譚 杰，陳振江，劉付少梅，唐嘯塵,，劉志剛,

（1.廣東海洋大學水產學院，廣東 湛江 524088；2.廣東省南海經濟無脊椎動物健康養(yǎng)殖工程研究中心，廣東 湛江 524088；3.湛江銀浪海洋生物技術有限公司，廣東 湛江 524000）

溫度和鹽度對大珠母貝稚貝存活和生長的互作效應

譚 杰1，陳振江1，劉付少梅3，唐嘯塵1,2，劉志剛1,2

（1.廣東海洋大學水產學院，廣東 湛江 524088；2.廣東省南海經濟無脊椎動物健康養(yǎng)殖工程研究中心，廣東 湛江 524088；3.湛江銀浪海洋生物技術有限公司，廣東 湛江 524000）

采用中心復合設計法和響應曲面分析法，研究溫度（16～32℃）和鹽度（22～38）2個因素對大珠母貝（Pinctada maxima）稚貝存活和生長的互作效應。結果表明，溫度的一次效應、溫度和鹽度的二次效應以及溫鹽的互作效應對存活率、殼長日增長和殼高日增長的影響極顯著（P＜0.01），鹽度的一次效應對存活率的影響顯著（P＜0.05），但鹽度的一次效應和溫鹽的互作效應對殼長日增長和殼高日增長的影響不顯著（P＞0.05）；存活率、殼長日增長和殼高日增長模型的決定系數(shù)分別為0.969 2、0.984 2、0.979 5，校正決定系數(shù)分別為0.938 5、0.968 4、0.959 0，3個模型均具有較好擬合度，可用于大珠母貝存活率、殼長日增長和殼高日增長預測。經模型優(yōu)化，在存活最佳溫鹽組合25.01℃、鹽度30.34條件下，存活率為95%；形態(tài)性狀生長最佳溫鹽組合25.54℃、鹽度31.70條件下，殼長和殼高日增長分別為2.01、1.79mm/d。

大珠母貝；稚貝；溫度；鹽度；互作效應

大珠母貝[Pinctada maxima (Jameson)]又稱白碟貝，屬軟體動物門（Mollusca）瓣鰓綱（Lamellibranchia）異柱目（Anisomyaria）珍珠貝科（Pteriidae）珠母貝屬（Pinctada），是培育優(yōu)質“南洋珠”的理想貝種，在我國主要分布在南海海區(qū)、西沙群島和雷州半島等海域[1]。

大珠母貝是個體最大且適宜培育高檔珠寶級海水珍珠的貝種，貝肉食用具清熱、滋陰功效，貝殼制成珍珠粉可入藥或用于美容，具有十分重要的經濟價值[2]。受海區(qū)環(huán)境惡化影響，野生大珠母貝資源已相當匱乏，被列為我國二級保護動物。為了滿足生產的需要，20世紀70年代，我國開始了大珠母貝的人工繁育及珍珠培育研究[3]。人工繁育的大珠母貝養(yǎng)殖到殼高3cm左右時便出現(xiàn)大規(guī)模死亡的現(xiàn)象，基本上不能通過5cm的關口[4-5]，生產極不穩(wěn)定，難以擴大養(yǎng)殖規(guī)模[6]。針對以上難題，近幾十年來，國內外學者對大珠母貝的人工育苗[3,7-8]、中間培育[6]、遺傳育種[9-13]、養(yǎng)殖環(huán)境和方式[14-16]等方面展開了大量研究。

海水溫度和鹽度是水產養(yǎng)殖中兩個重要的環(huán)境因子，關于其對大珠母貝稚貝生存和生長的互作效應研究暫未見報道。Robert 等[17]指出，多因子存在時對其互作效應的研究更具有實際意義。因此，本研究采用中心復合設計法和響應曲面分析法，研究溫度和鹽度兩個因素間的互作效應對其生長和存活的影響，確定大珠母貝生存和生長的最佳溫鹽組合，以期為大珠母貝將來的海區(qū)養(yǎng)殖提供基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗稚貝取自湛江銀浪海洋生物技術有限公司草潭育苗場以印尼產大珠母貝培育的稚貝，平均殼長（6.77±0.47）mm，平均殼高（4.96±0.60）mm，2015年4月18日運回廣東海洋大學廣東省南海經濟無脊椎動物健康養(yǎng)殖工程研究中心實驗室暫養(yǎng)7 d。暫養(yǎng)期間海水溫度24.5～26.8℃，鹽度28～30，連續(xù)充氣，每天投喂亞心形扁藻（Platymonas subcordiformis）和湛江等鞭金藻（Isochrysis zhanjiangensis）的混合藻液4次，每天100%換水1次。

