曹雪花，董花，劉娜（.甘肅省武威市涼州區(qū)農業(yè)技術推廣中心，武威733000；.涼州區(qū)農產品質量安全監(jiān)督管理站，甘肅武威733000；3.黑龍江大學農作物研究院/中國農業(yè)科學院甜菜研究所，哈爾濱50080）

甜葉菊體外培養(yǎng)獲得甜菊糖的研究與應用進展

曹雪花1，董花2，劉娜3*
（1.甘肅省武威市涼州區(qū)農業(yè)技術推廣中心，武威733000；2.涼州區(qū)農產品質量安全監(jiān)督管理站，甘肅武威733000；3.黑龍江大學農作物研究院/中國農業(yè)科學院甜菜研究所，哈爾濱150080）

綜述了世界上甜葉菊使用體外繁殖技術，培養(yǎng)基添加物質對甜葉菊誘導、生芽、生根及甜菊糖生產的影響，育種方法對甜菊糖生產的改良等。

甜葉菊；體外培養(yǎng)；培養(yǎng)基；甜菊糖；甜菊糖苷；萊鮑迪苷

甜葉菊無毒、無致癌、無突變[1]。甜葉菊所含的甜菊糖（steviol glycosides，SGs）作為一種天然的、無熱量、安全的、穩(wěn)定的、甜度高的甜味劑在廣泛應用，甜菊糖的成分和含量與健康無病相匹配，甜葉菊及其提取物具有較低的血糖指數，因此不影響血糖，其中有些化合物還具有治療功效，具有降血壓特性，還具有抗菌和利尿等作用特性[2-3]。植物細胞和組織培養(yǎng)用于植物育種，可對植物的生長發(fā)育和代謝調查研究，可使植物在自然條件下無法實現(xiàn)的微繁殖或體細胞胚胎發(fā)生大量的營養(yǎng)繁殖/或再生。體外培養(yǎng)也能獲得雜交植株，即使雜交育種無法授粉的植物，也可獲得體細胞雜種。花藥和小孢子培養(yǎng)可獲得單倍體和雙單倍體，即生物是完全純合的。在誘導植物細胞突變和遺傳轉化的過程中，體外技術的應用最終獲得無病毒植株[4-5]。甜葉菊育種中使用體外繁殖技術是其繁殖的重要途徑，是產業(yè)化大規(guī)模生產最快和最有效的方法。由于甜葉菊種子發(fā)芽率非常低，因此實際應用該方法更有意義[6]。有性繁殖導致產生不同基因型和表型性狀，難以獲得甜菊糖等化學成分含量同質的群體。在傳統(tǒng)的營養(yǎng)繁殖/繁殖方法中尋找解決方法需要大量的努力，遺傳材料的可用率是有限的。生物技術方法在實際中得到很好的應用，并在不斷改進中[7-8]。

