陳菊屏，劉茗心，羅秀芳，范賢明，王文軍，湛曉勤

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，四川 瀘州 646000）

孟魯司特聯(lián)合強(qiáng)的松對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠模型的干預(yù)作用
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陳菊屏，劉茗心，羅秀芳，范賢明，王文軍，湛曉勤

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，四川 瀘州 646000）

目的研究孟魯司特聯(lián)合強(qiáng)的松對(duì)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化（PF）大鼠模型的干預(yù)作用。方法將60只Wistar大鼠隨機(jī)分成5組，即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、孟魯司特（MK）組、強(qiáng)的松組及聯(lián)合干預(yù)組?？瞻讓?duì)照組以生理鹽水0.2 ml注入氣管內(nèi)，其余4組以氣管內(nèi)滴注博萊霉素（5 mg/kg）建立PF模型。分別在造模后第7天和第28天5組各處死6只大鼠取材。采用蘇木精-伊紅和Masson染色法觀察肺組織纖維化改變，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清結(jié)締生長(zhǎng)因子（CTGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）的水平，免疫組織化學(xué)法染色檢測(cè)肺組織中CTGF和TGF-β1的表達(dá)水平。結(jié)果聯(lián)合干預(yù)組和模型對(duì)照組比較，第7天肺泡炎評(píng)分為（1.63±0.16）和（2.73±0.15），第28天肺間質(zhì)纖維評(píng)分（1.66±0.10）和（2.76±0.13）分，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。第7天，各組肺組織TGF-β1表達(dá)水平均低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。第28天，各組肺組織CTGF、TGF-β1表達(dá)水平均低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。第7天、第28天血清中CTGF和TGF-β1水平均低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論MK聯(lián)合強(qiáng)的松更能顯著減輕大鼠肺組織肺泡炎及PF程度，其機(jī)制與降低血清及組織中CTGF和TGF-β1的表達(dá)水平相關(guān)。

肺纖維化；強(qiáng)的松；博萊霉素；孟魯司特

肺纖維化（pulmonary fibrosis，PF）是由多種原因引起的肺間質(zhì)的慢性病變，主要病理改變存在于支氣管、肺泡及肺間質(zhì)等部位，按病因可大致分為原發(fā)性、特發(fā)性、免疫性和藥物性等幾大類(lèi)[1]。針對(duì)PF不同的病因，治療方案也不完全相同，主要為抗炎藥物、抗感染、抗腫瘤和手術(shù)治療等多種方式的對(duì)癥治療[2]。孟魯司特（Montelukast，MK）是典型的白三烯受體拮抗劑，對(duì)不同類(lèi)型的炎癥因子、細(xì)胞因子等均有抑制作用。研究結(jié)果顯示，MK對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等均有抑制作用，主要是通過(guò)對(duì)上皮組織中的纖維化改變、膠原沉淀等產(chǎn)生抑制，進(jìn)而發(fā)揮作用[3-4]。然而，目前涉及MK對(duì)PF干預(yù)效果的研究較少，相關(guān)作用機(jī)制仍不清楚。本研究采用博來(lái)霉素建立大鼠PF模型，并采用MK聯(lián)合強(qiáng)的松進(jìn)行干預(yù)治療，觀察干預(yù)前后肺泡炎癥和PF病理程度、PF相關(guān)因子表達(dá)水平的變化，探討MK聯(lián)合糖皮質(zhì)激素對(duì)PF干預(yù)效果及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料及試劑

選取西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室的75只Wistar大鼠，重量（208±12）g，均達(dá)到清潔級(jí)別。注射用鹽酸博萊霉素（批號(hào)：201550，日本化藥株式會(huì)社，15 mg/瓶）。孟魯司特（10 mg/片，批號(hào)：H200833 72，山東魯南貝特制藥有限公司）。強(qiáng)的松（125 mg/支，批號(hào)：H32022728，江蘇揚(yáng)州制藥有限公司）。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（connective tissue gowth factor，CTGF）的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫法，試劑盒、抗CTGF多克隆抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，抗TGF-β1多克隆抗體、多克隆抗體由武漢博士德公司提供，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記二抗由北京中山公司提供，大鼠Masson三色染色法試劑盒由珠海貝素生物技術(shù)公司提供。

