趙曉婷，孫潔，王翠芳*

（1沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)與病理生理學(xué)系，沈陽 110034；2沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院病理科，沈陽 110024）

Ki-67在基底細(xì)胞樣型乳腺癌中的診斷價(jià)值

趙曉婷1，孫潔2，王翠芳2*

（1沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)與病理生理學(xué)系，沈陽 110034；2沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院病理科，沈陽 110024）

目的 分析細(xì)胞增殖抗原Ki-67與雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長因子受體（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）在乳腺癌表達(dá)的相關(guān)性，探討Ki-67在基底細(xì)胞樣型乳腺癌和非基底細(xì)胞樣型乳腺癌的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。方法 選取65例女性浸潤性乳腺癌標(biāo)本，其中包括27例基底細(xì)胞樣型乳腺癌，38例非基底細(xì)胞樣型乳腺癌及癌旁組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測Ki-67、ER、PR、HER2在乳腺癌的表達(dá)。結(jié)果 65例乳腺癌中，Ki-67表達(dá)與ER、PR呈負(fù)相關(guān)，與HER2無相關(guān)性。在基底細(xì)胞樣型乳腺癌組織中，Ki-67在細(xì)胞核強(qiáng)陽性表達(dá)。基底細(xì)胞樣型乳腺癌與非基底細(xì)胞樣型乳腺癌比較，Ki-67表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)相關(guān)，組織學(xué)分級(jí)越高，Ki-67表達(dá)越強(qiáng)。結(jié)論 Ki-67可能參與基底細(xì)胞樣型乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，對預(yù)后評(píng)價(jià)有重要的參考價(jià)值。

乳腺癌；基底細(xì)胞樣型乳腺癌；Ki-67；ER；PR；HER2

浸潤性乳腺癌是女性最常見的腫瘤，是一種高度異質(zhì)性惡性腫瘤［1］。乳腺癌分子亞型的最初證據(jù)來自于cDNA微芯片的基因表達(dá)研究?；准?xì)胞樣型乳腺癌（basal-like breast carcinoma，BLBC）是指具有基底細(xì)胞基因表型并不同程度的表達(dá)基底細(xì)胞角蛋白和肌上皮標(biāo)記物的乳腺癌，是一組以基因表達(dá)譜確定的預(yù)后較差的高級(jí)別乳腺癌。其免疫組織化學(xué)常常ER、PR、HER2均為陰性，CK5／6和（或）EGFR陽性。Ki-67的表達(dá)與惡性腫瘤存在密切關(guān)系，能較好地反映腫瘤的惡性程度和預(yù)后。本文主要通過研究具有或不具有基底細(xì)胞樣型乳腺癌的臨床病理學(xué)因素（年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移情況、組織學(xué)分級(jí)）與Ki-67、ER、PR、HER2蛋白相互之間的關(guān)系，探討兩型乳腺癌中Ki-67蛋白表達(dá)的差異性。

材料和方法

1 材料

收集沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院2013年1月至2015年12月女性浸潤性乳腺癌65例，其中基底細(xì)胞樣型乳腺癌標(biāo)本27例，非基底細(xì)胞樣型乳腺癌標(biāo)本38例，癌旁組織標(biāo)本作為對照組。患者年齡45～85歲，平均年齡65歲。

2 試劑

即用型鼠抗人單克隆抗體Ki-67（克隆號(hào)MIB-1）、兔抗人單克隆抗體ER（克隆號(hào)SP1）、兔抗人單克隆抗體PR（克隆號(hào)SP2）、兔抗人單克隆抗體HER2（克隆號(hào)EP3）均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。SP檢測試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

3 SP法免疫組織化學(xué)染色

所有乳腺癌患者組織切除后都使用4%的甲醛固定，依據(jù)病理規(guī)定規(guī)范取材，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，常規(guī)石蠟脫水，檸檬酸抗原高壓修復(fù)（pH6.0）25min，室溫冷卻30min，用0.01mol／L磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）沖洗3min，每次3次，用油筆圈定玻片上的待測組織區(qū)域。每張切片加1滴或50μl過氧化酶阻斷試劑（試劑A），室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3次，每次3min。除去PBS液，每張切片加1滴或50μl正常非免疫動(dòng)物血清（試劑B），室溫下孵育10min。除去血清，每張切片加1滴或50μL的第一抗體，4℃過夜。PBS沖洗3次，每次3min。除去PBS液，每張切片加1滴或50μl生物素標(biāo)記的第二抗體（試劑C），室溫下孵育10min，PBS沖洗3次，每次3min。除去 PBS液，每張切片加1滴或50μl鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液（試劑D），室溫下孵育10min，PBS沖洗3次，每次3min。除去 PBS液，每張切片加2滴或100μl新鮮配置的DAB，顯微鏡下觀察3～10min。自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，PBS或自來水沖洗返藍(lán)。用DAB顯色，則切片經(jīng)過梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

