李云芳 周朱瑛 李光乾

●論 著

黃芩苷對驚厥持續(xù)狀態(tài)幼年大鼠海馬IL-lβ、NF-κB表達(dá)的影響

李云芳 周朱瑛 李光乾

目的 觀察幼年大鼠驚厥持續(xù)狀態(tài)（SC）后海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡以及IL-1β和NF-κB蛋白、MicroRNA表達(dá)變化，并了解黃芩苷（BC）對其影響。方法 將195只19 d齡SD雄性大鼠隨機分成生理鹽水對照組（NS組）、驚厥持續(xù)狀態(tài)組（SC組）和黃芩苷預(yù)處理組（BC組），每組65只；各組按處死時間點隨機分為4、12、24、48和72 h組。采用氯化鋰-匹魯卡品化學(xué)點燃法制備幼年大鼠SC模型；采用免疫組化法檢測大鼠海馬中IL-lβ、NF-κB蛋白表達(dá)，RT-PCR法檢測NF-κB MicroRNA表達(dá)，TUNEL法檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)。結(jié)果 IL-lβ：與NS組（12、24、48和72 h分別為11.47±2.51、12.49±2.58、13.19±2.39和12.79±5.30）比較，SC組（12、24、48和72 h分別為29.38±5.18、40.09±5.16、35.32±6.59和27.98±4.16）表達(dá)增強（均P＜0.01）；與SC組比較，BC組（12、24和48 h組分別為21.19±4.54、29.78±4.39和25.91±5.64）表達(dá)降低（均P＜0.05）。NF-κB：與NS組（4、12、24、48和72 h組分別為45.76±15.41、41.26±6.28、50.61±12.54、51.72±6.52和52.65±7.65）比較，SC組（4、12、24、48和72 h組分別為64.06±6.18、71.16±6.49、79.34±11.76、67.07±6.58和65.12±9.66）表達(dá)增強（均P＜0.05）；與SC組比較，BC組（4、12和24 h組分別為52.65±5.73、56.68±5.37和67.01±9.08）表達(dá)降低（均P＜0.05）。NF-κB MicroRNA表達(dá)與蛋白表達(dá)相似。SC組在驚厥后12 h海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)為（11.38±2.35）個，高于NS組的（6.19±1.48）個（P＜0.01），48 h達(dá)到高峰（28.28±5.17）個；BC組在12、24、48和72 h時神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)分別為（8.96±2.21）、（13.07±2.47）、（20.51±4.39）和（17.36±4.12）個，均低于SC組（均P＜0.05），但高于NS組（6.19±1.48）、（6.59±1.66）、（6.79±1.15）和（6.31±1.47）個（均P＜0.05）。結(jié)論 幼年大鼠SC后海馬CA1區(qū)IL-1β和NF-κB表達(dá)增強，神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加；BC預(yù)處理能抑制早期IL-1β和NF-κB蛋白、MicroRNA表達(dá)，減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡，對幼年鼠SC后腦損傷具有一定的保護作用。

