(qū)，民間常用其全草治療痢疾、心熱驚悸等疾病。現(xiàn)代藥理及臨床研究表明,八仙花葉具有很好的抗瘧、抗過敏、降脂、降糖[1]等作用。因此對(duì)八仙花葉中所含的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)地研究，有利于進(jìn)一步探究其生物活性。本實(shí)驗(yàn)對(duì)八仙花葉的化學(xué)成分進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，從其正丁醇部分分離得到8個(gè)酚酸類化合物。

1 材料

JNM-LA270(600 MHz)；JNM-ECA600(600 MHz)型核磁共振儀(TMS為內(nèi)標(biāo))；Waters 2535制備型高效液相色譜儀；Waters 2414型視差檢測(cè)器；硅膠(薄層色譜和柱色譜,青島海洋化工廠)；反相ODS(Fuji Silysia Chemical, Ltd.)；高效液相所用試劑為色譜級(jí)；其他試劑均為分析純。

八仙花葉于2013年9月采集于中國四川省石柱縣，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)王振月教授鑒定為八仙花(H.macrophylla)的葉。樣本保存于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教研室。

2 提取分離

八仙花的干燥葉2.0 kg經(jīng)甲醇提取3次，每次3 h，合并提取液，濃縮干燥得甲醇提取物452.3 g。將甲醇提取物加水懸浮，依次以等體積乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，減壓回收溶劑，得正丁醇提取物125.5 g。正丁醇提取物經(jīng)硅膠柱色譜，用氯仿-甲醇-水(15:3:1～MeOH)溶劑體系梯度洗脫，得到6個(gè)組分(Fr.1～6)。Fr.3組分經(jīng)中壓ODS柱色譜，以甲醇-水(10:90 ～ 70:30)梯度洗脫，得到5個(gè)組分(Fr.3-1～5)。Fr.3-2經(jīng)制備型HPLC，以甲醇-水(10:90)等度洗脫，得到化合物1、7。Fr.3-3經(jīng)制備型HPLC，以甲醇-水(12:88)等度洗脫，得到化合物2。Fr.4組分經(jīng)中壓ODS柱色譜，以甲醇-水(10:90～70:30)梯度洗脫，得到6個(gè)組分(Fr.4-1～6)。Fr.4-2經(jīng)制備型HPLC，以甲醇-水(25:75)等度洗脫得化合物4、5。Fr.4-3經(jīng)制備型HPLC，以甲醇-水(22:78)等度洗脫得化合物6。Fr.4-4經(jīng)制備型HPLC，以甲醇-水(25:75)等度洗脫得化合物3、8。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

白色粉末，F(xiàn)AB-MS: m/z 339 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.02 (1H, d, J=1.4 Hz, H-3)，6.88 (1H, dd, J=8.2, 1.4 Hz, H-5)，7.13 (1H, d, J=8.2 Hz, H-6)，4.54 (2H, s, H-7)，3.86 (3H, s, OCH3)，4.87 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.45 (1H, dd, J=8.9, 8.3 Hz, H-2′)，3.48 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.39(1H, overlapped, H-4′)，3.39(1H, overlapped, H-5′)，3.86 (1H, dd, J=11.7, 2.0 Hz, H-6′a)，3.68 (1H, dd, J=11.7, 4.8 Hz, H-6′b)。13C-NMR譜數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[2]，故鑒定該化合物為vanilloloside。

3.2 化合物2

白色粉末，F(xiàn)AB-MS: m/z 339 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.96 (1H, d, J=8.0 Hz, H-3)，6.98 (1H, dd, J=8.0, 1.5 Hz, H-4)，7.17 (1H, d, J=1.5 Hz, H-6)，4.51 (2H, s, H-7)，3.87 (3H, s, OCH3)，4.91 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.43 (1H, dd, J=8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.48 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.39(1H, m, H-4′)，3.39(1H, m, H-5′)，3.83 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.67 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR譜數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[2]，故鑒定該化合物為5-羥甲基-2-甲氧基-苯酚--D-葡萄糖苷。

3.3 化合物3

白色粉末，F(xiàn)AB-MS: m/z 337 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.18 (1H, d, J=8.3 Hz, H-3)，7.62 (1H, dd, J=8.3, 1.9 Hz, H-4)，7.66 (1H, d, J=1.9 Hz, H-6)，9.80 (1H, s, H-7)，3.95 (3H, s, OCH3)，5.00 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.45 (1H, dd, J=8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.46 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.38(1H, m, H-4′)，3.38(1H, overlapped, H-5′)，3.88 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.68 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR譜數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[3]，故鑒定該化合物為4-甲氧基-苯甲醛-3-O--D-葡萄糖苷。

