韓 麗 白 樺 王 磊 楊 佳 劉鈞天,4 王 晶 黃 暢劉耀萌 邢 敏 潘秀頡 趙百孝

(1 北京中醫(yī)藥大學中醫(yī)學養(yǎng)生研究所,北京,100029; 2 北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院,北京,100029; 3 西安市中醫(yī)院,西安,710021; 4 北京中醫(yī)藥大學附屬護國寺中醫(yī)醫(yī)院,北京,100035; 5 世界中醫(yī)藥學會聯(lián)合會,北京,100101; 6 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院,北京,100039)

?

臨床診室濃度的艾煙暴露12周對Wistar雄性大鼠尿常規(guī)的影響

韓 麗1,2白 樺3王 磊2楊 佳2劉鈞天2,4王 晶5黃 暢2劉耀萌2邢 敏2潘秀頡6趙百孝2

(1 北京中醫(yī)藥大學中醫(yī)學養(yǎng)生研究所,北京,100029; 2 北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院,北京,100029; 3 西安市中醫(yī)院,西安,710021; 4 北京中醫(yī)藥大學附屬護國寺中醫(yī)醫(yī)院,北京,100035; 5 世界中醫(yī)藥學會聯(lián)合會,北京,100101; 6 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院,北京,100039)

目的:觀察臨床診室濃度的艾煙暴露12周對Wistar雄性大鼠尿常規(guī)影響。方法:應用全自動動式染毒柜,艾煙的濃度以遮光率SR表示。將Wistar雄性大鼠48只隨機分成4個艾煙濃度梯度組(n=12):對照組(C,SR 0%)、低濃度組(L,SR 0.4%)、中濃度組(M,SR 2%)、高濃度組(H SR 15%),分別為無艾煙組,1,3，9倍于臨床濃度艾煙組。暴露200 min/d,5 d/周,連續(xù)暴露12周。應用尿干化學分析法檢測大鼠尿常規(guī)等指標。結果:艾煙暴露各組尿的顏色、SG、PRO、GLU、BLD、URO和BIL檢查等均未見顯著改變(P>0.05)。結論:臨床診室濃度的艾煙暴露未對雄性大鼠尿常規(guī)指標產生毒性影響。

艾煙;艾灸;遮光率;尿常規(guī);尿

灸法是一種中醫(yī)傳統(tǒng)療法,常與針刺一起使用,合稱“針灸”。艾灸是應用點燃后的艾絨在體表一定的部位進行燒、灼、熏,給人體以溫熱、藥物刺激作用,以防治疾病,具有確切療效[1-5]。艾煙作為具有特殊的芳香氣味的艾灸生成物,具有多種生物活性[6-10],已成為艾灸啟效的關鍵環(huán)節(jié)。隨著人們對環(huán)境中霧霾的毒性的研究深入,艾煙是否安全漸漸引起爭議。由于艾煙暴露引起的毒性問題和艾灸環(huán)境中空氣質量標準研究的缺乏,我們進行了此項研究。尿常規(guī)是醫(yī)學檢驗“三大常規(guī)”項目之一,是很多疾病的輔助性檢驗。尿常規(guī)主要對肝、腎和胰島功能損害有一定的參考價值,本研究觀察了臨床濃度的艾煙暴露12周對雄性大鼠尿常規(guī)的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 Wistar大鼠48只,雄性,體質量50～70 g,購自北京維通利華實驗動物技術有限公司(動物許可證號:SCXK-(京)2012-0001)。所有大鼠均用標準動物飼料喂養(yǎng),自由進水,飼養(yǎng)環(huán)境溫度(22±2)℃,相對濕度50%～60%,保持12 h光照(8:00至20:00)和12 h黑暗(20:00至次日8:00)交替循環(huán)。大鼠先適應性喂養(yǎng)1周。按隨機數字表法將其隨機分為空白組、低濃度組、中濃度組和高濃度組,每組8只,濃度分別為0、0.4%、2%和15%。實驗過程中對動物的處置符合2006年國家科技部發(fā)布的《關于善待實驗動物的指導性意見》的規(guī)定。

1.2 主要實驗材料、儀器及試劑 3年陳艾條(規(guī)格:18 mm×200 mm,河南南陽漢醫(yī)艾絨有限公司);動式染毒柜(Hope-MED 8050,天津開發(fā)區(qū)合普工貿有限公司,L=95 cm,艾煙濃度用遮光率表示,濃度越低,遮光率越低);P-5L2C型便攜式數字微電腦粉塵儀(北京賓達綠創(chuàng)科技有限公司)。