海馬 驚厥持續(xù)狀態(tài) 驚厥性腦損傷 黃芩苷 白細(xì)胞介素-1β NF-κB 凋亡

【 Abstract】 Objective To investigate the effects of baicalin(BC)pretreatment on expression of interleukin-1β(IL-lβ), nuclear factor-κB(NF-κB)and neuron apoptosis in hippocampal CA1 region in immature rats with status convulsion(SC). Methods One hundred and ninety-five juvenile male Sprague-Dawley(SD)rats were randomly divided into normal controp group (NS group,n=65),status convulsive group(SC group,n=65)and baicalin pre-treatment group(BC group,n=65).The rats in SC and BC groups were kindled into SC by lithium-pilocarpine chemical method.Expressions of IL-lβ and NF-κB proteins were detected with immunohistochemistry,expression of NF-κB p65 MicroRNA was detected with reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR),the neuron apoptosis was observed by TdT-mediated dUTP nick end labeling(TUNEL)method.Results Immunohistochemistry showed that the IOD values of IL-lβ at 12,24,48,72h after SC were 29.38±5.18,40.09±5.16,35.32± 6.59 and 27.98±4.16,respectively in SC group,which were higher than those in NS group(11.47±2.51,12.49±2.58,13.19±2.39 and 12.79±5.30,P＜0.01),the IOD values ofIL-lβ (21.19±4.54,29.78±4.39,25.91±5.64 at 12,24 and 48 h)in BC group were decreased,as compared with those in SC group(P＜0.05).Immunohistochemistry showed that the IOD values of NF-κB(64.06± 6.18,71.16±6.49,79.34±11.76,67.07±6.58 and 65.12±9.66,respectively at 4,12,24,48 and 72h)in SC group were significant higher than those in NS group(45.76±15.41,41.26±6.28,50.61±12.54,51.72±6.52 and 52.65±7.65,respectively,P＜0.05),the IOD values of NF-κB in BC intervention group(52.65±5.73,56.68±5.37 and 67.01±9.08,respectively at 4,12 and 24h)weredecreased as compared with those in SC group(P＜0.05).The expression ofNF-κB mRNAas measured by RT-PCR presented a similar trends as NF-κB protein expression．The number TUNEL positive cells in hippocampus CAl of SC group(11.38±2.35) was higher than that of NS group 12 h after the SC(6.19±1.48,P＜0.01),reached its highest level at 48 h(28.28±5.17).After the intervention with BCTUNELpositive cells showed a significant drop in SC group(8.96±2.21,13.07±2.47,20.51±4.39 and 17.36± 4.12,respectively,12,24,48 and 72 h,P＜0.05),but stillsignificantly higher than those ofNS group(6.19±1.48,6.59±1.66,6.79± 1.15 and 6.31±1.47,respectively,P＜0.05). Conclusion The expression of IL-1β,NF-κB and neuron apoptosis increase in hippocampus ofjuvenile rats with status convulsion,and baicalin can inhibit the expression ofIL-1β and NF-κB in hippocampus and attenuate the neuron apoptosis.

【 Key words】 Hippocampus Status convulsion Convulsion-induced brain injury Baicalin Interleukin-1β NF-κB Apoptosis

驚厥持續(xù)狀態(tài)（SC）可導(dǎo)致腦內(nèi)選擇性的海馬神經(jīng)元壞死、凋亡[1-2]。近年來研究表明免疫系統(tǒng)也參與這一復(fù)雜的病理過程[1-2]。IL-1β是參與神經(jīng)調(diào)節(jié)的重要細(xì)胞因子，具有觸發(fā)轉(zhuǎn)錄因子如NF-κB的能力[3]，進(jìn)而在不同水平誘導(dǎo)活化Caspase-3，促發(fā)神經(jīng)細(xì)胞凋亡，引起腦損傷[4]。黃芩苷（BC）是從中藥黃芩中提取的一種黃酮類化合物，實驗證明在大鼠腦缺血、缺氧再灌注損傷時具有腦保護作用[5]。本研究建立SC大鼠模型，觀察大鼠SC后海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡和IL-1β、NF-κB表達(dá)的變化，并應(yīng)用BC進(jìn)行干預(yù)，旨在探討IL-1β和NF-κB在驚厥性腦損傷中的作用及BC對其表達(dá)的影響。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 清潔級19d齡雄性SD大鼠195只，體重60～70g，由中國科學(xué)院上海分院試驗動物中心提供。先置實驗動物中心層流實驗室飼養(yǎng)2d，自由攝食、水，室溫25℃，相對濕度70%，人工12/12h晝夜循環(huán)照明。

