于 佳（大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥學(xué)部，遼寧大連 116027）

鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸的制備及體外釋放度考察

于 佳＊（大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院藥學(xué)部，遼寧大連 116027）

目的：制備鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸，并考察其體外釋放度。方法：采用流化床底噴上藥技術(shù)制備鹽酸環(huán)苯扎林載藥微丸，再以Surelease?水分散體作為緩釋包衣劑制成鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸。以包衣時(shí)間、包衣效率和微丸粘連率為因變量，通過Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化包衣工藝中的進(jìn)風(fēng)溫度、霧化壓力、供液速度。利用f2相似因子法對自制制劑和市售制劑（AMRIX?）在不同介質(zhì)（水、pH 1.2鹽酸水溶液和pH 4.5醋酸鹽緩沖液、6.8磷酸鹽緩沖液）中的體外釋放度進(jìn)行比較。結(jié)果：緩釋包衣工藝中包衣增質(zhì)量為7%，進(jìn)風(fēng)溫度為55℃，霧化壓力為0.36 MPa，供液速度為12.5 ml/min；包衣時(shí)間為（47.1±2.1）min，包衣效率為（88.4±1.6）%，微丸粘連率為（2.7±0.3）%，與其相應(yīng)預(yù)測值（44.5 min、90.0%、2.9%）的相對誤差分別為5.8%、1.8%、6.9%；在4種介質(zhì)中自制制劑與市售制劑的f2分別為77.7、85.9、83.5、84.6。結(jié)論：制得體外釋放較好的鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸。

鹽酸環(huán)苯扎林；緩釋微丸；體外釋放度；Box-Behnken響應(yīng)面法；包衣工藝；優(yōu)化

鹽酸環(huán)苯扎林最早是由默克公司研制開發(fā)的一種三環(huán)類肌肉松弛劑，于20世紀(jì)80年代在美國等十多個(gè)國家批準(zhǔn)上市銷售，臨床上主要用于治療伴有疼痛癥狀的骨骼肌肉系統(tǒng)不適或者肌肉痙攣，能夠明顯緩解肌肉痙攣并緩解相關(guān)的癥狀（包括疼痛、觸痛、運(yùn)動限制、日?；顒酉拗频龋1-3]。然而，由于鹽酸環(huán)苯扎林在生物體內(nèi)半衰期較短，其普通劑型每日需服藥3次，用藥較為頻繁，影響了患者用藥的順應(yīng)性[4]。

鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸膠囊是由美國Anesta制藥公司首先研制成功的緩釋制劑，并于2007年2月在美國獲準(zhǔn)上市，商品名為AMRIX?。鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸膠囊每日僅需服藥1次，顯著提高了患者用藥的順應(yīng)性。仿制開發(fā)鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸膠囊將具有很好的市場前景，因此本研究將以上市銷售的鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸膠囊作為參比制劑進(jìn)行仿制開發(fā)。

1 材料

1.1 儀器

LC-6A型高效液相色譜系統(tǒng)（日本島津公司）；Mini-DPL型流化床包衣設(shè)備（重慶精工制藥機(jī)械公司）；RDB-8A型蠕動泵（天津大學(xué)無線電廠）；RC806型溶出儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸環(huán)苯扎林原料藥和鹽酸環(huán)苯扎林對照品（山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，批號：CBZ150411、CBZ-S150615，純度：＞99.0%、＞99.5%）；鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸膠囊（商品名：AMRIX?，美國Anesta制藥公司，批號：M29817302，規(guī)格：每粒15 mg）；藥用丸芯（蔗糖型，杭州高成生物營養(yǎng)技術(shù)有限公司，批號：140218，規(guī)格：20～30目）；羥丙甲基纖維素E5（HPMC E5，陶氏化學(xué)公司惠贈，批號：3897286N004）；Surelease?水分散體（上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司惠贈，批號：2861837911）；乙腈（默克化學(xué)試劑有限公司）；氫氧化鈉、磷酸二氫鉀均由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供；水為蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸環(huán)苯扎林含量的測定