1 培養(yǎng)基質對培養(yǎng)過程的影響

1.1 生長調節(jié)劑的作用

植物生長發(fā)育調節(jié)劑是調節(jié)植物體內生化過程的一類化合物，它們負責植物適當的生長和細胞分裂以及對環(huán)境條件變化的反應，如脅迫反應。植物的反應取決于這些化合物的濃度，甚至少量的劑量即可觀察到。體外培養(yǎng)應用生長調節(jié)劑可誘導不定芽、愈傷組織和生根等，選擇其適當的濃度對植物材料的質量和數量是至關重要的。許多文獻報道了優(yōu)化生長調節(jié)劑濃度對甜葉菊微繁殖的研究。MS培養(yǎng)基中添加2.0mg/L BA誘導最多的芽數是43.9芽/外植體，但這些芽很薄，含有許多側生芽，煉苗期間存活率很低[7]。不同濃度的BA、IAA、IBA+MS培養(yǎng)基對不定芽再生最有效的組合是：BA 2.0mg/L+IAA 1.0mg/L，結果頂芽、不定芽和葉為外植體的增殖率分別為11%、10%和8%[5]。添加IBA的培養(yǎng)基再生效率低，稀釋雙倍卻對生根很好，生根率可達100%。該成分的培養(yǎng)基組合對芽的伸長也有積極作用。其它的組合，BA、NAA、KIN與生長素被證明是低效的。Bondarev等[9]觀察到0.1 mg/L BA對外植體可產生1.5以上的芽，但對生根有抑制（與標準培養(yǎng)基比較）；另一方面，GA3促進了芽和根的伸長[10]。Jain等人[11]觀察到BA 0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L對芽誘導最佳；使用BA 0.8mg/L和KIN 0.4mg/L的組合芽增殖達到最好的結果。在這些研究中初始外植體為葉和不定芽[13]。另一項研究，芽再生最優(yōu)組合為：MS+KIN 0.3mg/L，生根最優(yōu)組合為：MS+IBA 2.0mg/L[12]。MS分別添加BA、KIN和IAA或組合，最好的結果是：MS+BA 1.0 mg/L+IAA 0.5mg/L，與早期報道一致。繁殖率最高的外植體也是頂芽。然而，N6（Nitsch）培養(yǎng)基+IAA 1.0 mg/L對生根是最有效的[13]。Yadav等人[17]使用其他細胞激素組合包括BA與KIN或NAA用于不定芽的誘導。最好的結果：MS+BA 0.5 mg/L+KIN 0.5 mg/L；在MS+ GA3 0.5mg/L培養(yǎng)基，獲得最高的莖伸長和葉片數量最高；用IBA 2.0mg/L，生根最高（87.8%）也最快，同時測試了NAA和IAA效果。反之，在沒有任何調節(jié)劑的MS培養(yǎng)基沒有根生長[14]。Thiyagarajan等[3]在MS培養(yǎng)基上添加不同濃度的BA和KIN，獲得了不定芽和莖節(jié)外植體；另一種情況，添加不同濃度的IAA、IBA和NAA，在BA 1.0mg/L培養(yǎng)基上增殖率最高，每外植體達到15.69個芽，發(fā)生率為94.5%。實驗旨在大規(guī)模生產節(jié)點外植體和不定芽，然后轉移到MS+BA 1.0mg/L培養(yǎng)基。經過3個增殖周期，每個外植體獲得了123個芽，后來被轉移到1/2MS添加不同濃度的NAA、IAA、IBA和生長素培養(yǎng)基中，結果培養(yǎng)是成功的。最高的生根培養(yǎng)基是：1/2MS+NAA 0.4mg/L[3]。矮壯素（CCC）與IBA組合，獲得甜葉菊最佳的體外培養(yǎng)，研究表明，在添加CCC和IBA的培養(yǎng)基比單用CCC或IBA培養(yǎng)基發(fā)育和性狀更好。培養(yǎng)基中添加CCC 3.0mg/L+IBA 3.0 mg/L對增加芽數、生存率、生物量和葉綠素及改善甜菊糖含量被證明是最有效的[15]?？傊?，文獻資料表明，外源植物生長調節(jié)劑用于芽誘導，通常為：MS+BA 1.0mg/L+細胞激素1.0mg/L或BA1.0mg/L+IAA 1.0mg/L。外植體繁殖率最高的是頂芽。生根及其伸長生長最有效的是，在MS培養(yǎng)基中或MS培養(yǎng)基雙倍稀釋濃度添加2.0mg/L IBA或NAA 0.4mg/L。

1.2 礦物成分的影響

礦質營養(yǎng)是植物離體培養(yǎng)的基本元素，在基質中其濃度和比例對植株的生長速度和質量起著基本作用，因此在選擇培養(yǎng)基的成分時這兩個參數必須指定[4]。Ibrahim等研究了不同濃度的MS培養(yǎng)基及其主要成分對甜葉菊體外發(fā)育的影響。最好的結果是用MS培養(yǎng)基并改良：NH4NO31237.5mg/L+KNO3950mg/L+MgSO4185mg/L+CaCl2.2H2O 440 mg/L+KH2PO485mg/L+豐富的微量元素+蔗糖30 g/L+甘氨酸2.0mg/L+吡哆醇0.5mg/L+煙酸0.5mg/L+硫胺素0.1mg/L，也以瓊脂1.5mg/L做凝固[16]。在MS培養(yǎng)基上加倍濃度的礦物鹽對植株生長有良好作用，但導致甜菊糖水平的下降[9]。微量元素的組成和濃度對芽的誘導和葉綠素含量的影響研究表明，該項目使用不同濃度的基質鈷、鐵、錳、銅和鉀碘化物與標準的MS培養(yǎng)基中所獲得的結果比較，對于芽誘導的積極影響的方案是：MnSO460.4mg/L+CoCl20.26mg/L+KI 1.7mg/L；而增殖培養(yǎng)基為：CoCl20.26 mg/L+CuSO41.6mg/L+MnSO475.5mg/L+ZnSO414.4mg/L+H3BO324.7mg/L；生物量和葉綠素含量增長的培養(yǎng)基：Fe2(SO4)380mg/L+CoCl20.4mg/L+KI 1.7mg/L[4，11]。其他文獻資料表明，銅0.03mg/L對芽的誘導和增殖及對葉綠素含量和生物量有積極影響[11]。