1.1.2 主要試劑 匹羅卡品（K80477，美國Sigma公司），氯化鋰（K73036，美國Fluka公司），硫酸阿托品針購自浙江瑞新藥業(yè)股份公司；EDTA抗原修復(fù)緩沖液（ZLI-9066）、檸檬酸緩沖液（ZLI-9065）和TUNEL試劑盒（ZK-8005）均由北京中衫金橋生物公司生產(chǎn)；濃縮型DAB試劑盒（L hK612，上海晶美生物工程有限公司生產(chǎn)）。兔抗IL-1β抗體（sc-7884）由Santcruz公司提供，兔抗NF-κB抗體購自武漢博士德生物工程有限公司；濃縮型SABC-兔IgG試劑盒（L hK612）由上海晶美生物工程有限公司提供。BC注射液（06060721）由河北神威藥業(yè)有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 采用隨機數(shù)字表法將實驗動物分為生理鹽水對照組（NS組）、驚厥持續(xù)狀態(tài)組（SC組）和黃芩苷組（BC組），每組再按時間點隨機分為4、12、24、48和72h組各13只。

1.2.2 SC大鼠模型制備 參照李光乾等[2]實驗方法制備SC大鼠模型：SC組按127mg/kg劑量腹腔注射氯化鋰，18h后按1mg/kg劑量腹腔注射硫酸阿托品以拮抗匹魯卡品外周膽堿能反應(yīng)，30min后按100mg/kg劑量腹腔注射匹魯卡品。觀察SC組大鼠出現(xiàn)驚厥發(fā)作的行為學(xué)表現(xiàn)（主要觀察大鼠驚厥潛伏期和驚厥級別）。大鼠驚厥按Racine分級法分為0級（無任何發(fā)作跡象）、1級（凝視、咀嚼和須動）、2級（點頭、濕狗樣抖動或搔抓）、3級（前肢陣攣抽搐）、4級（伴后肢站立的全身強直性發(fā)作）和5級（伴有站立并摔倒的全身強直-陣攣性發(fā)作）。驚厥發(fā)作達(dá)4～5級，持續(xù)時間達(dá)30min以上，驚厥緩解后狀態(tài)良好的大鼠為合格的SC大鼠模型。當(dāng)驚厥發(fā)作達(dá)30min時，給予10%水合氯醛400mg/kg、阿托品1mg/ kg腹腔注射；若驚厥未緩解，可重復(fù)給予水合氯醛1～2次，直至驚厥停止。BC組于驚厥前3d予以BC（用生理鹽水溶解調(diào)節(jié)至pH值7.0、濃度0.16%[6]）16mg/kg腹腔注射，每天1次，連續(xù)3d，其他處理同SC組。NS組用生理鹽水代替氯化鋰和匹魯卡品，其他處理同SC組。

1.2.3 標(biāo)本采集 水合氯醛400mg/kg麻醉動物，斷頭處死。迅速剝離顱骨，取出完整腦組織，置于冰盤上，采用高溫（180℃）滅RNA酶的刀片和鑷子沿矢狀裂將腦組織切分；右側(cè)腦組織快速分離出海馬，放入去RNA酶的EP管中，迅速置于-80℃液氮中保存。將其左半球在距額極2mm和距尾極1mm處各切一刀，取中間段置于4%多聚甲醛溶液中，4℃固定24h，脫水、石蠟包埋后，用振蕩切片機從視交叉處作冠狀連續(xù)切片，厚5μm。

1.2.4 海馬NF-κB p65 MicroRNA含量檢測 采用RT-PCR法。每組隨機取8只大鼠的海馬，稱取50～100mg，采用Trizol試劑提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，PCR反應(yīng)用β肌動蛋白（β-actin）作為內(nèi)參照，NF-κB和β-actin引物由上?；瞪锕こ逃邢薰驹O(shè)計合成，序列如下。（1）NF-κB：上游5′-GGCAT－GCGTTTCCGTTACA-3′，下游5′-GATCTGCCGAGTAAACCGGAA-3′，產(chǎn)物長度515 bp；（2）β-actin：上游5′-GGTATGGAATCCTG TGGCAYAT-3′，下游5′-GTCCGCCTAGAAGCAYTT-3′，產(chǎn)物長度345bp。采用RevertAidTM First Strand Cdna Synt hesis Kit和InsTA－clone PCR Cloning Kit（均購自美國Fermentas公司），反應(yīng)體系為RNase Free d H2O 11.5μl，5×PCR buffer 2.0 μl，10mmol/L dNTP Mixture 0.5μl，25mmol/L MgCl21.2 μl，Taq DNA酶0.2μl，上、下游特異性PCR引物各0.8 μl，cDNA模板3.0μl，在DNA循環(huán)合成儀上進(jìn)行PCR擴增，擴增條件：94℃預(yù)變性5min，94℃30 s，57℃30 s，72℃1min，共35個循環(huán)，72℃延伸8min。取5μl PCR產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中跑電泳。應(yīng)用凝膠成像分析系統(tǒng)對條帶掃描分析，測定NF-κB p65 PCR產(chǎn)物DNA條帶與內(nèi)參照β-actin條帶的吸光度比值作為NF-κB p65 MicroRNA的相對含量。