2.1.1 色譜條件和專屬性試驗(yàn) 色譜柱：Hypersil C18（250mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH 7.0）-乙腈（70∶30），流速：1.0 ml/min；檢測波長：290 nm；柱溫：20℃；進(jìn)樣量：20 μl。該色譜條件下，空白輔料不干擾鹽酸環(huán)苯扎林的測定，分離良好?？瞻纵o料溶液、對照品溶液和供試品溶液的色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.1.2 方法學(xué)考察 用流動相制備含鹽酸環(huán)苯扎林質(zhì)量濃度分別為0.4、1.0、2.0、4.0、10.0、20.0 μg/ml的系列對照品溶液，進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以峰面積（A）對質(zhì)量濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得方程為A＝23 683c－3 526.8（r＝0.999 9），鹽酸環(huán)苯扎林質(zhì)量濃度的線性范圍為0.4～20.0 μg/ml。儀器精密度RSD＝0.77%（n＝6）；方法精密度RSD＝1.01%（n＝6）；平均方法回收率為99.6%（RSD＝1.21%，n＝9）。

2.2 鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸的制備

2.2.1 載藥微丸的制備 采用空白蔗糖丸芯上藥法制備鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸[5-8]。稱取處方量的鹽酸環(huán)苯扎林原料藥，溶解于含有5.0%HPMC E5的水溶液中，攪拌均勻，備用；稱取空白蔗糖丸芯置于Mini-DPL型流化床內(nèi)，采用底噴裝置包載藥層。包載藥層的工藝參數(shù)：進(jìn)風(fēng)溫度為55℃，霧化壓力為0.30 MPa，供液速度為10 ml/min。在載藥過程中隨時(shí)調(diào)整進(jìn)風(fēng)溫度和供液速度直至載藥結(jié)束，將載藥微丸置于40℃烘箱中干燥20 min，控制水分＜2.0%，備用。

2.2.2 緩釋微丸的制備 將乙基纖維素濃度為25%的Surelease?水分散體加水稀釋成固含量為10%的包衣液，攪拌分散均勻。將載藥微丸置于Mini-DPL型流化床內(nèi)進(jìn)行包衣。包衣工藝參數(shù)：進(jìn)風(fēng)溫度為45～60℃，霧化壓力為0.1～0.5 MPa，供液速度為5～15 ml/min。在包衣過程中隨時(shí)調(diào)整進(jìn)風(fēng)溫度和供液速度直至緩釋層包衣結(jié)束，將緩釋微丸置于40℃烘箱中過夜熟化。

2.3 釋放度測定方法

參照美國FDA溶出度數(shù)據(jù)庫公布的鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸釋放度測定方法進(jìn)行體外釋放試驗(yàn)。采用槳法，轉(zhuǎn)速為50 r/min，釋放介質(zhì)為0.1 mol/L鹽酸溶液，體積為900 ml，溫度為（37±0.5）℃。分別在1、2、4、6、8、12、16 h取樣5 ml（同時(shí)補(bǔ)加等溫釋放介質(zhì)5 ml），過0.45 μm微孔濾膜過濾，采用高效液相色譜法測定鹽酸環(huán)苯扎林的含量，計(jì)算累積釋放度。

2.4 鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸包衣處方考察

以Surelease?水分散體為緩釋包衣液[9]，按“2.2”項(xiàng)下鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸的制備方法進(jìn)行操作。緩釋衣層包衣增質(zhì)量分別控制在3%、5%、7%、10%，按“2.3”項(xiàng)下方法考察緩釋微丸的體外釋放度。結(jié)果顯示，隨著包衣增質(zhì)量的增大，鹽酸環(huán)苯扎林釋放速率逐漸減慢；當(dāng)包衣增質(zhì)量為7%時(shí)，釋放曲線比較合理且釋藥完全，故選擇包衣增質(zhì)量為7%。不同包衣增質(zhì)量對藥物釋放的影響見圖2。