1.3 實驗方法 本課題組前期對京津地區(qū)的艾灸診室內艾煙的濃度進行抽樣調查[11],參照抽樣濃度設置1、3、9倍于臨床濃度的艾煙,進行試驗。試驗前,采用自動動式染毒裝置Hope-MED 8050,分別檢測不同倍數的臨床艾煙濃度對應的遮光率值,并以此遮光率設置不同的艾煙濃度梯度,分別為低劑量組L 0.4%,中劑量組M 2%,高劑量組H 15%。對照組C 0%暴露于同一房間的空氣。暴露方法:全自動染毒柜啟動后,設置相應的環(huán)境參數值,待艾煙濃度穩(wěn)定后一次性放入整組大鼠,每組12只,待濃度再次達到穩(wěn)定后開始計時(L和M組大約需要10 s,H組需要1 min左右),計時200 min,艾煙暴露期間大鼠自由食水。濃度設置如下,染毒柜內環(huán)境控制:溫度控制在(24±0.2)℃,氧氣濃度保持在(21±0.2)%,200 min/d,共12周。操作順序:空白組C-低劑量組L-中劑量組M-高劑量組H。

1.4 標本采集與指標檢測 12周干預結束后,大鼠單籠飼養(yǎng)于大鼠代謝籠(大鼠代謝籠由鼠籠、籠內糞便隔離層、隔離層下層濾網、接尿漏斗以及套在接尿漏斗口的50 mL的潔凈的EP管組成)內24 h,在此期間大鼠尿液經大鼠代謝籠糞便層的濾網向下流,經接尿漏斗,最終收集在50 mL的潔凈的EP管內。尿液收集后送中西醫(yī)結合醫(yī)院檢驗科,采用尿干試紙法檢測,尿檢項目包括:URO:Urbilinogen，BIL：Bilirubin，KET：Ketonebody，BLD：Blood，PRO：Protein，NIT：Nitrite，WBC：White Blood Cell Count，GLU:Glucose，pH：pH Value，SG：Specific Gravity.

2 結果

經臨床濃度的艾煙12周暴露后,雄性Wistat大鼠的尿常規(guī)檢測結果見表1,從表中可見雄性大鼠的尿膽原(Urbilinogen URO),膽紅素(Bilirubin BIL),酮體(Ketonebody KET),潛血(Blood BLD)，尿蛋白(Protein PRO)，亞硝酸鹽(Nitrite NIT),白細胞計數(White Blood Cell Count WBC),維生素C(Vitamin Vit C),尿比重(Specific Gravity SG)等均未見顯著改變。M組尿液的酸堿度(pH Value pH)(7.6±0.7)較對照組(8.4±0.2)有顯著改變(P<0.01),未見劑量反應關系,參數的變化在正常的生理波動值范圍內(pH:4.5～8.0)。綜上,1、3、9倍于臨床濃度的艾煙暴露12周未對雄性大鼠的尿常規(guī)產生明顯的毒性影響。

表1 臨床診室濃度的艾煙暴露12周后

注：與對照組比較*P<0.01。

3 討論

艾灸自古沿用至今,并已經推廣至海外。艾煙作為艾燃燒生成物與香煙、棉花等其他材料燃燒所產生的煙氣的成分不同,效果[12]也有所不同,其中含有大量小分子芳香烴類化合物[13],部分成分已證明具有殺菌[14]、抗炎[15]和抗氧化梅[16]損傷等作用,可能為艾煙作用的活性物質。這提示艾絨作為灸材具有一定的不可替代性。臨床艾灸環(huán)境下艾煙濃度升高直接造成可吸入顆粒物水平的升高,使得艾煙安全性問題一再受到爭議。

本研究通過觀察暴露于不同倍數于臨床濃度艾煙中雄性Wistar大鼠尿常規(guī)指標變化,在一定程度上為臨床診室是否安全提供參考。尿常規(guī)檢查項目。見表1。主要對肝、腎和胰島功能損害有一定的參考價值,是毒理學觀察中常用的指標,也是臨床的基礎檢查之一,同樣是國標煙氣吸入實驗毒性觀察的必備指標[18]。不少腎臟病變在早期就會出現PRO,因此一旦發(fā)現尿異常,常是腎臟或尿路疾病的第一個指征。尿中如果出現大量紅細胞、大量白細胞或亞硝酸鹽為生殖感染疾病的征兆,其中亞硝酸鹽為細菌的還原產物;同時尿比重受年齡、飲水量和出汗的影響,尿比重的高低,可以看出生殖感染疾病中的某些信息;大鼠尿內通常會有少量蛋白質,其中雄性更多一些。本研究結果提示1、3、9倍于臨床濃度的艾煙暴露12周未對雄性大鼠的尿常規(guī)產生明顯的毒性影響。