1.2.5 IL-1β、NF-κB免疫組化染色 每組隨機取8只大鼠的石蠟切片，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，加入0.3%H2O2處理10 min，高壓修復(fù)（IL-1β 5min、NF-κB 10min），加入兔抗IL-1β、NF-κB抗體孵育24h（4℃），生物素化羊抗兔IgG、SABC復(fù)合物各孵育10min；步驟間用0.01mol/L PBS充分漂洗。用DAB/H2O2溶液顯色5～10min，蘇木素復(fù)染1min，漂洗，常規(guī)脫水，透明，封片。以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒細(xì)胞為IL-1β陽性細(xì)胞，胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒細(xì)胞為NF-κB陽性細(xì)胞，使用Olympus自動圖像采集系統(tǒng)，應(yīng)用image pro plus5.0軟件對各組海馬CA1區(qū)隨機抽取的5個不相重疊的高倍視野測量累積光密度值（IOD）作圖像分析。

1.2.6 海馬神經(jīng)凋亡細(xì)胞檢測 采用TUNEL法。按照試劑盒操作說明書進(jìn)行：（1）石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化；（2）用蛋白酶K（20μg/ml）消化孵育，37℃，15min；（3）標(biāo)記：PBS沖洗3次×5min后，擦干樣品周圍水分，滴加50 μl TUNEL反應(yīng)混合物（1∶19），在濕盒中37℃孵育60min；（4）信號轉(zhuǎn)化和分析：PBS沖洗3次×5min后，擦干樣品周圍水分，加入50μl轉(zhuǎn)化劑POD，在濕盒中37℃孵育30 min；（5）PBS沖洗3次×5min后，加入50μl新鮮配制的DAB底物溶液，室溫（20℃）孵育10min，PBS洗5min×3次。自來水沖洗適時中止顯色；蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明中性樹膠封片；（6）陰性對照：以標(biāo)記溶液（含有核苷酸混合液的反應(yīng)液）代替TUNEL反應(yīng)混合物，其余步驟同上；（7）結(jié)果判定：細(xì)胞核中有棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞。在光鏡下，每張各選CA1區(qū)陽性細(xì)胞最集中的5個高倍視野，計算出每個高倍視野的陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗，用表示。多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較若滿足方差齊性采用LSD-t檢驗，方差不齊則用Dunnet′s T3檢驗；組內(nèi)不同階段比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠不同時間點海馬NF-κB p65 MicroRNA表達(dá) NS組大鼠海馬NF-κB p65 MicroRNA表達(dá)在各時間點差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）；SC組大鼠海馬NF-κB p65 MicroRNA表達(dá)升高，24h達(dá)到峰值，48h開始下降，72h降至基線水平。SC組4、12、24和48h的大鼠海馬NF-κB p65 MicroRNA表達(dá)均明顯高于NS組（均P＜0.05）。BC組4、12和24h的大鼠海馬NF-κB p65 MicroRNA表達(dá)明顯低于SC組（均P＜0.05），見表1和圖1（封三）。