1.3 碳源效應

糖類提供了培養(yǎng)基的碳源和能量，加速培養(yǎng)的生長發(fā)育，使其可獨立光合作用。其過程受體外氣體交換條件的抑制。因此，CO2對光合作用是有用的。此外，并非所有體外生長的細胞都必須具有光合能力和碳水化合物的存在。另一方面，糖的存在可以促進培養(yǎng)基上微生物的生長。在生物反應器中，對糖的種類和濃度對甜葉菊芽和甜菊糖含量的影響進行了研究，與蔗糖相比，在含有果糖或葡萄糖的培養(yǎng)基對根系統(tǒng)的發(fā)育更有利，但葉質量和甜菊糖含量下降了。為改善組織中甜菊糖含量，測試了不同濃度碳源（1%～5%），而最佳的蔗糖濃度為3%，高濃度促進了根系統(tǒng)發(fā)育和生物質的積累[9]。

1.4 甜葉菊體外愈傷組織培養(yǎng)及懸浮培養(yǎng)的影響

體外培養(yǎng)愈傷組織，由于其全能性導致組織分化，用于間接器官發(fā)生或形成體細胞胚。愈傷組織培養(yǎng)一般用于獲得植物代謝產物。據有關甜葉菊的文獻，對愈傷組織誘導最有效的培養(yǎng)基為：MS+2,4-D 0.1mg/L[15]或BA 2.0～3.0mg/L+NAA 2.0mg/L[17]。愈傷組織誘導芽的發(fā)育為：MS培養(yǎng)基添加BA和2,4-D[12]。在未添加外源生長調節(jié)劑的培養(yǎng)基未觀察到愈傷組織發(fā)育，說明培養(yǎng)過程是復雜的，需要添加生長調節(jié)物質[17]。經體細胞胚胎發(fā)生的植物再生，胚性愈傷組織從葉片和小花外植體而形成[18]。甜葉菊懸浮培養(yǎng)的最佳生長是：2,4-D 0.06mg/L+BA 0.6mg/L+抗壞血酸0.01mg/L，該組合的生長速率是2.61/d[17]。甜葉菊懸浮培養(yǎng)的最優(yōu)改良的礦物鹽濃度的標準MS培養(yǎng)基：NH4NO32.0mg/L+KNO35.7mg/L+MgSO40.5mg/L+KH2PO410.2mg/L。另有研究：提高鹽的濃度對甜葉菊也有較好的效果[19]。

1.5 瓶內到瓶外煉苗的影響

將體外不育植株轉到眾多具脅迫誘導因素外部環(huán)境的煉苗。植株必須建立一個功能根系、高效蒸騰機制、保護層，開始光合作用。甜葉菊煉苗的基質為混合砂土、蛭石、蚯蚓糞、或椰殼纖維泥炭。比較分析表明，使用砂、土壤和蚯蚓糞以1∶1∶1混合，植株存活率為82%，只用椰殼纖維泥炭的生存率為70%[13，17，20]。

2 幾種因素對甜葉菊體外培養(yǎng)甜菊糖生產的影響

甜葉菊中甜菊糖最常見的甜菊甜味物質是甜菊糖苷（stevioside，STV）、萊鮑迪苷A（Reb A）和萊鮑迪苷C（Reb C）。在傳統(tǒng)方式種植的甜葉菊，每種化合物的含量占葉干質量的1%或更高。STV、Reb A和Reb C含量分別達到3.3mg/g、1.9mg/g和0.7mg/g干物質[10]。其余的甜菊糖含量很低。不同的研究者體外組織培養(yǎng)植株的甜菊糖含量差異很大。Swanson[21]沒有在愈傷組織或芽檢測到甜菊糖的存在，認為，只有充分發(fā)育的植株可以生產這些化合物。其他作者證明培養(yǎng)的芽有能力合成這些化合物[10，15]。一些作者在愈傷組織和懸浮培養(yǎng)沒有檢測到甜菊糖[10]，在愈傷組織培養(yǎng)，即使是在水平高出一倍的甜菊葉都沒有[4]。2001年的文獻表明，體外生長的甜菊葉和莖的甜菊糖含量比傳統(tǒng)方式分別低5和3倍[10]。愈傷組織培養(yǎng)幾乎不含有任何苷類；Taware等[12]的結果相反，在愈傷組織中STV含量較高。