1.2 方法

1.2.1 實驗設計 根據(jù)預實驗結果，實驗采用中心復合設計（CCD）和響應曲面分析（RSM），以稚貝存活率（SR）、殼長日增長（GL）和殼高日增長（GH）為響應值，以溫度（16～32℃）和鹽度（22～38）為實驗因子，每個因子在上述范圍內各取3個水平，各水平的編碼值分別為 –1、0、1，中心點重復 3 次，共設計 11 個組合，整個實驗重復2次（表1）。實驗中溫度、鹽度分別用 t、S表示。

表1 實驗設計及結果Table 1 Experimental design and results

1.2.2 實驗方法與管理 將暫養(yǎng)7 d的大珠母貝健康稚貝隨機分組，每組 30只，測其殼長、殼高后分別放入容積為1 L（實際水量750mL）的大燒杯中，燒杯置于泡沫箱（30 L）中水浴控溫，泡沫箱蓋黑色薄膜以保證溫度穩(wěn)定和光照強度一致。為防止溫度、鹽度劇變對實驗貝的生理造成影響，按± 3/ h的速率向各個實驗組添加過濾曝氣的淡水或海水晶溶液調節(jié)鹽度；通過發(fā)熱管、冰塊和電子繼電器按 ±1℃/12 h的速率調節(jié)溫度[18]，達到各預設溫鹽組合時開始實驗。

實驗期間，24 h持續(xù)微波充氣，各組每天以湛江等鞭金藻、亞心型扁藻濃縮藻液混合餌料投喂 4次，保持水中藻量約1.5×104個/mL，并通過觀察水色調整投喂量，保證稚貝攝食充足又不產生明顯假糞。每天等溫等鹽50%換水及吸污1次。每天統(tǒng)計并記錄大珠母貝稚貝的死亡數(shù)量，及時清理死亡稚貝。當每個平行組稚貝出現(xiàn)明顯生長且2 d以上沒有出現(xiàn)死亡時即結束實驗，用游標卡尺測量所有稚貝的殼長、殼高，并計算稚貝的存活率和殼長、殼高日增長率。實驗共進行15 d。

1.2.3 測定指標

稚貝存活率（RS）： RS＝（S1/S0）×100% ，

殼高日增長率（RH）：RH＝（H1－H0）/t ，

殼長日增長率（RL）：RL＝（L1－L0）/ t ，

公式中，S1和 S0分別為實驗結束和開始時存活的稚貝數(shù)，t為實驗時間（d），H1和H0分別為實驗結束和開始時稚貝的殼高（mm），L1和L0分別為實驗結束和開始時稚貝的殼長（mm）。稚貝死亡的界定以貝殼完全張開、對刺激沒有反應為標準。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 實驗數(shù)據(jù)用平均值±標準差（Mean ± SD）表示，通過最小二乘法對溫度和鹽度兩個因子與響應值（存活率、殼高日增長和殼長日增長）之間的定量關系進行多元二次回歸擬合，建立回歸模型：

式中，?y為測定的響應值，b0為回歸常數(shù)，b1、b2分別為溫度和鹽度的一次效應，b3為溫度和鹽度的互作效應，b4、b5為溫度和鹽度的二次效應。

采用Design Expert 8.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理，主要包括：模型擬合的ANOⅤA 分析、模型系數(shù)的F顯著性檢驗，響應曲面和等高線作圖。顯著水平設定為α＝0.05，極顯著水平α＝0.01。

2 結果與分析

2.1 溫度和鹽度對稚貝存活的影響

對稚貝存活率進行多元回歸擬合，得到存活率（SR）與溫度（t）和鹽度（S）的二次多項回歸模型（編碼）：＝0.940＋0.063 t＋0.048S－0.060 t× S－0.130 t2－0.087S2。模型的方差分析見表2，結果表明，所建立的回歸模型極顯著（P＜0.01），失擬項不顯著（P＞0.05），表明模型的擬合效果較好。模型的多元相關系數(shù)R2＝0.969 2，校正系數(shù)R2＝0.938 5，說明該模型能解釋約96%的響應值變化，模型的選擇恰當，可用于響應值的預測。