表1 各組大鼠不同時間點海馬NF-κB p65 MicroRNA表達(dá)水平比較

2.2 NF-κB免疫組化結(jié)果 NS組各時間點大鼠海馬CA1區(qū)可見少量NF-κB陽性細(xì)胞；SC組大鼠海馬CA1區(qū)NF-κB陽性細(xì)胞在4 h時明顯增多，24 h達(dá)到峰值。5個時間點SC組海馬區(qū)NF-κB免疫反應(yīng)累積IOD值均高于NS組（均P＜0.05）；BC組海馬區(qū)NF-κB免疫反應(yīng)累積IOD值均低于SC組，以4、12和24 h時最明顯（均P＜0.05）；除4 h外其他4個時間點的IOD值，均為BC組高于NS組（均P＜0.05），見表2和圖2（封三）。

表2 各組大鼠不同時間點海馬區(qū)NF-κB免疫反應(yīng)累積IOD值比較

2.3 IL-1β免疫組化結(jié)果 NS組各時間點大鼠海馬CA1區(qū)可見少量IL-1β陽性細(xì)胞；SC組大鼠海馬CA1區(qū)IL-1β陽性細(xì)胞在12h時明顯增多，24h達(dá)到峰值，48h開始減少。SC組12、24、48和72h時間點免疫反應(yīng)累積IOD值均高于NS組（均P＜0.01）；BC組12、24和48h時間點免疫反應(yīng)累積IOD值均低于SC組（均P＜0.05）；除4h外其他4個時間點的IOD值，均為BC組高于NS組（均P＜0.05），見表3和圖3（封三）。

表3 各組大鼠不同時間點海馬區(qū)IL-lβ免疫反應(yīng)累積IOD值比較

2.4 各組大鼠海馬CA1區(qū)TUNEL檢測結(jié)果 NS組各時間點大鼠海馬CA1區(qū)均可見少量TUNEL陽性細(xì)胞；SC組海馬CA1區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞在12h時明顯增多，48h達(dá)到峰值。SC組12、24、48和72h時間點海馬CA1區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞均多于NS組（均P＜0.01）；BC組12、24和48h時間點TUNEL陽性細(xì)胞均少于SC組（均P＜0.05）；除4 h外其他4個時間點的TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)，均為BC組高于NS組（均P＜0.05），見表4和圖4（封三）。