1.2動(dòng)物分組及模型制備

60只選定的Wistar大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法劃分為5個(gè)組，即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、MK組、強(qiáng)的松組及聯(lián)合干預(yù)組，每組12只大鼠。取生理鹽水0.2 ml滴入空白對(duì)照組大鼠氣管內(nèi)，余下的4個(gè)組取0.2 ml博萊霉素緩慢注入，劑量為5 mg/kg。注入藥物后將大鼠直立并旋轉(zhuǎn)，保證藥物均勻分散在肺部，處理完成后放置在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行喂養(yǎng)觀察。建模后48 h，空白對(duì)照組與模型對(duì)照組經(jīng)腹腔注射生理鹽水5.0 ml/（kg·d），MK組生理鹽水處置與空白對(duì)照組相同，另給予孟魯司特10mg/（kg·d）灌胃處理，強(qiáng)的松組經(jīng)腹腔注射強(qiáng)的松1.0 g/L[5.0 ml/（kg·d）]，聯(lián)合干預(yù)組處置方法為將MK組和強(qiáng)的松組處理方法聯(lián)合?？瞻讓?duì)照組與模型對(duì)照組、強(qiáng)的松組都采用等量的生理鹽水進(jìn)行灌胃處理。

1.3標(biāo)本取材及處理

各組分別于第7天和第28天予以氯胺酮麻醉后腹主動(dòng)脈放血法，處死6只大鼠。大鼠處死后打開(kāi)胸腔，結(jié)扎右肺門(mén)，分離氣管和肺組織，迅速將右下肺組織置于10%中性甲醛緩沖液中固定24 h，常規(guī)脫水和包埋制備石蠟切片，用蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色和免疫組織化學(xué)法進(jìn)行病理學(xué)檢測(cè)，第28天動(dòng)物肺組織石蠟切片用Masson染色進(jìn)行病理學(xué)檢測(cè)。左肺置于液氮中，過(guò)夜后置入-70℃冰箱低溫保存，取大鼠肺組織100 mg，用研磨制備組織勻漿，嚴(yán)格按酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)要求，測(cè)定肺組織CTGF和TGF-β1的表達(dá)水平。

1.4標(biāo)本檢測(cè)

將標(biāo)本制作為石蠟切片，分別完成染色處理，方法分別為HE染色、Masson染色，將切片放置于光學(xué)顯微鏡下觀察，分析肺部組織的改變。肺泡、肺纖維化改變的評(píng)定根據(jù)SZAPIEL等[5]方法進(jìn)行評(píng)定，對(duì)其進(jìn)行分級(jí)，并以評(píng)分系統(tǒng)完成測(cè)評(píng)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用單因素方差分析，組間多重比較用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1標(biāo)本觀察

空白對(duì)照組第7天、第28天肉眼下觀察大鼠肺組織呈鮮紅色，質(zhì)地飽滿(mǎn)柔韌。模型對(duì)照組第7天外觀明顯腫脹，有新鮮出血點(diǎn)；第28天時(shí)大鼠兩肺呈灰白色，肺表面皺縮，表面可見(jiàn)散在結(jié)節(jié)樣改變，質(zhì)稍硬。MK組、強(qiáng)的松組及聯(lián)合干預(yù)組與模型對(duì)照組比較，在第7天時(shí)兩肺腫脹程度減輕，表面鮮見(jiàn)出血點(diǎn)；第28天時(shí)時(shí)大鼠兩肺呈灰白相間，質(zhì)韌，表面無(wú)結(jié)節(jié)樣改變。