表3是回歸模型系數(shù)的顯著性檢驗結果（表中系數(shù)為編碼值）。由表 3可知，溫度的一次效應、溫度和鹽度的二次效應以及溫鹽的互作效應對大珠母貝存活率的影響均達到極顯著水平（P＜0.01），而鹽度的一次效應對大珠母貝存活的影響僅達顯著水平（P＜0.05）。

表2 存活率回歸模型的方差分析Table 2 Variance analysis of regression model of survival rate

表3 存活率模型系數(shù)的顯著性檢驗Table3 The significant test for the coefficient of survival rate model

稚貝存活率的響應曲面和等高線見圖 1。由圖1－a可見，溫度對存活率的影響曲線較陡，因此溫度對存活率的影響極顯著（P＜0.01），鹽度曲線相對溫度較平緩，影響顯著（P＜0.05）。由圖 1－b可見，等高線圖呈橢圓形，表明溫、鹽的交互作用對存活率的影響極顯著（P＜0.01）。特定鹽度下，隨溫度的升高，存活率先上升后下降；特定溫度下，隨鹽度的升高，存活率也先上升后下降。對存活率模型進行優(yōu)化，結果顯示，溫度25.54℃、鹽度31.70是存活的最佳溫鹽組合，此時存活率最大，為95%。

圖1 溫度、鹽度及其互作效應對大珠母貝稚貝存活率影響的響應曲面（a）和等高線圖（b）Fig.1 Response surface plot (a) and its contour plot (b) of the effects of temperature，salinity and their mutualinteractions on the survival rate of Juveniles of P.maxima

2.2 溫度和鹽度對稚貝殼長日增長的影響

對稚貝殼長日增長進行多元回歸擬合，得到殼長日增長（GL）與溫度（t）和鹽度（S）的二次多項回歸模型（編碼）：＝2.000＋0.280 t＋0.040 S－0.060 t×S－1.240 t2－0.510 S2。模型的方差分析見表 4，結果表明，所建立的回歸模型極顯著（P＜0.01），失擬項檢驗結果顯著（P＜0.05），表明擬合方程可能無效，但由于實驗中純誤差均方較?。∕S＝4.33×10-4），且模型的決定系數(shù)R2＝0.984 2，校正系數(shù)R2＝0.968 4，說明該模型能解釋98.42%的響應值變化，僅有1.58%的誤差，所以擬合的二次方程有效，可用于響應值的預測。

表5是殼長日增長回歸模型系數(shù)的顯著性檢驗結果（表中各系數(shù)值為編碼值）。由表 5可知，溫度的一次效應、溫度和鹽度的二次效應均對稚貝殼長日增長的影響極顯著（P＜0.01），但鹽度的一次效應以及溫鹽的互作效應對殼長日增長的影響不顯著（P＞0.05）。

表4 回歸模型的方差分析Table 4 Variance analysis of regression model of shell length growth

表5 殼長日增長模型系數(shù)的顯著性檢驗Table 5 The significant test for the coefficient of the daily growth of shell length model

稚貝殼長日增長的響應曲面和等高線見圖2。由圖2－a可見，溫度對殼長日增長的影響曲線較陡，因此溫度對殼長日增長的影響極顯著（P＜0.01），鹽度曲線相對較平緩，對殼長日增長的影響不顯著（P＞0.05）。由圖2－b可見，等高線圖接近圓形，表明溫度和鹽度的互作效應對殼長日增長的影響不顯著（P＞0.05）。特定鹽度下，隨溫度的升高，殼長日增長先上升后下降；特定溫度下，隨鹽度的升高，殼長日增長也先上升后下降。在溫度接近24℃，鹽度接近30時，殼長日增長有最大值，對殼長日增長模型進行優(yōu)化，結果顯示，溫度24.95℃、鹽度30.39時殼長日增長最大，為2.01mm/d。

圖2 溫度、鹽度及其交互作用對大珠母貝稚貝殼長日增長影響的響應曲面（a）和等高線（b）Fig.2 Response surface plot (a) and its contour plot (b) of the effects of temperature，salinity and their mutualinteractions on the daily growth of shell length of P.maxima

