速凍水餃金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)測(cè)量不確定度評(píng)估

陸俊波 安慶市食品藥品檢驗(yàn)中心

為減小實(shí)驗(yàn)誤差，提高檢測(cè)結(jié)果精確度，評(píng)定金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)的不確定度。分析速凍制品（水餃）中金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)不確定度的來源，采用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差的方法來評(píng)定金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù)的不確定度。測(cè)量結(jié)果表明，擴(kuò)展不確定度為0.08%，該方法簡(jiǎn)便，適合于每一個(gè)樣本的檢驗(yàn)結(jié)果，隨著檢驗(yàn)結(jié)果的不斷增加，可隨時(shí)加入到合并樣本中，重新計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，更新其不確定度的取值范圍。

目的

評(píng)價(jià)金黃色葡萄球菌定性檢驗(yàn)測(cè)量不確定度評(píng)估。

評(píng)定方法

依據(jù)《測(cè)量不確定度評(píng)定方法與表示》（JJF1059-1999）和《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》（GB 4789.10-2010），參照國際通行的菌落數(shù)檢測(cè)結(jié)果的不確定度評(píng)定方法。

檢驗(yàn)方法

依據(jù)GB4789.10-2010食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物學(xué)部分，以無菌操作取檢樣25 g放于含有225 mL滅菌生理鹽水的無菌均質(zhì)杯中，8 000～10 000 r/min均質(zhì)1～2 min制作成1∶10的均勻稀釋樣液。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)或?qū)ξ廴厩闆r的估計(jì)，選擇2～3個(gè)稀釋度，再進(jìn)行10倍遞增稀釋，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液以0.3、0.3、0.4 mL接種量分別加入3塊Baird-parker平板，然后用無菌L棒涂布整個(gè)平板，涂布后靜置10 min，如樣液不易吸收，可將平板放在培養(yǎng)箱（36±1）℃培養(yǎng)1 h；等樣液吸收后翻轉(zhuǎn)平板，置（36±1）℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)45～48 h。

達(dá)到培養(yǎng)時(shí)間后，根據(jù)平板計(jì)數(shù)的情況選擇公式（1）或公式（2）進(jìn)行典型菌落的計(jì)數(shù)。

公式（1）：

其中，T為樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù)；A為某一稀釋度典型菌落的總數(shù)；B為某一稀釋度血漿凝固酶陽性的菌落數(shù)；C為某一稀釋度用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù)；d為稀釋因子。

公式（2）：

其中，T為樣品中金黃色葡萄球菌菌落數(shù)；A1為第一稀釋度（低稀釋度）典型菌落的總數(shù)；A2為第二稀釋度（高稀釋度）典型菌落的總數(shù)；B1為第一稀釋度（低稀釋度）血漿凝固酶陽性菌落數(shù)；B2為第二稀釋度（高稀釋度）血漿凝固酶陽性菌落數(shù)；C1為第一稀釋度（低稀釋度）用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù)；C2為第二稀釋度（高稀釋度）用于血漿凝固酶試驗(yàn)的菌落數(shù)；d為稀釋因子。

不確定度來源

在微生物檢驗(yàn)中，樣品中細(xì)菌分布的均勻性和重復(fù)測(cè)量帶來的不確定度是影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度的主要原因，而B類不確定度分量對(duì)合成不確定度影響較少。按《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)》（GB 4789.10-2010）中的方法，同一樣品每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液以0.3、0.3、0.4 mL接種量分別加入3塊Baird-parker平板，因此可以采用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢測(cè)結(jié)果的不確定度。適合A類的評(píng)估方式。

數(shù)學(xué)模型

準(zhǔn)備同一食品（水餃）16份樣品，通過對(duì)16份樣品加入目的菌的檢測(cè)，估算每一份樣品的微生物含量。

各樣品分別由不同人員進(jìn)行測(cè)量，同一樣品的兩次測(cè)量由同一人員進(jìn)行，X1和X2為兩次測(cè)量結(jié)果，X為兩次測(cè)量平均結(jié)果。

設(shè)菌落總數(shù)為A，檢測(cè)結(jié)果為X，則A=x cfu/g。

不確定度的計(jì)算

（1）列出每一樣品的兩次測(cè)量結(jié)果X1和X2，見表1。

從檢驗(yàn)結(jié)果可知，如直接用貝塞爾公式計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，由于數(shù)據(jù)的散發(fā)性較大，計(jì)算出的合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差很大，當(dāng)樣本均值較小時(shí)其不確定度則會(huì)過大，此時(shí)可以對(duì)上述數(shù)據(jù)取對(duì)數(shù)后，計(jì)算出樣本檢驗(yàn)結(jié)果對(duì)數(shù)值的均值和殘差，將中間計(jì)算結(jié)果，見表2。根據(jù)貝賽爾公式，可計(jì)算出檢測(cè)結(jié)果對(duì)數(shù)值的合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差：對(duì)測(cè)量結(jié)果取對(duì)數(shù)，得到每一樣品的logX1和logX2兩次測(cè)量的平均值。

表2 16份樣品分別求殘差平方和

表1 16份樣品兩次檢測(cè)結(jié)果

（2）由各樣品的殘差平方和，計(jì)算其合并樣本平方差，得到：

（2）合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

每一樣品測(cè)量?jī)纱?，因此兩次測(cè)量平均值的試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)差即合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

（3）擴(kuò)展不確定度

取包含因子k=2，得：

（4）金黃色葡萄球菌數(shù)測(cè)量平均值：395.9375≈396。

結(jié)果報(bào)告

水餃中金黃色葡萄球菌平均計(jì)數(shù)A=396 cfu/g，擴(kuò)展不確定度U(A)為32 cfu/g，K=2。

應(yīng)用

以第1個(gè)樣品為例，兩組結(jié)果250和300的log值的平均值為2.437 5，因此取值區(qū)間為2.437 5±0.08，即分布于2.5175～2.3575，取反對(duì)數(shù)的平均值的取值區(qū)間為300～250。

以第2個(gè)樣品為例，兩組結(jié)果350和380 的 log值的平均值為2.552 0，因此取值區(qū)間為2.552 0±0.08，即分布于2.6320～2.4720，取反對(duì)數(shù)的平均值的取值區(qū)間為350～380。

以第3個(gè)樣品為例，兩組結(jié)果300和330 的log值的平均值為2.498 0，因此取值區(qū)間為2.498 0±0.08，即分布于2.5780～2.4180，取反對(duì)數(shù)的平均值的取值區(qū)間為300～330。

以第16個(gè)樣品為例，兩組結(jié)果480和380的log值的平均值為2.630 5，因此取值區(qū)間為2.630 5±0.08，即分布于2.710 5～2.550 5，取反對(duì)數(shù)的平均值的取值區(qū)間為480～380。

結(jié)論

從計(jì)算結(jié)果可知，由于檢驗(yàn)結(jié)果的散發(fā)性較大，如直接用貝賽爾公式計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差所得到的不確定度不適合每一個(gè)樣本。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果取對(duì)數(shù)后，用合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差求檢驗(yàn)結(jié)果的不確定度則使用方便，且適合于每一個(gè)樣本。隨著檢驗(yàn)結(jié)果的不斷增加，可隨時(shí)加入到合并樣本中，重新計(jì)算合并樣本標(biāo)準(zhǔn)差，更新其不確定度的取值范圍。