圖1 化合物1～8的結(jié)構(gòu)圖

3.4 化合物4

白色粉末，F(xiàn)AB-MS: m/z 325 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.80 (1H, d, J=2.3 Hz, H-2), 6.58 (1H, dd, J=8.5, 2.3 Hz, H-5)，6.69 (1H, d, J=8.5 Hz, H-6), 3.82 (3H, s, OCH3)，4.74 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.43 (1H, dd, J=8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.47 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.39(1H, overlapped, H-4′)，3.40(1H, overlapped, H-5′)，3.86 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.68 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR譜數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[4]，故鑒定該化合物為tachioside。

表1 化合物1～8的13C-NMR數(shù)據(jù)(150 MHz，CD3OD)

3.5 化合物5

白色粉末，F(xiàn)AB-MS: m/z 325 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.01 (1H, d, J=8.9 Hz, H-3), 6.29 (1H, dd, J=8.9, 2.5 Hz, H-4)，6.46 (1H, d, J=2.5 Hz, H-5)，3.80 (3H, s, OCH3)，4.69 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.45 (1H, dd, J=8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.48 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.39(1H, m, H-4′)，3.39(1H, m, H-5′)，3.86 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.68 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR譜數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[4]，故鑒定該化合物為isotachioside。

3.6 化合物6

白色粉末，F(xiàn)AB-MS: m/z 379 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.33 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2)，7.18 (1H, dd, J=7.6, 2.0 Hz, H-5)，6.80 (1H, d, J=7.6 Hz, H-6)，7.63 (1H, d, J=16.0 Hz, H-7)，6.47 (1H, d, J=16.0 Hz, H-8)，3.89 (1H, s, OCH3)，5.46 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1′)，3.43 (1H, dd, J = 8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.48 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.37(1H, overlapped, H-4′)，3.38(1H, overlapped, H-5′)，3.89 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.66 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR譜數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[5]，故鑒定該化合物為阿魏酸-4-O-β-D-葡萄糖苷。

3.7 化合物7

白色粉末，F(xiàn)AB-MS: m/z 203 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.03 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2)，6.71 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5)，6.92 (1H, dd, J=8.4, 1.8 Hz, H-6)，7.47 (1H, d, J=16.0 Hz, H-7)，6.20 (1H, d, J=16.0 Hz, H-8)。13C-NMR譜數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[6]，故鑒定該化合物為咖啡酸。

3.8 化合物8

白色粉末，F(xiàn)AB-MS: m/z 203 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.99 (H, d, J=8.0 Hz, H-2)，6.70(H, d, J=8.0 Hz, H-3)，6.99 (H, d, J=8.0 Hz, H-5)，6.70(H, d, J=8.0 Hz, H-6)，2.80 (2H, t, J=8.0 Hz, H-7)，2.55 (2H, t, J=80 Hz, H-8)，3.60 (3H, s, H-9)。數(shù)據(jù)見表1。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)一致[7]，故鑒定該化合物為對(duì)羥基苯丙酸甲酯。

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Separation and Structural Identification of Phenolic Acids from Hydrangea Macrophylla Leaves

CHEN Ya-jun, YU Ying, GAO Yan, BI Xue-yan, KUANG Hai-xue*

(KeyLaboratoryofChineseMateriaMedica(MinistryofEducation),HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,HeilongjangKeyLaboratoryofTCMPharmacodynamicMaterialBases,Harbin150040,China)

Objective: To investigate the chemical constituents of the leaves of Hydrangea macrophylla. Methods: The chemical constituents were separated and purified by various isolation methods (silica gel, ODS and HPLC column chromatography), and their structures were determined by the analysis of spectral data (1H-NMR,13C-NMR and MS). Results: Eight compounds were obtained and elucidated as the following: vanilloloside (1), 5-hydroxymethyl-2-methoxy phenyl--D-glucopyranoside (2), 4-methoxy-benzaldehyde-3-O--D-glucopyranoside (3), tachioside (4), isotachioside (5), ferulic acid-4-O-β-D-glucoside(6), caffeic acid(7), methyl 3-(4-hydroxyphenyl)propionate (8).Conclusion:Compounds 1-3, 6-8 were isolated from Hydrangea macrophylla leaves for the first time.

Hydrangea macrophylla; Separation and purification; Structural identification; Phenolic acids

教育部博士點(diǎn)基金項(xiàng)目(No.20132327120002)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)“優(yōu)秀創(chuàng)新人才”支持項(xiàng)目(No.2012RCD05)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)“杰出人才培養(yǎng)”基金項(xiàng)目(No.2012cj02)

陳亞軍(1992-)，女，碩士研究生，主要研究方向：中藥天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。

匡海學(xué)*(1955-)，男，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥及復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究，中藥性味理論。

2016-09-18

R284

A

1002-2406(2017)01-0010-03

修回日期：2016-10-01