2.3 溫度和鹽度對稚貝殼高日增長的影響

對稚貝殼高日增長進行多元回歸擬合，得到殼高日增長（GH）與溫度（t）和鹽度（S）的二次多項回歸模型（編碼）：＝1.770＋0.280t＋0.028S＋0.065 t×S－1.020 t2－0.510S2。模型的方差分析見表 6，結果表明，所建立的回歸模型極顯著（P＜0.01），失擬項檢驗結果顯著（P＜0.05），表明擬合方程可能無效，但由于實驗中純誤差均方較小（MS＝6.33×10-4），且模型決定系數(shù)R2＝0.979 5，校正系數(shù)R2＝0.959 0，說明該模型能解釋97.95%的響應值變化，僅有總變異的2.05%不能用此模型解釋，所以擬合的二次方程有效，可用于殼高日增長響應值的預測。

表7是殼高日增長回歸模型系數(shù)的顯著性檢驗結果（表中各系數(shù)為編碼值）。由表 7可知，溫度的一次效應、溫度和鹽度的二次效應對稚貝殼高日增長的影響極顯著（P＜0.01），但鹽度的一次效應以及溫鹽的交互效應對殼長日增長的影響不顯著（P＞0.05）。

表6 殼高日增長回歸模型的方差分析Table 6 Variance analysis of the daily growth of shell height model

表7 殼高日增長模型系數(shù)的顯著性檢驗Table 7 The significant test for the coefficient of the daily growth of shell height model

稚貝殼高日增長的響應曲面和等高線見圖3。由圖3－a可見，溫度對殼高日增長的影響曲線較陡，因此溫度對殼高日增長的影響極顯著（P＜0.01），鹽度曲線相對較平緩，對殼高日增長的影響不顯著（P＞0.05）。由圖3－b可見，等高線圖接近圓形，表明溫度和鹽的交互作用對殼高日增長的影響不顯著（P＞0.05）。特定鹽度下，隨溫度的升高，殼高日增長先上升后下降；特定溫度下，隨鹽度的升高，殼高日增長也先上升后下降。對殼高日增長模型進行優(yōu)化，結果顯示，殼高生長的最優(yōu)溫鹽組合為：溫度25.12℃鹽度30.30，此時殼高日增長為1.79mm/d。

2.4 大珠母貝稚貝生長的最佳溫鹽組合

本研究中，生長指標包括殼長和殼高，稚貝生長的最佳溫鹽組合為上述兩個指標的重疊部分，對殼長和殼高日增長模型進行綜合優(yōu)化，得到生長的最佳溫鹽組合為：溫度25.01℃、鹽度30.34，此時殼長日增長最大達2.01mm/d，殼高日增長達1.79mm/d。

圖3 溫度、鹽度及其交互作用對大珠母貝稚貝殼高日增長影響的響應曲面（a）和等高線（b）Fig.3 Response surface plot（a） and its contour plot（b）of the effects of temperature，salinity and their mutualinteractions on the daily growth of shell height of P.maxima

3 討論

3.1 溫度對大珠母貝稚貝存活和生長的影響

養(yǎng)殖水體的溫度對貝類的生理活動具有一定的調控作用，其隨季節(jié)的更替上下波動，影響著貝類的存活和生長[19-21]。本研究中，溫度的一次效應和二次效應對大珠貝稚貝存活和生長的影響極顯著（P＜0.01）。一次效應表明，稚貝的存活和生長與溫度之間存在線性關系，其易受到溫度的影響；二次效應表明，稚貝存在最佳的生存和生長溫度，且在實驗溫度范圍內，隨溫度的升高稚貝存活率、殼長日增長和殼高日增長均呈現(xiàn)先上升后下降的變化趨勢。這與王丹麗[22]對青蛤（Cyclina sinensis），以及栗志民[23]對皺肋文蛤（Meretrix lyrata）的研究結果一致。