表4 各組大鼠不同時間點海馬CA1區(qū)TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)比較

3 討論

小兒驚厥易發(fā)生SC，且易繼發(fā)癲癇等后遺癥。在驚厥性腦損傷發(fā)生過程中，多種因素導(dǎo)致神經(jīng)元壞死和細(xì)胞凋亡是腦損傷的基本原因。有研究報道促炎因子如IL-1β的激活在癇性發(fā)生中可能起重要作用[7]。IL-1β主要由腦內(nèi)的膠質(zhì)細(xì)胞、血腦屏障的內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元和淋巴細(xì)胞通過自分泌和旁分泌途徑產(chǎn)生[8]。SC激活損傷區(qū)內(nèi)的炎性細(xì)胞，特別是小膠質(zhì)細(xì)胞，分泌關(guān)鍵性細(xì)胞因子IL-1β而觸發(fā)炎癥反應(yīng)[9]，從而導(dǎo)致腦損害。NF-κB最初在B淋巴細(xì)胞中檢測到，且能與免疫球蛋κ輕鏈基因增強子上一段10bp核苷酸序列特異性結(jié)合的核因子，后來發(fā)現(xiàn)其廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)，激活后能進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)并與DNA結(jié)合，從而促進(jìn)多種靶基因的轉(zhuǎn)錄[10]。Gan等[11]研究大鼠氯化鋰-匹魯卡品誘導(dǎo)的顳葉癲癇模型中，IL-1β和NF-κB在癲癇后12h開始升高，3d后下降。Miller等[12]研究發(fā)現(xiàn)在驚厥模型中，NF-κB介導(dǎo)了海馬神經(jīng)元的凋亡。研究表明，IL-1β在早期活化后，以IL-1β啟動因子特異的方式導(dǎo)致NF-κB持續(xù)活化，從而進(jìn)一步激活其下游信號，產(chǎn)生免疫炎癥反應(yīng)，加重驚厥后腦損傷[13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)育期大鼠海馬凋亡細(xì)胞數(shù)在SC后12h明顯升高，48h達(dá)到峰值，與相關(guān)報道相似[14]；提示海馬神經(jīng)元發(fā)生病理損害，且以SC后48h改變最明顯。同時，大鼠SC后12h海馬IL-1β蛋白表達(dá)明顯增加，24h達(dá)到峰值后逐漸下降；而NF-κB于SC后4h開始升高，24h達(dá)峰值，72h基本降至正常；且IL-1β與NF-κB表達(dá)明顯增高開始時間先于大鼠腦組織海馬凋亡細(xì)胞升高時間，提示IL-1β和NF-κB參與了驚厥后腦損傷的發(fā)生、發(fā)展過程，這或許是早期驚厥性腦損傷及神經(jīng)元病理損害的原因之一。本實驗表明NF-κB先于IL-1β升高，提示除IL-1β激活NF-κB引起神經(jīng)元凋亡過程外，SC后可能還存在其他途徑激活NF-κB。NF-κB的活化可促使多種炎癥介質(zhì)的釋放和激活，并形成一復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，通過相互作用擴大炎癥反應(yīng)，加重腦損傷[15]。一方面，活化后的NF-κB迅速轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，與數(shù)種目的基因特定DNA序列結(jié)合，從而啟動該基因轉(zhuǎn)錄，一些表達(dá)產(chǎn)物如ICAM-1、IL-1β等炎癥細(xì)胞因子參與炎癥反應(yīng)[16]。另一方面，IL-1β釋放增加又促進(jìn)IκB的磷酸化，使NF-κB激活，延續(xù)炎癥反應(yīng)的復(fù)雜環(huán)路調(diào)節(jié)，導(dǎo)致最初的炎癥信號不斷放大。有研究表明神經(jīng)元應(yīng)激后存在可以激活NF-κB的一系列因子，包括TNF、興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸、神經(jīng)生長因子、淀粉樣前蛋白分泌形式和細(xì)胞黏附因子等[17]，但SC后是否存在這些因子對NF-κB的激活，有待進(jìn)一步研究。

BC是中藥黃芩的主要有效成分之一，具有抗炎、降脂、解熱、清除超氧陰離子、鎮(zhèn)靜等作用。最近研究表明BC通過降低缺血再灌注大鼠腦組織MDA含量，并增加SOD活性，抑制自由基導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化作用，減輕自由基對腦組織的損傷[18]；從而對大鼠腦缺血、缺氧再灌注損傷具有腦保護作用[5-6]。實驗研究表明，SC時腦組織會發(fā)生缺血缺氧，神經(jīng)元會產(chǎn)生大量氧自由基，NF-κB的靶基因FasL在氧自由基作用下表達(dá)量上調(diào)，增強了激活凋亡的靈敏度。本實驗發(fā)現(xiàn)BC組大鼠海馬區(qū)IL-1β、NF-κB表達(dá)均較SC組明顯降低，且海馬凋亡神經(jīng)細(xì)胞數(shù)明顯下降，提示BC對驚厥性腦損傷可能有一定的保護作用。因此，我們推測BC發(fā)揮作用的細(xì)胞內(nèi)機制如下：（1）清除驚厥過程中缺血、缺氧造成的細(xì)胞內(nèi)氧自由基；（2）下調(diào)IL-1β進(jìn)而降低NF-κB活性，減少NF-κB調(diào)控的一系列細(xì)胞因子生成。然而，BC是否通過調(diào)節(jié)NF-κB抑制蛋白IκB表達(dá)，從而阻止NF-κB的核移位及與靶基因DNA的結(jié)合，有待進(jìn)一步實驗研究。

[1] Medel-Matus J S,Alvarez-Croda DM,Mart í nez-Quiroz J,etal.IL-1β increases necrotic neuronal cell death in the developing rat hippocampus after status epilepticus by activating type I IL-1 receptor(IL-1RI)[J].Int J Dev Neurosci,2014,38:232-240.