2.2肺病理組織學(xué)改變及肺泡炎、肺纖維化評(píng)分

空白對(duì)照組肉眼下觀察大鼠肺組織呈鮮紅色，質(zhì)地飽滿(mǎn)柔韌。HE染色顯示，肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁薄未發(fā)生塌陷，無(wú)其他異常現(xiàn)象，如炎癥浸潤(rùn)、出血等。模型對(duì)照組第7天兩肺支氣管壁炎癥滲出明顯，伴有肺泡出血，肺泡間隔增寬；第28天鏡下可見(jiàn)肺泡組織炎癥浸潤(rùn)減少，但結(jié)構(gòu)被嚴(yán)重破壞，纖維化發(fā)生。MK組、強(qiáng)的松組及聯(lián)合干預(yù)組3組第7天鏡下觀察可見(jiàn)雙肺支氣管壁發(fā)生炎癥浸潤(rùn)；對(duì)照組模型組相對(duì)較輕，肺泡間隔呈輕度水腫，略增厚，肺泡炎癥細(xì)胞較之前減少；第28天時(shí)3個(gè)組肺部組織炎癥浸潤(rùn)均改善，對(duì)照組模型組肺泡結(jié)構(gòu)破壞程度最輕，聯(lián)合組纖維化最輕微。各組第7天和第28天肺泡炎、肺纖維化評(píng)分比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=192.757和76.408，P=0.000）。其中，模型對(duì)照組肺泡炎評(píng)分在第7天和第28天均高于其他4組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Masson染色顯示，模型對(duì)照組第28天大鼠肺間質(zhì)組織和肺泡機(jī)構(gòu)破壞嚴(yán)重，膠原纖維明顯增多，見(jiàn)彌漫、致密的纖維化。MK組、強(qiáng)的松組及聯(lián)合干預(yù)組染色較模型對(duì)照組明顯減輕，程度最輕的為聯(lián)合干預(yù)組，MK組與強(qiáng)的松組相比稍顯嚴(yán)重。經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=335.236和339.181，P=0.000）。其中，模型對(duì)照組肺纖維化評(píng)分在第7天、第28天均高于其他4組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1、2和圖1。

表15　組肺泡炎評(píng)分比較（n=6，分±s）

表15　組肺泡炎評(píng)分比較（n=6，分±s）

注：t1、P1：與第7天模型對(duì)照組比較；t2、P2：與第28天模型對(duì)照組比較

組別第7天t1值P1值第28天t1值P1值空白對(duì)照組0.47±0.1627.4880.0000.25±0.0616.6370.000模型對(duì)照組2.73±0.15--1.84±0.18--孟魯斯特組1.75±0.1411.9190.0001.26±0.166.0690.000強(qiáng)的松組1.86±0.0910.5820.0001.02±0.158.5800.000聯(lián)合干預(yù)組1.63±0.1613.3790.0000.75±0.2311.4050.000 F值192.75776.408 P值0.0000.000

表25　組肺纖維化評(píng)分比較（n=6，分±s）

表25　組肺纖維化評(píng)分比較（n=6，分±s）

注：t1、P1：與第7天模型對(duì)照組比較；t2、P2：與第28天模型對(duì)照組比較

組別第7天t1值P1值第28天t1值P1值空白對(duì)照組0.23±0.0835.1810.0000.32±0.1136.2660.000模型對(duì)照組2.59±0.12--2.76±0.13--孟魯斯特組1.86±0.1110.8830.0001.91±0.0812.6340.000強(qiáng)的松組1.91±0.1510.1370.0001.72±0.1515.4580.000聯(lián)合干預(yù)組1.73±0.1112.8200.0001.66±0.1016.3500.000 F值335.236339.181 P值0.0000.000