4 免疫組織化學(xué)結(jié)果判定

所有切片標(biāo)本由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行閱片并判斷陰、陽性表達(dá)。Ki-67、ER、PR定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核，HER2定位于細(xì)胞膜。ER、PR陽性細(xì)胞數(shù)值 ＜10% 為（-），10% ～25% 為（＋），25%～50%為（＋＋），≥50%為（＋＋＋，強(qiáng)陽性［2］）。HER2：陽性細(xì)胞著色定位于細(xì)胞膜。0：無染色或≤10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色；＋：＞10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜染色；＋＋：有兩種情況，第一種為：＞10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)不完整和／或弱至中等強(qiáng)度的細(xì)胞膜染色，第二種為：≤10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色；＋＋＋：＞10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色［3］。Ki-67判定標(biāo)準(zhǔn)Ki-67陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-），10%～29%為低表達(dá)（＋），30%～49%為中度表達(dá)（＋＋），＞50% 為強(qiáng)陽性表達(dá)（＋＋＋）［4］。為統(tǒng)計(jì)學(xué)方便，本研究顯色0～＋定為陰性，＋＋～＋＋＋為陽性。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用四格表卡方檢驗(yàn)和非參數(shù)統(tǒng)計(jì)中Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)　果

1 Ki-67、ER、PR、HER2在基底細(xì)胞樣型乳腺癌的免疫組織化學(xué)表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色顯示，在基底細(xì)胞樣型乳腺癌組織中，Ki-67在細(xì)胞核強(qiáng)陽性表達(dá)，ER、PR在細(xì)胞核陰性表達(dá)，HER2在細(xì)胞膜陰性表達(dá)；在癌旁組織中，Ki-67在細(xì)胞核陰性表達(dá)，ER在細(xì)胞核強(qiáng)陽性表達(dá)、PR在細(xì)胞核中度陽性表達(dá)，HER2在細(xì)胞膜陰性表達(dá)（圖1）。

2 乳腺癌中Ki-67與ER、PR、HER2的相關(guān)性

65例乳腺癌中，ER陽性24例（36.9%），ER陰性41例（63.1%），PR陽性15例（23.1%），PR陰性50例（76.9%），HER2陽性12例（18.5%），HER2陰性53例（81.5%）。Spearman等級(jí)相關(guān)檢側(cè)分析顯示，Ki-67表達(dá)與ER、PR呈負(fù)相關(guān)（r＝-0．377，P＝0．002；r＝-0．280，P＝0．024），與HER2無相關(guān)性（r＝-0．004，P＝0．973）（表1）。

圖1　Ki-67、ER、PR、HER2在癌旁乳腺組織和基底細(xì)胞樣乳腺癌組織中的免疫組織化學(xué)表達(dá)；比例尺：癌旁組織，20μm；基底細(xì)胞樣乳腺癌組織，40μmFig.1　Immunohistochemical expression of Ki-67，ER，PR and HER2 in para-carcinoma tissues and BLBC tissues.Scale bar，20μm in para-carcinoma tissues；40μm in BLBC tissues

表1　Ki-67表達(dá)與 ER、PR、HER2的相關(guān)性Table 1　Expression correlation of Ki-67 to ER，PR and HER2 in BLBC

3 基底細(xì)胞樣乳腺癌與Ki-67表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系

65例乳腺癌患者標(biāo)本中，基底細(xì)胞樣乳腺癌27例，非基底細(xì)胞樣乳腺癌38例。基底和非基底細(xì)胞樣乳腺癌與年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)以及Ki-67表達(dá)的關(guān)系由卡方檢驗(yàn)檢測（表2）。在27例基底細(xì)胞樣乳腺癌中，Ki-67陽性25例（92.6%），陰性2例（7.4%）；在38例非基底細(xì)胞樣乳腺癌中，Ki-67陽性24例（63.2%），陰性 14例（36.8%）?；准?xì)胞樣乳腺癌和非基底細(xì)胞樣乳腺癌比較，年齡（χ2＝0.035）、原發(fā)腫瘤的大?。é?＝0.028）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（χ2＝0.074）無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而組織學(xué)分級(jí)（χ2＝30.236）和Ki-67（χ2＝7.37）表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。組織學(xué)分級(jí)越高，Ki-67表達(dá)越強(qiáng)。

表2　基底細(xì)胞樣型乳腺癌與Ki67表達(dá)和臨床病理特征的關(guān)系Table 2　Relation of Ki-67 expression to clinicopathologicalfeatures and breast cancer subtypes

討　論

基底細(xì)胞樣型乳腺癌是乳腺癌的一種特殊亞型，由于基因表型獨(dú)特、惡性程度高、預(yù)后差，成為國內(nèi)外研究乳腺癌的熱點(diǎn)。2000年P(guān)erou等［5］通過cDNA微陣列技術(shù)將乳腺癌分為5個(gè)亞型，其中包括基底亞型。根據(jù)基因芯片表達(dá)譜分析，基底細(xì)胞樣型乳腺癌的發(fā)病率約為15%，約占全部乳腺癌的8%～20%［6］。有報(bào)道認(rèn)為基底細(xì)胞樣型乳腺癌在年輕的亞裔和南美洲婦女中較常見。因?yàn)槟[瘤生長較快，所以常常被患者自己發(fā)現(xiàn)。此外，基底細(xì)胞樣型乳腺癌的組織學(xué)特點(diǎn)目前還不完全清楚，盡管某些形態(tài)學(xué)特征，比如高組織學(xué)級(jí)別、地圖狀壞死、推擠性邊緣提示腫瘤為基底細(xì)胞樣型乳腺癌，但這些形態(tài)學(xué)特征特異性不高，即不是所有的基底細(xì)胞樣型乳腺癌都具有這些特征。