[2] 李光乾,王海萍,蔣春明.驚厥持續(xù)狀態(tài)幼年大鼠海馬中葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78與半胱氨酸門冬氨酸特異性蛋白酶12的表達(dá)及依達(dá)拉奉對其影響[J].中華兒科雜志,2011,49(1):53-59.

[3] Sticozzi C,Belmonte G,Meini A,et al.IL-1β induces GFAP expression in vitro and in vivo and protects neurons from traumatic injury-associated apoptosis in rat brain striatum via NFκB/Ca2+-calmodulin/ERK mitogen-activated protein kinase signaling pathway[J].Neuroscience,2013,252:367-383.

[4] Lamy S,Moldovan P L,Ben Saad A,et al.Biphasic effects ofluteolin on interleukin-1β-induced cyclooxygenase-2 expression in glioblastoma cells[J].Biochim Biophys Acta,2015,1853(1):126-135.

[5] Zhang YY,LiH X,Chen YY,et al.Convergent and divergent pathways decoding hierarchical additive mechanismsin treating cerebralischemia-reperfusioninjury[J].CNSNeurosciTher,2014,20 (3):253-263.

[6] 林小娟,楊于嘉,祁伯祥,等.黃芩苷預(yù)處理對新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護作用[J].中國當(dāng)代兒科雜志,2006,8(3):221-224.

[7] Ravizza T,Balosso S,Vezzani A.Inflammation and prevention of epileptogenesis[J].NeurosciLett,2011,497(3):223-230.

[8] VezzaniA,Baram T Z.New roles for interlukin-1beta in the mechanisms ofepilepsy[J].Epilepsy Cur,2007,7(2):45-50.

[9] VezzaniA,Balosso S,Ravizza T.The role ofcytokines in the pathophysiology ofepilepsy[J].Brain Be hav Immun,2008,22:797-803.

[10] 葉欣,萬曙,詹仁雅.NF-κB信號通路和腦出血后的繼發(fā)性腦損傷[J].國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志,2010,37(2):171-175.

[11] Gan N,Yang L,Omran A,et al.Myoloid-related protein 8,an endogenous ligand of Toll-like receptor 4,is involved in epileptogenesis of mesial temporal lobe epilepsy via activation of the nuclearfactor-κBpathwayinastrocytes[J].MolNeurobiol,2014,49 (1):337-351.

[12] Miller J A,Kirkley K A,Padmanabhan R,et al.Repeated exposure to low doses of kainic acid activates nuclear factor kappa B (NF-κB)prior to seizure in transgenic NF-κB/EGFP reporter mice[J].Neurotoxicology,2014,44:39-47.

[13] Griffin B D,Moynagh P N.Persistent interleukin-1beta signaling causes long term activation of NF kappaB in a promoter-specific manner in human glial cells[J].J Biol C hem,2006,281: 10316-10326.

[14] Wang S,Wang S,Shan P,et al.Mu-calpain mediates hippocampal neuron deat hin rats after lithium-pilocarpine-induced status epilepticus[J].Brain Res Bull,2008,76:90-96.

[15] Aronowski J,Hall C.New horizons for primary intracerebral hemorrhage treatment:experience from preclinical studies[J].Neurol Res,2005,27(3):268-279.

[16] Wu S,Fang C,Kim J,et al.Enhanced pulmonary inflammation following experimental intracerebral hemorrhage[J].Exp Neurol, 2006,200(1):245-259.

[17] Mattson MP,Meffert MK.Roles for NF-kappaB in nerve cellsurvival,plasticity,and disease[J].CellDeathDiffer,2006,13:852-860.

[18] 胡秀梅.黃芩苷對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2010,41(2):100.

Effects of baicalin pretreatment on expression of IL-lβ,NF-κB and neuron apoptosis in hippocampus of immature rats with status convulsion

LI Yunfang,ZHOU Zhuying，LI Guangqian.Department of Neurology,Hangzhou Children's Hospital，Hangzhou 310014, China

2015-05-18）

（本文編輯：陳丹）

浙江省中醫(yī)藥科技計劃項目（2010ZA105）

310014 杭州市兒童醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科

李光乾，E-mail：lgqwz@aliyun.com