懸浮培養(yǎng)的甜菊糖的含量變化為15μg/g～3803μg/g，表現(xiàn)為與細胞繁殖周期相關的有特色的動態(tài)，其含量在對數增長階段或在其結束時值最大，然后降到平穩(wěn)[10，17]。這表明在懸浮培養(yǎng)的生長、細胞分裂與STV的合成呈正相關關系。培養(yǎng)基成分及礦物鹽的含量，糖、生長調節(jié)劑的種類和濃度，都可能對獲得的材料的STV含量水平產生影響[18]。在愈傷組織，在添加7.5mM脯氨酸和5%PEG時，SGs含量分別從0.27%（對照）增加到1.09%和1.83%。在懸浮培養(yǎng)下，相同的脯氨酸和PEG濃度使SGs含量在第10天分別從1.36%（對照）增加到5.03%和6.38%[22]。0.5 g/L ALG和2.0 g/L酵母提取物處理的體外苗STV產量分別從1.56mg/g干重增加到14.69和14.54mg/g。僅在0.5 g/L海藻酸（ALG）處理觀察到Reb A為0.55mg/g干重，田間生長的植物的STV含量為15.06mg/g干重[23]。再生植株和種子幼苗轉移到大田16周，其植株葉SGs含量（葉干重比）之間沒有差異，Reb A含量為4.7%～5.0%（w/w），而STV含量為6.4%～6.9%（w/w）[24]。外源生長調節(jié)劑幾乎總是使甜菊糖水平下降[9]。這也部分解釋了不同培養(yǎng)基類型甜菊糖的不同濃度變化。然而，沒有發(fā)現(xiàn)在體內外植體類型和糖苷含量間這樣的相關性[10]。細胞分化似乎對糖苷產生影響。據Bondarev等人，在形成愈傷組織的這些化合物的含量高4～5倍，而在形成芽的情況下甚至比懸浮培養(yǎng)高37倍[10]。在甜菊糖的合成過程也存在細胞解體的作用[17]。

甜菊糖的化學結構對于其生產是很重要的，因為決定其味覺特性。在甜菊糖的差異，特別是由于很多配基轉移酶的存在，會發(fā)生殘留糖被糖苷配基取代現(xiàn)象[25]。糖苷類的多樣性體現(xiàn)在他們的特性，尤其是在感知的味覺和在水中的溶解度?？傊?，當羥基或糖基團在C-19位時即能感知到甜味，這些位置取代基團的差異決定化合物的性質[26]。例如，Reb A與STV比在味覺上感覺更好，STV具有特定的回味，有些人覺得不愉快或苦味，而且沒有Reb A那么甜[4]。據觀察，STV和Reb A的等同物分別是杜爾可苷A（Dul A）和Reb C，是葡糖基團被鼠李糖取代的結果。到目前為止，基于苷配基（不同于分離自Stevia paniculata,Stevia ovata及Rubus suavissimus的甜菊醇）的糖苷類的研究表明，甜菊醇產生最甜的糖苷類，甜菊糖的味道依賴于其結構[26]。因此，已經嘗試修改它們的化學結構以期改進味道。由于其天然來源（和食品應用），酶修飾法是首選的化學方法。生物轉化作用是酶催化的化學化合物的轉化過程?？煽氐纳镛D化已對經濟價值化合物進行修飾和生產。生物轉化反應功能之一是化合物的糖基團的修飾、連接、基團的拆分和轉糖基。一般來說，生物催化是一個有用的工具，例如特定的異構體的合成、選擇性合成、低毒性或低活性化合物的合成。這通常是并不需要特殊的反應條件和不產生危險廢物的化學合成，對人類和環(huán)境更友好。CGTase與淀粉反應形成環(huán)糊精，也催化反式α-1,4反式葡糖基化，在可溶性淀粉存在下STV在CGTase作用下分解為糖苷。性味改良了更多的葡糖基化化合物，雖然C-19位影響糖基化衍生物的口味。后來被用于其他反應中，使用更特異的酶，以便獲得最需要的化學化合物[26]。支鏈淀粉酶似乎比CGTase更高效，所需產品具有較高的特異性[27]。在糊精葡聚糖酶（DDase）也被用于STV的苦-甜化合物的改良[28]。一個有趣的例子：經Actinomycete培養(yǎng)STV也可以形成C13-O-β-6(2)-β-glucosylsophorosyl-C19-O-β-glucopyranosyl steviol。