圖2 不同包衣增質(zhì)量對藥物釋放的影響（n＝6）Fig 2 Effects of different coating weight on the drug release（n＝6）

2.5 鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸包衣工藝優(yōu)化

2.5.1 自變量、因變量與試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸包衣過程中發(fā)現(xiàn)，進(jìn)風(fēng)溫度、霧化壓力和供液速度3個(gè)參數(shù)對微丸的包衣時(shí)間、包衣效率和微丸粘連率影響較大。因此，本研究以進(jìn)風(fēng)溫度（X1，℃）、霧化壓力（X2，MPa）、供液速度（X3，ml/min）為自變量，以包衣時(shí)間（Y1，min）、包衣效率[Y2，包衣效率（%）＝（包衣后微丸質(zhì)量－包衣前微丸質(zhì)量）/噴入包衣材料質(zhì)量×100%]和微丸粘連率[Y3，微丸粘連率（%）＝在16～24目篩范圍外的微丸質(zhì)量/微丸總質(zhì)量×100%]為因變量，采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸包衣工藝參數(shù)。自變量與水平見表1，Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表2。

表1 自變量與水平Tab 1 Independent variables and levels

表2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Tab 2 Box-Behnken experimental design and results

2.5.2 數(shù)據(jù)處理與方差分析 采用Design Expert 8.0.1軟件對表2中的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，以評價(jià)指標(biāo)（因變量）分別對各因素（自變量）進(jìn)行多元線性回歸和二次多元方程擬合，對二次多元方程中的各項(xiàng)系數(shù)進(jìn)行F檢驗(yàn)；繪制各因素（自變量）與評價(jià)指標(biāo)（因變量）的等高線圖。二次多元方程的方差分析見表3，等高線圖見圖3、圖4、圖5。

表3 二次多元方程的方差分析結(jié)果Tab 3 Analysis results of variance for two multivariate

圖3 X1、X2、X3與Y1的等高線圖Fig 3 Contour plot of X1，X2，X3on Y1

圖4 X1、X2、X3與Y2的等高線圖Fig 4 Contour plot of X1，X2，X3on Y2

圖5 X1、X2、X3與Y3的等高線圖

Fig 5 Contour plot of X1，X2，X3on Y3

由方差分析結(jié)果與等高線圖可知，在設(shè)定的參數(shù)范圍內(nèi)，霧化壓力和供液速度對包衣時(shí)間、包衣效率影響較大；進(jìn)風(fēng)溫度、霧化壓力和供液速度對微丸粘連率影響均較大；而進(jìn)風(fēng)溫度對包衣時(shí)間、包衣效率影響相對較小，甚至幾乎沒有影響。隨著霧化壓力的提高，包衣時(shí)間、包衣效率顯著降低；隨著供液速度的提高，包衣時(shí)間顯著降低，包衣效率呈先增加、后降低趨勢；隨著進(jìn)風(fēng)溫度、霧化壓力和供液速度的提高，微丸粘連率顯著降低。

2.5.3 優(yōu)化工藝參數(shù)驗(yàn)證 根據(jù)包衣時(shí)間最短、包衣效率最高、微丸粘連率最小為標(biāo)準(zhǔn)，由Design Expert 8.0.1軟件分析得出最優(yōu)包衣工藝：進(jìn)風(fēng)溫度為55℃，霧化壓力為0.36 MPa，供液速度為12.5 ml/min。根據(jù)該工藝參數(shù)軟件給出了各評價(jià)指標(biāo)的預(yù)測值：包衣時(shí)間為44.5 min，包衣效率為90.0%，微丸粘連率為2.9%。按最優(yōu)包衣工藝參數(shù)重復(fù)包衣3批樣品進(jìn)行驗(yàn)證，實(shí)測值與預(yù)測值的測定結(jié)果見表4[表中相對誤差（%）＝（觀測值－預(yù)測值）/預(yù)測值×100%]。