貝類的生存和生長與其攝食能力的高低密切相關，劉永等[24]發(fā)現(xiàn)在25℃時，稚貝的攝食能力最強，與本研究優(yōu)化條件后得到的最佳溫度基本一致。在適宜溫度范圍內，大珠母貝稚貝的內環(huán)境與外界環(huán)境處于相對平衡狀態(tài)，其攝食能力增強，用于維持生命活動以及調節(jié)機體適應環(huán)境的能量相對較少，大部分能量流向利于稚貝生長等方向，因此，生長加快，殼高和殼長日增長上升。在許多水產動物中已經證實，營養(yǎng)不良將會導致機體免疫力下降，動物易感染致死的類立克次體和弧菌等病害，從而存活率降低[16]，因此，充足的食物攝取是保證高存活率的先決條件。在適宜溫度范圍內，大珠母貝稚貝的攝食能力高，機體營養(yǎng)充足，免疫力強，因而存活率相對較高；溫度超過適宜范圍，過高或者過低都不利于稚貝存活。這是因為低溫脅迫下，貝類纖毛的擺動強度和頻率下降，導致貝類的攝食能力受到抑制，不能滿足自身的需要，使得用于生長的能量來源受阻，生長速度減緩，殼長和殼高的日增長呈下降趨勢，最后稚貝因能量供應不足虛脫而死[25]。高溫脅迫下，稚貝活動強度會增大，基礎代謝能力增強，攝食能力前期也有所增強，但大部分能量用于機體活動需要，因而用于稚貝生長所需的能量較少，生長速度減慢，并且長時間的高溫脅迫，貝體內的免疫相關酶變性失活，大珠母貝稚貝機體的新陳代謝能力降低，疾病更易突破其免疫系統(tǒng)，對其存活造成威脅，同時還會加劇貝類的氧化應激反應，產生大量活性氧自由基，損害貝類組織、器官，以致死亡[26-27]，造成稚貝存活率降低。

3.2 鹽度對大珠母貝稚貝存活和生長的影響

鹽度是水生動物生存所需的重要非生物環(huán)境因素之一，養(yǎng)殖水體的鹽度易因旱季水分的蒸發(fā)或雨季的到來發(fā)生變化，從而帶來滲透壓的改變。貝類屬變滲透壓動物，需要及時根據(jù)周圍鹽度的變化調節(jié)自身滲透壓平衡，這種調節(jié)需要消耗能量[28]。研究結果表明，鹽度對稚貝存活的一次效應顯著（P＜0.05），但對其生長的一次效應不顯著（P＞0.05），說明稚貝的存活與鹽度之間存在線性關系，存活率易受到鹽度的影響；但稚貝的生長與鹽度之間不存在線性關系，生長不易受鹽度的影響，原因可能是在實驗所設鹽度范圍內，稚貝還能正常的對滲透壓進行調節(jié)。鹽度的二次效應對稚貝存活和生長的影響均極顯著（P＜0.01），所以，稚貝的存活率、殼長日增長和殼高日增長隨鹽度升高先上升后下降，存在最佳的存活和生長鹽度。這是因為在適宜鹽度范圍內，大珠母貝的滲透壓較穩(wěn)定，用于這部分調節(jié)的能量減少，大部分能量用于生長，因此，稚貝的生長速度提高，殼長和殼高日增長的趨勢呈上升狀態(tài)[29]。而一旦鹽度超出了大珠母貝的適宜范圍后，貝體內的能量會進行再分配，用于代謝和維持自身滲透壓的能量增多，用于生長的能量減少，稚貝生長遲緩[30]。另外，與溫度的影響作用一致，鹽度也會影響稚貝的攝食，從而影響稚貝的存活和生長。范嗣剛[16]和郝博飛等[31]研究結果表明，大珠母貝在鹽度30時具有最大攝食率，這與存活率模型和生長指標模型經優(yōu)化后得到的鹽度相接近。因此，控制鹽度對于大珠母貝的養(yǎng)殖具有重要作用。