3 通過育種改進甜菊糖的生產

傳統(tǒng)選育方法和分子工具結合選擇最期望的特性，即通過多倍體化或在基因組更徹底的調停和生產轉基因品種，與特定特性結合進行選擇性標記測定。所有這些方法都有助于生物體的發(fā)展和完善遺傳和商業(yè)需要，了解給定的特征及其遺傳本質是進一步修改生物體性狀的有力工具。代謝途徑分析、測定酶參與途徑、調控的方法和基因的負責過程提供了重要的信息，均可幫助開發(fā)所需的性狀[29]。

甜葉菊最典型的特點是其生物合成甜菊糖的能力，因此該物種的繁育研究針對這些化合物含量與成分的改進。由于STV的特殊味道使我們注意到降低其在總甜菊糖含量的份額，而增加Reb A和Reb C卻沒有苦味。在葉中甜菊糖含量最高，因此其他改良性狀是葉產量和葉莖質量比。研究表明甜葉菊經濟上重要的繁殖性狀具有較高的種群內的變異和高遺傳力特性，這些性狀包括葉產量（h2=62.1）、葉莖比（h2=78.8）和甜菊糖含量（h2=76.6）。因遺傳力高容易進行選擇修改[30]。此外，STV和Reb A含量呈負相關，而Reb A與Reb C含量呈正相關。Reb A是否存在由一個單一的主基因控制，而它的量是由較高的位點數目調節(jié)。Reb A和Reb C比率由單一加性基因決定，這些性狀的基因進行共分離。同一個酶負責兩種化合物的合成[4，31]。甜葉菊這些特點使其成為育種潛力高、易于改良的植物，能獲得更高效的品種。

在甜葉菊，如果植株經常自花授粉，在特定的性狀常表現(xiàn)出很高的差異性，那么選擇是獲得改良品種的有效方法。甜葉菊經過30多年的選育，葉中甜菊糖的含量已從2%～10%提高到20%（干物質）[29]。迄今為止基于表型性狀已經做了選擇，更取決于選育條件和植物的年齡。據估計，在幼苗的情況下，只有20%～30%的變異是基因決定的。因此，應對成熟植株進行選擇，但又延長了所需的時間。此外，用HPLC測定葉糖苷含量是昂貴和費時的[32]。生物技術工具為所需的甜葉菊性狀改善提供了機會。在花藥培養(yǎng)體外組織培養(yǎng)用于大規(guī)模繁殖和/或獲得完全單倍體基因型。分子遺傳標記鑒定針對影響甜菊糖的生物合成的基因型的基因定位。更深入理解甜菊糖的生化合成途徑、調節(jié)基因如何表達也很重要。誘導突變可能成功地被用于改善種群內變異性低的性狀。到目前為止，很少有甜菊糖產量高的甜葉菊品種獲取專利。選育的栽培種具有特定用途或觀賞性狀、穩(wěn)定性和均勻性，通過選擇、雜交育種、多倍體化或突變等方法而獲得。品種最常見的是無性系，為保持其性狀需要限制其生殖繁殖，代替以利用營養(yǎng)繁殖。

在性狀高變異的異花受粉物種（如甜葉菊）中，用特殊技術改良數量性狀進行循環(huán)選擇。重組選擇與普通群體及進一步重組雜交選育相比性狀表現(xiàn)較好。在亞群決定所需性狀的等位基因發(fā)生率比初始種群高。如此循環(huán)重復，直到達到顯著效果。改良糖苷含量的甜葉菊育種品系RSIT 94-1306和RSIT 751是控制雜交育種和選擇方法獲得的[30]。在1998年，由于其Reb C與STV比率的獨特性，育成了RSIT 95-166-13品系[33]。這3個品系都是營養(yǎng)體無性繁殖選育的。發(fā)展綜合和復雜的品種是特別重要的，生產這樣的植物如，AC Black Bird和PTA－444，即改變糖苷含量[34-35]。一些品種，盡管糖苷生產非常高，因自交不育只能進行營養(yǎng)體無性繁殖。然而，PTA－444可由種子繁殖。使用營養(yǎng)體育種提高了植物生產的成本，并限制其商業(yè)用途，但它們仍然可用于雜交種生產[20，34]。