盡管如此,灸診室內的可吸入顆粒物的質量濃度也高于中國和WHO的規(guī)定[19]。以至于有文獻報道[20]通過對艾灸診室的醛類物質的調查計算出艾灸的使用癌癥風險提高,提示一定的健康威脅。前期本課題組進行了艾灸場所可吸入顆粒物的理化特性[21]、質粒DNA氧化損傷[19,22]的研究結果顯示,艾燃燒所產生的可吸入顆粒物具有低金屬離子含量、低氧化損傷等特點,與大氣環(huán)境中的可吸入顆粒物具有顯著不同。與此同時,本課題組前期采集艾煙中的可吸入顆粒成分,進行的高濃度的艾致突變實驗[23-24],肯定了高濃度的艾煙染毒液的毒性。John Wheeler[25]利用國際組織中的標準條件的煙草測試實驗室,對艾煙進行了預定的機組揮發(fā)物的檢測,并根據測試結果計算出短期和長期的染毒水平,認為正常的操作條件下,不論是揮發(fā)物還是一氧化碳都不會帶來安全威脅;靳然等[13]采用固相微萃取-氣相色譜-質譜聯(lián)用(SPME-GC-MS)技術對艾煙進行定性分析,發(fā)現艾煙中的多數成分可用于香精香料,有少數成分在高濃度時有一定的毒性,也證實John Wheeler的結論。許煥芳[17]研究發(fā)現一定濃度的艾燃燒生成物接觸一定的時間可以提高SAMP小鼠的抗氧化能力,提升SOD含量,減少自由基等代謝產物,從而起到顯著的抗衰老的作用。兩者的結論也是一致的,艾煙具有抗氧化性也得到進一步的論證。

因此,艾煙的毒性以及安全性均相對而言,本實驗條件下的艾煙對Wistar大鼠的尿常規(guī)未見明顯的毒性影響。把握更為準確的艾煙的濃度是今后工作的方向,在艾煙濃度較高時進行適當的過濾或排風設備是非常必要的。

[1]朱英,陳日蘭,姬樂,等.隔藥灸神闕穴治療原發(fā)性痛經療效觀察[J].中國針灸,2010,30(6):453-455.

[2]Li X,Hu J,Wang X,et al.Moxibustion and other acupuncture point stimulation methods to treat breech presentation:a systematic review of clinical trials[J].Chin Med,2009,4:4.

[3]吳峰,康明非,熊鵬,等.針刺阿是穴配合艾灸熱敏化腧穴治療項背肌筋膜疼痛綜合征臨床隨機對照觀察[J].針刺研究,2011,36(2):116-120.

[4]關玲,石現,鄒怡,等.艾灸陽陵泉對慢性背部肌筋膜疼痛綜合征患者體表熱像的影響[J].中國針灸,2010,30(6):485-489.

[5]Matsumoto T,Terasawa S.Influence of acupuncture and moxibustion on QOL of the elderly living in nursing home and care house [J].Nihon Ronen Igakkai Zasshi,2001,38(2):205-211.

[6]劉平,潘秀頡,韓麗,等.長期艾煙干預對Wistar大鼠外周血T淋巴細胞亞群及CD4+CD25+Trek的影響[J].中國針灸,2013,33(2):145-148.

[7]Xu H,Zhao B,Cui Y,et al.Effects of Moxa Smoke on Monoamine Neurotransmitters in SAMP8 Mice[J].Evid Based Complement Alternat Med,2013：178067.

[8]Sakagami H,Matsumoto H,Satoh K,et al.Cytotoxicity and radical modulating activity of Moxa smoke[J].In Vivo,2005,19(2):391-397.

[9]MATSUMOTO H,SHIMADA J,NAGASAKA H,et al.Inhibition by Moxa smoke of NO production and iNOS expression in mouse macrophage-like cells raw 264.7[J].In Vivo,2005,19(2):471-474.

[10]Hitosugi N,Ohno R,Hatsukari I,et al.Induction of cell death by pro-oxidant action of Moxa smoke[J].Anticancer Res,2002,22(1A):159-163.

[11]黃茶熙,趙百孝,劉平,等.京津地區(qū)艾灸場所夏季可吸入顆粒物(PM10)的質量濃度及微觀形貌分析[J].中華中醫(yī)藥雜志,2012，27(12)：3104-3108.

[12]劉鈞天,崔瑩雪,黃玉海,等.艾煙與香煙對載脂蛋白E基因敲除小鼠自主行為與海馬GFAP表達的影響[J].上海針灸雜志，2015,3(10):1009-1012.