2.3肺內(nèi)組織TGF-β1、CTGF表達(dá)的變化

免疫組織化學(xué)法染色顯示，間質(zhì)組織中出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性顯色。各組第7天和第28天肺內(nèi)組織TGF-β1、CTGF表達(dá)比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（TGF-β1：F=155.029和71.405，P=0.000；CTGF：F=42.405和46.577，P=0.000）?？瞻讓?duì)照組肺組織僅較大血管平滑肌和氣道平滑肌見(jiàn)少量TGF-β1、CTGF陽(yáng)染組織，模型對(duì)照組肺組織可見(jiàn)TGF-β1、CTGF大量陽(yáng)染細(xì)胞，陽(yáng)染細(xì)胞聚集成片，形成典型的成纖維細(xì)胞灶，與空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MK組、強(qiáng)的松組及聯(lián)合干預(yù)組大鼠肺組織仍可見(jiàn)成纖維細(xì)胞灶存在，其中聯(lián)合干預(yù)組在第28天免疫組織化學(xué)法染色陽(yáng)性面積率低于模型對(duì)照組（P＜0.05）。見(jiàn)表3、4和圖2。

圖1　第7天和第28天的HE染色、Masson染色（×400）

表35　組大鼠不同時(shí)間肺組織TGF-β1陽(yáng)性染色面積比（n=6，%±s）

表35　組大鼠不同時(shí)間肺組織TGF-β1陽(yáng)性染色面積比（n=6，%±s）

注：t1、P1：與第7天模型對(duì)照組比較；t2、P2：與第28天模型對(duì)照組比較

組別第7天t1值P1值第28天t1值P1值空白對(duì)照組3.331±1.09320.3900.0003.34±0.9914.9260.000模型對(duì)照組18.402±1.625--19.50±1.86--孟魯斯特組17.857±1.1210.7370.46817.20±0.972.1240.044強(qiáng)的松組17.65±1.2321.0170.31917.10±2.852.2170.036聯(lián)合干預(yù)組17.56±1.2591.1390.26516.52±2.022.7520.011 F值155.02971.405 P值0.0000.000

表45　組大鼠不同時(shí)間肺組織CTGF陽(yáng)性染色面積比（n=6，%±s）

表45　組大鼠不同時(shí)間肺組織CTGF陽(yáng)性染色面積比（n=6，%±s）

注：t1、P1：與第7天模型對(duì)照組比較；t2、P2：與第28天模型對(duì)照組比較

組別第7天t1值P1值第28天t1值P1值空白對(duì)照組2.44±0.8611.3260.0002.34±0.9912.4320.000模型對(duì)照組15.68±1.68--15.80±1.86--孟魯斯特組15.05±0.930.5390.59513.3±0.972.3090.029強(qiáng)的松組13.14±2.482.1730.03913.10±2.852.4940.020聯(lián)合干預(yù)組12.74±3.152.5150.01912.52±2.023.0300.006 F值42.40546.577 P值0.0000.000

2.4血清CTGF、TGF-β1水平的變化

各組第7天和第28天血清CTGF、TGF-β1水平比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（CTGF：F= 80.573和117.861，P=0.000；TGF-β1：F=6.727和18.937，P=0.000）。MK組、強(qiáng)的松組、聯(lián)合干預(yù)組血清CTGF、TGF-β1水平均低于模型對(duì)照組。其中聯(lián)合干預(yù)組血清CTGF、TGF-β1水平均低于模型對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表5、6。

圖2　第7天和第28天免疫組織化學(xué)法染色（×400）

表55　組大鼠不同時(shí)間血清TGF-β1水平變化比較（n=6，ng/L±s）

表55　組大鼠不同時(shí)間血清TGF-β1水平變化比較（n=6，ng/L±s）

注：t1、P1：與第7天模型對(duì)照組比較；t2、P2：與第28天模型對(duì)照組比較

組別第7天t1值P1值第28天t1值P1值空白對(duì)照組22.19±1.5115.1080.00022.44±1.7118.7140.000模型對(duì)照組64.16±2.27--66.44±2.22--孟魯斯特組64.66±6.30-0.1800.85961.10±2.382.2710.032強(qiáng)的松組57.64±5.202.3470.02763.55±5.521.2290.230聯(lián)合干預(yù)組56.52±6.452.7500.01157.30±6.243.8870.001 F值80.573117.861 P值0.0000.000