植物雜交種是由不同的種、屬雜交育種而成的。有意的、可控的雜交生產允許引入新的基因進入基因庫，有助于豐富遺傳多樣性。這對作物同質群體是有益的，它可以提高雜種優(yōu)勢，也可能是育種者利用抗病或活力等優(yōu)良性狀創(chuàng)造新品種的方法。在2006年，Wang獲得選育甜菊雜交植物的專利方法[36]。在2001年，Sun用生產營養(yǎng)體雜交的技術獲得種子的方法[32]。一種營養(yǎng)雜交體形成是將植物的一部分嫁接到另一株植物上的結果。誘發(fā)突變是一種工具，與傳統(tǒng)的育種方法比，加速了植物所需性狀的培育。使用物理和化學的誘變劑，在一個群體更快地獲得遺傳多樣性。該方法的應用，給定的性狀在群體中顯示非常低的變異。直到現(xiàn)在，這個方法還沒有用于甜葉菊，因為其他方法是易于使用的和高效的。

多倍化成功地用于提高農作物產量。多倍體植株往往具有環(huán)境條件的適應性強和較大的器官與細胞。不同染色體數目的雜交育種而產生的植物通常是完全或部分不育的。通過秋水仙素溶液處理甜葉菊種子或經四倍體作母本與二倍體作父本雜交育種而獲得三倍體。三倍體植株葉大、Reb A含量較高[37]，四倍體的葉片較大、較厚，可能使生物產量增加。所有的多倍體都有非功能性花粉[38]?；ㄋ幣囵B(yǎng)，即從未成熟的花藥在體外培養(yǎng)形成，用于獲得單倍體植株。它們可獲得的雙單倍體植株是完全純合的。純合群體的性狀可用于雜交。以花藥培養(yǎng)成功地再生甜葉菊植株[4]。在利用分子標記與特定性狀連鎖的標記識別創(chuàng)造新的可能性和植物育種途徑。在植物發(fā)育中借助可檢測的分子標記，使所需的性狀發(fā)現(xiàn)更早。這可無需生產成熟的植株，并大大縮短評估性狀所需的時間。而且，能夠在較小的種群中執(zhí)行選擇過程。在1999年，用RAPD創(chuàng)建了甜葉菊的遺傳圖技術[32]。遺傳圖譜構建甜菊選育中（基于遺傳標記）使用分子選擇技術，并將為甜葉菊基因組組織和代謝研究奠定基礎。下一步的研究應包括與重要經濟性狀相關的特異標記，并對其進行整形，使其易于在植物材料中應用。盡管上述甜葉菊的研究相當有限，將來的工作，開發(fā)新品種和調整育種技術將通過提高產質量增強其在食品工業(yè)和保健上的應用價值與潛力。

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Advances in Research and Application of Stevia in vitro Culture to Im prove Steviol G lycoside Content

CAO Xue-hua1,DONG Hua2,LIU Na3*
(1.Agricultural Technology Service Center of Liangzhou District,Wuwei733000,Gansu;2.Agricultural ProductQuality Safety Supervision and Management Station of Liangzhou District,Wuwei733000,Gansu;3.Crop Academy of Heilongjiang University/ Sugar Beet Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150080,Heilongjiang)

The use of in vitro propagation techniques of Stevia in the world was introduced,and the effects of culturemedium on the induction,germination,rooting and steviol glycoside,and effects of breeding approach on production of steviol glycosideswere summarized.

Stevia;in vitro culture;medium;steviol glycosides;stevioside;rebaudioside A

S566.9

B

1007－2624（2017）04－0048－05

10.13570/j.cnki.scc.2017.04.017

2012-02-27

曹雪花（1974-），女，甘肅武威人，農藝師，主要從事作物病蟲害測報與防治工作。

劉娜（1974-），女，黑龍江通河人，助理研究員，主要從事甜菜生理學和栽培學研究。E-mail：ln5-8@163.com