ER、PR、HER2的陽性表達(dá)對乳腺癌內(nèi)分泌治療和靶向治療有指導(dǎo)意義。研究表明［7］，當(dāng)乳腺上皮細(xì)胞在發(fā)生癌變時(shí)，ER、PR有不同的表達(dá)形式，一種是ER、PR為陽性表達(dá)，說明原來的激素對癌細(xì)胞仍起著調(diào)節(jié)作用，往往分化較好，稱之為激素依賴性腫瘤；另一種是ER、PR為陰性表達(dá)，說明激素對細(xì)胞生長不起調(diào)節(jié)作用，腫瘤分化較差，稱之為非激素依賴性腫瘤。Hussein等研究表明［8］HER2在乳腺癌中表達(dá)率一般為10%～34%，其表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)。本研究中，HER2陽性表達(dá)率為18.5%，與報(bào)道相近。另外，本研究表明Ki-67與ER、PR呈負(fù)相關(guān)，而與HER2無相關(guān)性，從某種程度上說明HER2可作為一種獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。

Ki-67是由Gerdes等［9］在1983年從霍奇金淋巴瘤系發(fā)現(xiàn)的一種增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原，僅在增殖細(xì)胞核中表達(dá)，被普遍認(rèn)為是一種評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞增殖活性較理想的標(biāo)記物，也是現(xiàn)階段應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)記物之一［10］。Ki-67表達(dá)可反映腫瘤細(xì)胞活性，與惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)［11］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Ki-67在乳腺癌的陽性表達(dá)率為75.4%，與Bhatavdekar［12］等報(bào)道Ki-67在乳腺癌的陽性表達(dá)率78.0%結(jié)果相近，說明Ki-67參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。此外，研究報(bào)道［13］Ki-67陽性表達(dá)率高的乳腺腫瘤細(xì)胞的惡性度更高，細(xì)胞增殖活躍，容易發(fā)生侵襲、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。我們的研究也發(fā)現(xiàn)，本研究通過分析兩組乳腺癌與臨床病理特征及Ki-67表達(dá)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Ki-67表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，而與年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。由于基底細(xì)胞樣型乳腺癌具有組織學(xué)分級(jí)高，預(yù)后差特點(diǎn)，以及本實(shí)驗(yàn)表明Ki-67在基底細(xì)胞樣型乳腺癌中表達(dá)高，提示其可以作為預(yù)后指標(biāo)?？傊琄i-67、ER、PR、HER2分子標(biāo)記物的表達(dá)情況，在臨床化療、內(nèi)分泌治療和靶向治療以及預(yù)后提供重要的意義。

[1]張眾,王華新,謝豐培.乳腺癌異質(zhì)性及其臨床意義.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2014,30(5):473-477.

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The value of Ki-67 in the diagnosis of basal-like breast carcinoma

Zhao Xiaoting1,Sun Jie2,Wang Cuifang2*
（1Pathology and Pathophysiology Major，College of Basic Medical Sciences，Shenyang Medical College，Shenyang 110034，China；2Department of Pathology，The Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College，Shenyang 110024）

Objective To analyze the correlation of Ki-67 expression with estrogen receptor(ER),progesterone receptor(PR) and human epidermal growth factor receptor-2(HER-2)in breast cancer,and to explore the relationship between Ki-67 expression and the clinicopathological features of basal cell-like(BLBC)／non-basal cell-like breast cancer(NBLBC).Methods 65 cases of female invasive breast cancer were selected for immunohistochemistry,including 27 cases of BLBC and 38 cases of NBLBC with para-carcinoma tissue.The expressions of Ki-67,ER,PR and HER2 in breast cancer were detected by immunohistochemistry.Results In the 65 cases of breast cancer,the expression of Ki-67 was negatively correlated with those of ER and PR,while unrelated to HER2.In BLBC tissue,strong positive expression of Ki-67 was detected in cell nuclei.A comparison of the BLBC and NBLBC showed a correlation between Ki-67 expression and the histological grade of the cancer.Ki-67 expression was stronger in cancer tissues with higher histological grades[1].Conclusions Ki-67 may be involved in the occurrence and development of BLBC and has important reference value in the evaluation of BLBC prognosis.

Breast cancer；basal-like breast carcinoma；clinicopathological characteristics；Ki-67；ER；PR；HER2

R737.9

A

10.16705／j.cnki.1004-1850.2016.05.009

2016-07-12

2016-10-15

趙曉婷，女（1990年），漢族，碩士研究生

（To whom correspondence should be addressed）：sywcf321＠sohu.com