表4 實(shí)測值與預(yù)測值的測定結(jié)果Tab 4 Predicted values and measured values

由表4可知，觀測值與預(yù)測值比較接近，相對誤差均小于10%，說明模型預(yù)測性良好。

2.6 與市售制劑的體外釋放度進(jìn)行比較

參照《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[10]規(guī)定，需對鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸進(jìn)行多介質(zhì)釋放度對比研究，以評價(jià)自制的鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸與市售制劑的差異。采用“2.3”項(xiàng)下體外釋放度測定方法，分別考察在4種釋放介質(zhì)（pH 1.2鹽酸水溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液、水）中自制鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸與市售制劑（AMRIX?）的釋放曲線，采用f2相似因子法[11-12]比較其相似性。自制制劑與市售制劑在不同介質(zhì)中的釋放曲線相似性比較見表5。

表5 自制制劑與市售制劑在不同介質(zhì)中的釋放曲線相似性比較Tab 5 The similarity comparison of release curves between prepared pellets and commercially available pellets in different mediums

由表5可見，在4種釋放介質(zhì)中自制鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸與市售制劑的f2均大于50，說明自制制劑與市售制劑在4種釋放介質(zhì)中藥物釋放行為相似。

3 討論

Surelease?水分散體是卡樂康包衣技術(shù)有限公司開發(fā)的一個(gè)由乙基纖維素、增塑劑和穩(wěn)定劑構(gòu)成的完全配方的緩釋型水性包衣系統(tǒng)，藥物的釋放速率可以通過增加或者減少包衣增質(zhì)量（衣膜厚度）來調(diào)節(jié)。Surelease?水分散體釋藥性能不受外界pH的影響，且能夠保證藥物釋放的可重現(xiàn)性。本研究參照原研制劑的處方采用Surelease?水分散體作為鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸的緩釋包衣材料，并通過Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸包衣工藝中參數(shù)，最終制備的鹽酸環(huán)苯扎林緩釋微丸膠囊與參比制劑體外釋放一致性良好，有望應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。

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（編輯：鄒麗娟）

Preparation and in vitro Release Rate Study of Cyclobenzaprine Hydrochloride Sustained-release Pellets

YU Jia（Dept.of Pharmacy，the Second Hospital Affiliated to Dalian Medical University，Liaoning Dalian 116027，China）

OBJECTIVE：To prepare cyclobenzaprine hydrochloride extended-release pellets，and to investigate its release rate in vitro.METHODS：The core pellets were prepared by fluid bed coating technology，and sustained-release pellets were prepared using Surelease?aqueous dispersion as sustained-release coating film material.Box-Behnken response surface methodology was used to optimize inlet air temperature，atomization pressure and liquid feed rate using coating time，coating efficiency and pellets adhesion rate as dependent variables.The release rate of prepared pellets and commercially available pellets（AMRIX?）in different mediums（water，pH 1.2 hydrochloric acid solution，pH 4.5 acetate buffer solution，6.8 phosphate buffer solution）were compared by f2similarity factor.RESULTS：The weight gain of coating material was 7%；inlet air temperature was 55℃；atomization pressure was 0.36 MPa；liquid feed rate was 12.5 ml/min.The relative error of coating time[（47.1±2.1）min]，coating efficiency [（88.4±1.6）%]and pellets adhesion rate[（2.7±0.3）%]to corresponding predicted value（44.5 min，90.0%，2.9%）were 5.8%，1.8%，6.9%，respectively.The f2for prepared pellets and commercially available pellets in 4 kinds of medium were 77.7，85.9，83.5，84.6，respectively.CONCLUSIONS：Cyclobenzaprine hydrochloride sustained-release pellets have been prepared，and have good drug release in vitro.

Cyclobenzaprine hydrochloride；Sustained-release pellets；Release rate in vitro；Box-Behnken response surface methodology；Coating technology；Optimization

R943

A

1001-0408（2016）34-4855-04

2016-05-09

2016-06-13）

＊主管藥師。研究方向：醫(yī)院制劑。電話：0411-84671291-5338。E-mail：songlidr@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.34.32