[13]靳然,趙百孝,于密密,等.艾燃燒生成物組分固相微萃取氣相色譜質譜法定性分析[J].北京中醫(yī)藥大學學報,2011,14(9):632-636.

[14]張國山,蘭蕾,常小榮,等.艾煙空氣消毒的研究進展[J].世界中西醫(yī)結合雜志，2011,6(11):1006-1009.

[15]許煥芳,崔瑩雪,黃茶熙,等.艾燃燒生成物對SAMP8小鼠血清Th1/Th2細胞因子的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2012,27(5):1387-1390.

[16]楊梅,江丹,易筠,等.艾葉燃燒物清除自由基作用的觀察[J].中國針灸,2009,29(7):547-549.

[17]許煥芳,崔瑩雪,黃茶熙,等.艾燃燒生成物對快速老化模型小鼠SAMP8血清抗氧化酶的影響[J].中國針灸,2012,32(1):53-57.

[18]中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局,中國國家標準化管理委員會.GB/T 21759-2008化學品慢性毒性試驗方法[S].2008.

[19]Huang J，Lim MY，Hwang C，et al.Contrasts in spatial and temporal variability of oxidative capacity and elemental composition in moxibustion，indoor and outdoor environments in Beijing[J].Environ Pollut，2015,202:78-84.

[20]Hsu YC，Chao HR，Shih SI.Human exposure to airborne aldehydes in Chinese medicine clinics during moxibustion therapy and its impact on risks to health[J].J Environ Sci Health A Tox Hazard Subst Environ Eng，2015,50(3):260-271.

[21]黃茶熙.艾灸診室可吸入顆粒的物理化學特征及生物活性研究[D].北京:北京中醫(yī)藥大學,2012.

[22]Huang J，Lim MY，Zhao B，et al.PM10 mass concentration and oxidative capacity of moxa smoke[J].QJM,2015,108(9):705-710.

[23]韓麗,劉平,胡海,等.艾煙中可吸入顆粒誘發(fā)染色體畸變效應的實驗研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2013,20(1):34-36.

[24]韓麗,胡海,劉平,等.艾煙中可吸人顆粒物致鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗[J].中華中醫(yī)藥雜志，2013,28(6)：1860-1863.

[25]Wheeler J,Coppock B,Chen C.Does the burning of moxa(Artemisia vulgaris)in traditional Chinese medicine constitute a health hazard?[J].Acupunct Med,2009,27(1):16-20.

(2016-01-27收稿 責任編輯：王明)

The Effects of Twelve-week Moxa Smoke Exposure on Urinary Parameters in Male Wistar Rats

Han Li1，2，Bai Hua3，Wang Lei2，Yang Jia2，Liu Juntian2，4，Wang Jing5，Huang Chang2，Liu Yaomeng2，Xing Min2，Pan Xiujie6，Zhao Baixiao2

(1InstituteofHealthPreservingofTraditionalChineseMedicine,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China;2SchoolofAcupuncture-MoxibustionandTuinaDepartment,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China；3Xi′anTraditionalChineseMedicineHospital,Xi′an710021,China; 4HuguosiHospitaloftraditionalChineseMedicine,Beijing100035,China；5WorldFederationofChineseMedicineSocieties，Beijing100101，China；6ChineseMilitaryAcademyofMedicalSciences,Beijing100039,China)

Objective:To investigate the effects of the 12-week moxa smoke intervention on urinary parameters in Wistar rats.Methods:An automatic dynamic exposure device was applied for whole-body mode exposure.The moxa smoke concentration was represented by shading rate (SR:x %).Forty-eight male Wister rats were randomly divided into 4 groups (n=12/group):three moxa smoke groups according smoke concentrations (L 0.4%,M 2.0% and H 15%) and one control group (C).Three moxa smoke groups were respectively 1,3,and 9 times the clinical concentration.The exposure lasted for 12 weeks (200 min/d and 5 d/week).After the exposure,urine samples were tested by uric dry chemical analysis method.Results:Compared with C group,no statistically differences in the color,SG,PRO,GLU,BLD,URO,BIL were found in smoke-exposed groups (P>0.05).Conclusion:The 12-week moxa smoke exposure induced no smoke-related toxicity on urinary parameters in male Wistar rats.

Moxa Smoke; Moxibustion; Shading Rate; Urinary Parameters; Urine

國家重點基礎研究發(fā)展計劃(“973”計劃)項目(編號:2009CB522906);國家自然科學基金項目(編號:81373730;81403449;81574068);國家國際科技合作專項項目(編號:2011DFA31370)

R245.81

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.10.047