3.3 溫鹽互作效應對稚貝存活和生長的影響

溫鹽的互作效應在貝類的研究中已非常廣泛，劉志剛等[18]研究了溫度和鹽度的互作效應對華貴櫛孔扇貝（Mimachlamys nobilis）生存及生長的影響；呂曉露等[32]研究了溫度和鹽度 2個因素對施獺蛤（Lutraria sieboldii）稚貝成活以及生長的聯(lián)合效應；王亞男[33]等報道了溫度、鹽度對馬氏珠母貝（Pinctada martensi）外套膜Hsp70 基因表達量的聯(lián)合影響；朱曉聞等[34]研究了溫度、鹽度和 pH對馬氏珠母貝清濾率的聯(lián)合效應。前人的研究結果表明，多因素存在時，對其互作效應的研究更具科學性。本研究采用中心復合設計，考察了溫度與鹽度的協(xié)同效應，得出溫度和鹽度對大珠母貝稚貝的存活具有明顯的交互作用（P＜0.01），但對生長的影響不顯著（P＞0.05）。前者說明在大珠母貝存活方面，溫度和鹽度可以相互影響，Castagna[35]認為溫鹽互作效應的產生是溫度影響了稚貝對鹽度的反應速率。因此，在大珠母貝人工養(yǎng)殖時，為了保證高的存活率，不僅要考慮溫度和鹽度單因素的影響，還應該考慮溫度和鹽度之間的交互作用。后者說明在稚貝生長上，溫度和鹽度不會相互影響，朱曉聞[34]認為原因在于溫度主要通過影響酶的活性來調節(jié)貝類生長、而鹽度主要通過影響貝類滲透壓的調節(jié)來干擾貝類活動，這兩個過程是獨立進行的。其他一些學者認為，溫度和鹽度存在互作效應的前提是溫度和鹽度或者這兩者其中有一個必須是接近極限范圍[36]，如果溫度和鹽度都處于正常的安全范圍之內兩者的關系就不明顯。這可能就是溫度和鹽度對稚貝的生長不存在互作效應的另外一個原因。貝類對溫度和鹽度的適應能力與種類的遺傳性和個體的生理狀態(tài)有關，而與其個體大小關系不明顯，同種類的所有大小個體都以相同方式對溫度和鹽度作出反應[37-38]。本研究所得結果可為該貝稚貝培育及成體的養(yǎng)殖提供參考依據(jù)。通過模型優(yōu)化得出，溫度 25.54℃、鹽度31.70是存活的最佳溫鹽組合，此時存活率最大，為95%；溫度25.01℃、鹽度30.34是生長的最佳溫鹽組合，此時殼長和殼高日增長均達到最大，分別為2.01、1.79mm/d。實際生產采用此組合，可縮短養(yǎng)殖周期，使稚貝生長處于較高水平，提高生產效益。

[1]姜因萍，何毛賢.大珠母貝的研究概況[J].海洋科學，2009，33（2）：92-96.

[2]蒲利云，曾關瓊，陳傅曉，等.大珠母貝人工繁育技術研究[J].水產科技情報，2012，39（1）：1-5.

[3]劉永，余祥勇，鄧陳茂，等.大珠母貝人工繁殖技術的研究[J].廣東海洋大學學報，2007，27（3）：38-44.

[4]成書營，喻達輝，黃桂菊，等.大珠母貝種苗海區(qū)深水中間培育技術研究[J].廣東農業(yè)科學，2011，38（15）：102-104.

[5]鄧陳茂，梁飛龍.大珠母貝人工苗養(yǎng)成的研究[J].海洋科學，2000，24（10）:11-13.

[6]劉建業(yè)，曾關瓊，喻達輝，等.大珠母貝人工苗水泥池中間培育技術的初步研究[J].福建水產，2009，3（1）：55-59.

[7]梁飛龍，許國領，鄧防茂.大珠母貝親貝人工促熟培育與誘導排放精卵的研究[J].海洋湖沼通報，1998，7（2）：34-37.

[8]勞贊，歐春曉，梁盛，等.大珠母貝人工苗育成研究[J].廣東海洋大學學報，2003，23（4）：20-24.

[9]JERRY D R，KⅤⅠNGEDAL R，LⅠND C E，et al.Donor-oyster derived heritability estimates and the effect of genotype×environment interaction on the production of pearl quality traits in the silver-lip pearl oyster，Pinctada maxima[J].Aquaculture，2012，s 338-341：66-71.

[10]JONES D B，JERRY D R，KHATKAR M S，et al.Determining genetic contributions to host oyster shell growth：Quantitative trait loci and genetic association analysis for the silver-lipped pearl oyster，Pinctada maxima[J].Aquaculture，2014，434：367-375.

[11]JONES D B，JERRY D R，KHATKAR M S，et al.A high-density SNP genetic linkage map for the silver-lipped pearl oyster，Pinctada maxima:a valuable resource for gene localisation and marker-assisted selection[J].Bmc Genomics，2013，14（1）：1-18.

[12]JONES D B，ZENGER K R，JERRY D R.Ⅰn silico whole-genome EST analysis reveals 2322 novel microsatellites for the silver-lipped pearl oyster，Pinctada maxima[J].Marine Genomics，2011，4（4）：287-90.