表65　組大鼠不同時(shí)間血清CTGF水平變化比較（n=6，pg/L±s）

表65　組大鼠不同時(shí)間血清CTGF水平變化比較（n=6，pg/L±s）

注：t1、P1：與第7天模型對(duì)照組比較；t2、P2：與第28天模型對(duì)照組比較

組別第7天t1值P1值第28天t1值P1值空白對(duì)照組178.26±18.404.4780.000169.68±10.608.3500.000模型對(duì)照組248.08±34.40--281.06±27.27--孟魯斯特組239.64±32.430.5410.593246.35±31.742.6020.015強(qiáng)的松組237.06±24.980.7070.486249.94±17.972.3330.028聯(lián)合干預(yù)組210.11±21.192.4350.022240.29±21.963.0570.005 F值6.72718.937 P值0.0000.000

3 討論

PF病因眾多，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，屬于彌漫性肺部疾病，主要病理表現(xiàn)為大量成纖維細(xì)胞生成和肺泡上皮受損[6]?，F(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)針對(duì)肺纖維化的治療為抗炎、抗感染及避免向腫瘤轉(zhuǎn)變等多種方式的對(duì)癥治療。糖皮質(zhì)激素具有有效的抗炎作用，且在病程早期能減輕肺間質(zhì)水腫，增加氧彌散能力，是治療肺纖維化最常用的抗炎藥物[7]。目前，肺纖維化的治療已成為臨床學(xué)者的研究重點(diǎn)，新型的抗纖維化制劑、白三烯受體及細(xì)胞因子受體拮抗劑逐漸受到臨床醫(yī)師的關(guān)注[8-9]。孟魯司特是目前臨床使用效果最佳的白三烯受體拮抗劑，其應(yīng)用范圍逐漸增寬，可有效阻止白三烯受體結(jié)合，對(duì)不同類(lèi)型的炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子（促進(jìn)纖維化）的生物特性有抑制作用[10-11]。故筆者做出孟魯司特與糖皮質(zhì)激素聯(lián)合使用可能對(duì)肺纖維化病變產(chǎn)生協(xié)同抑制作用的假設(shè)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠進(jìn)行建模研究（經(jīng)氣管滴注鹽酸博萊霉素），分別在建模后第7天和第28天觀察。模型對(duì)照組第7天發(fā)生炎癥，肺纖維化改變?cè)诘?8天達(dá)峰值，并與空白對(duì)照組產(chǎn)生明顯的差異，與肺纖維化病變相符，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)建模成功且具有有效性。

目前，認(rèn)為多種炎癥細(xì)胞激活和細(xì)胞因子異常表達(dá)共同刺激肺成纖維細(xì)胞增殖，細(xì)胞外基質(zhì)合成增多，是導(dǎo)致肺泡壁和間質(zhì)發(fā)生纖維化主要原因。在多種引起肺纖維化的細(xì)胞因子中，TGF-β1是最重要的調(diào)控因子[12]。一方面TGF-β1可促進(jìn)成肺成纖維細(xì)胞異常增殖，刺激成纖維細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)，使細(xì)胞外基質(zhì)在肺間質(zhì)和肺泡間過(guò)度積聚。另一方面，TGF-β1可誘導(dǎo)蛋白酶抑制劑的表達(dá)，最終導(dǎo)致基質(zhì)的異常積聚和纖維形成[13]。研究發(fā)現(xiàn)，孟魯司特可通過(guò)抑制TGF-β1、CTGF、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）及IL-13等細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的表達(dá)，起抑制上皮下結(jié)構(gòu)膠原沉積、纖維化的作用[14-16]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型對(duì)照組血清和肺組織TGF-β1水平在第28天顯著升高，提示TGF-β1可能促進(jìn)肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展。MK組血清和肺組織TGF-β1水平在第28天降低，結(jié)合Masson染色說(shuō)明孟魯司特可能抑制TGF-β1的表達(dá)，延緩肺纖維化的進(jìn)程。