[13]JONES D B，JERRY D R，F(xiàn)ORêT S，et al.Genome-wide SNP validation and mantle tissue transcriptome analysis in the silver-lipped pearl oyster，Pinctada maxima[J].Marine Biotechnology，2013，15（6）：647-58.

[14]謝紹河，梁飛龍，符韶，等.養(yǎng)殖水深和籠具對大珠母貝成活率與生長的影響研究[J].中國農學通報，2013，29（2）：31-35.

[15]梁飛龍，林偉財，鄧岳文，等.換水頻率和附著基對大珠母貝育苗效果的影響[J].中國農學通報，2015，31（29）：33-38.

[16]范嗣剛，黃桂菊，劉寶鎖，等.鹽度與溫度對大珠母貝和合浦珠母貝濾水率及攝食率的影響[J].水生態(tài)學雜志，2014，35（3）：61-65.

[17]ROBERT R，HⅠS E，DⅠNET A，et al.Combined effects of temperature and salinity on fed and starved larvae of the European flat oyster Ostrea edulis[J].Marine Biology，1987，97（1）：95-100.

[18]劉志剛，劉建勇，楊博.溫度與鹽度對華貴櫛孔扇貝幼貝存活與生長的互作效應研究[J].海洋科學，2011，35（10）：75-80.

[10]栗志民，錢佳慧，勞翠英，等.溫度和鹽度對華貴櫛孔扇貝免疫相關酶的聯(lián)合效應[J].海洋科學進展，2015，33（2）：227-238.

[11]劉志剛，劉建勇，楊博.溫度與鹽度對華貴櫛孔扇貝幼貝存活與生長的互作效應研究[J].海洋科學，2011，35（10）：75-80.

[12]TETTELBACH S T，RHODES E W.Combined effects of temperature and salinity on embryos and larvae of the northern bay scallop Argopecten irradians irradians[J].Marine Biology，1981，63（3）：249-256.

[13]CAⅠN T D.The combined effects of temperature and salinity on embryos and larvae of the clam Rangia cuneata[J].Marine Biology，1973，21（1）：1-6.

[19]錢佳慧，栗志民，申玉春，等.溫度和鹽度對華貴櫛孔扇貝抗氧化酶活性的聯(lián)合效應研究[J].南方水產科學，2015，11（6）：49-57.

[20]王成東，聶鴻濤，閆喜武，等.溫度和鹽度對薄片鏡蛤孵化及幼蟲生長與存活的影響[J].大連海洋大學學報，2014，29（4）：364-368.

[21]DAⅤⅠS M.The combined effects of temperature and salinity on growth，development，and survival for tropical gastropod veligers of Strombus gigas[J].Journal of Shellfish Research，2000，19（2）：883-889.

[22]王丹麗，徐善良，尤仲杰，等.溫度和鹽度對青蛤孵化及幼蟲、稚貝存活與生長變態(tài)的影響[J].水生生物學報，2005，29（5）：495-501.

[23]栗志民，劉志剛，姚茹，等.溫度和鹽度對皺肋文蛤幼貝存活與生長的影響[J].生態(tài)學報，2010，30（13）：3406-3413.

[24]劉永，焦宗垚，張春芳.溫度對大珠母貝濾水率的影響[J].廣東海洋大學學報，2010，30（1）：23-26.

[25]彭建華，陳文祥，欒建國，等.溫度、pH對二種淡水貝類濾水率的影響[J].動物學雜志，2004，39（6）：2-6.

[26]CHEN J，MAⅠ K，MA H，et al.Effects of dissolved oxygen on survival and immune responses of scallop（Chlamys farreri，Jones et Preston）[J].Fish and ShellfishⅠmmunology，2007，22（3）：272-81.

[27]陳政強，陳昌生，戰(zhàn)文斌.低氧脅迫對九孔鮑免疫防御因子的影響[J].水產學報，2012，36（11）：1739-1747.

[28]章啟忠，劉志剛，王輝.華貴櫛孔扇貝稚貝鹽度適應性的研究[J].廣東海洋大學學報，2008，28（1）：40-43.

[29]HEPHER B，LⅠAOⅠ C，CHENG S H，et al.Food utilization by red tilapia-Effects of diet composition feeding level and temperature on utilization efficiencies for maintenance and growth[J].Aquaculture，1983，32（34）：255-275.

[30]強俊，任洪濤，徐跑，等.溫度與鹽度對吉富品系尼羅羅非魚幼魚生長和肝臟抗氧化酶活力的協(xié)同影響[J].應用生態(tài)學報，2012，23（1）：255-263.

[31]郝博飛，黃桂菊，喻達輝，等.鹽度和餌料種類及濃度對大珠母貝稚貝濾水率的影響[J].廣東農業(yè)科學，2012，（8）：132-134.

[32]呂曉露，孫宗紅，劉志剛，等.溫度與比重互作對施獺蛤稚貝成活與生長的影響[J].南方水產科學，2015，11（3）：59-66.

[33]王亞男，王輝，羅明明，等.溫度、鹽度對馬氏珠母貝外套膜Hsp70基因表達量的聯(lián)合影響[J]．廣東海洋大學學報， 2012，32（3）：35-41.

[34]朱曉聞，王輝，劉進，等.溫度、鹽度和 pH對馬氏珠母貝稚貝清濾率的聯(lián)合效應[J].生態(tài)學報，2012，32（12）：3729-3736.

[35]CASTAGNA M.Culture of the bay scallop，Argopecten irradinans Lamark，in Ⅴirginia[J].Marine Fisheries Review.1975，11（37）：19-24.

[36]CALABRESE A.Ⅰndividual and combined effects of salinity and temperature on embryos and larvae of the coot clam,Mulinia lateralis (SAY) [J].Mar Biol Lab，1969，137：417-428.

[37]何義朝，張福綏，王萍，等.墨西哥灣扇貝稚貝對鹽度的耐受力[J].海洋學報（中文版），1999，21（4）：87-91.

[38]尤仲杰，陸彤霞，馬斌，等.幾種環(huán)境因子對墨西哥灣扇貝幼蟲和稚貝生長與存活的影響[J].熱帶海洋學報，2003，22（3）：22-29.

（責任編輯：陳莊）

Combined Effects of Temperature and Salinity on the Survival and Growth Rate of Juveniles of Pinctada maxima

TAN Jie1，CHEN Zhen-jiang1，LⅠUFU Shao-mei3，TANG Xiao-chen1,2，LⅠU Zhi-gang1,2
（1.Fisheries College Guangdong Ocean University；2.Guangdong Province，Nanhai Economic invertebrates healthy breeding Engineering Research Center；3.Zhanjiang Silverwave Ltd.of Marine Biotechnology，Zhanjiang 524000，China）

By using two-factor central composite design（CCD） and response surface methodology（RSM），the synergistic effect of temperature (16 –32℃) and salinity (22 –38) on the survival and growth of juveniles of Pinctada maxima are studied.The results show that the linear and quadratic effects of temperature on juvenile survival rate,growth of shell length and shell height are significant particularly (P＜0.01).The linear effects of salinity on juvenile survival rate are significant (P＜0.05) but the linear effect of salinity and the interaction effect of temperature and salinity on the growth of shell length and shell height is not significant (P＞0.05).By response surface methodology,a model equation is established for the relationship of juvenile survival rate,growth of shell length and shell height to the two factors,with the R2of 0.969 2,0.984 2,0.979 5,correction coefficients are respectively 0.938 5,0.959 0,0.968 4,suggesting that the fitting capability of the model was satisfactory and could be practicably applied for prediction on response values.Based on the established model,the survivalrate reached the maximum (95%) at the 2-factor combination of 25.54℃/ 31.70.The growth of shell length and shell height have reached their maximum (2.01,1.79mm/d) when the 2- factor combination is 25.01℃/ 30.34.The research results can provide reference to the cultivation of juveniles of Pinctada maxima and artificial breeding.

Pinctada maxima; juveniles; temperature; salinity; combined effects

S968.35

A

1673-9159（2016）06-0044-08

10.3969/j.issn.1673-9159.2016.06.008

2016-06-27

農業(yè)部948項目（2010-Z33）；廣東省海洋漁業(yè)科技推廣專項(A201008A01，A201201A06，A201208A07)

譚杰（1990—），碩士研究生，研究方向為貝類遺傳育種與養(yǎng)殖研究。Tel： 15017373995；E-mail：1065864989@qq.com

劉志剛（1963—），教授，從事貝類遺傳育種與養(yǎng)殖技術研究。E-mail：liuzg919@126.com