結(jié)締組織生長(zhǎng)因子是在組織纖維化過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的細(xì)胞因子，是TGF-β1的下游效應(yīng)介質(zhì)，能刺激成纖維細(xì)胞異常分泌外細(xì)胞外基質(zhì)和肌成纖維母細(xì)胞激活[17-18]。TGF-β1可通過(guò)與CTGF啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，上調(diào)CTGF表達(dá)，兩者共同促進(jìn)肺纖維化的發(fā)生[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，模型對(duì)照組血清和肺組織CTGF、TGF-β1水平在第28天顯著升高，在MK組、強(qiáng)的松組、聯(lián)合干預(yù)組血清和肺組織中CTGF、TGF-β1水平均有不同程度的降低，其中聯(lián)合干預(yù)組CTGF、TGF-β1水平降低最明顯，提示MK組和強(qiáng)的松可能通過(guò)協(xié)同下調(diào)CTGF、TGF-β1在大鼠體內(nèi)的表達(dá)水平，緩解大鼠肺纖維化的進(jìn)程。

綜上所述，孟魯司特聯(lián)合強(qiáng)的松對(duì)建模（博萊霉素）肺纖維化大鼠的干預(yù)具有有效性，可明顯緩解肺泡組織、肺纖維化病變程度。主要機(jī)制可能是通過(guò)對(duì)血清和肺部組織中的CTGF、TGF-β1產(chǎn)生抑制作用，阻礙其生成表達(dá)，進(jìn)而對(duì)肺泡壁、肺間質(zhì)的纖維化產(chǎn)生抑制作用。兩種藥物的聯(lián)合干預(yù)與單一使用時(shí)相比，療效更佳，為臨床治療PF提供新的途徑。

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（童穎丹 編輯）

Intervention of Montelukast plus Prednisone on Bleomycininduced acute exacerbation of pulmonary fibrosis in rats*

Ju-ping Chen,Ming-xin Liu,Xiu-fang Luo,Xian-ming Fan,Wen-jun Wang,Xiao-qin Zhan
(Department of Respiratory Medicine,the Affiliated Hospital of Southwest Medical University,Luzhou,Sichuan 646000,China)

Objective To study the intervention of Montelukast plus Prednisone in a rat model of pulmonary fibrosis(PF)induced by Bleomycin.Methods Sixty Wister rats were randomly divided into 5 groups including blank control,model control,Montelukast,Prednisone and combined Montelukast and Prednisone treatment groups.Pulmonary fibrosis model was induced by Bleomycin.The rats were sacrificed on the 7th and 28th day after modeling respectively.The degrees of lung inflammation and pulmonary fibrosis were detected by hematoxylin and eosin staining and Masson staining.The serum levels of connective tissue growth factor(CTGF)and TGF-β1were assessed by enzyme-linked immunosorbent assay.The expressions of CTGF and TGF-β1 in lung tissues were evaluated by immunohistochemical staining.Results The scores of alveolitis in the model control group and the Montelukast group on day 7 were(1.63±0.16)and(2.73±0.15)respectively,the difference was significant between the two groups(P＜0.01).The scores of pulmonary fibrosis in the model control group and the Montelukast group on day 28 were(1.66±0.10)and(2.76±0.13)respectively, the difference was significant between the two groups(P＜0.01).On day 7,the TGF-β1 level in the lung tissues of the blank control,Montelukast,Prednisone and combined Montelukast and Prednisone treatment groupsdecreased as compared to the model control group with significant differences(P＜0.05).Compared with the model control group,the CTGF and TGF-β1 levels in the lung tissues of other groups significantly decreased on day 28(P＜0.01).On day 7 and 28,the serum levels of CTGF and TGF-β1in the model control group were significantly higher than those of other groups(P＜0.01).Conclusions The combined treatment of Montelukast and Prednisone can alleviate alveolitis and pulmonary fibrosis induced by Bleomycin,and its mechanism is associated with the reduced CTGF and TGF-β1expressions in lung tissues.

pulmonary fibrosis;Prednisone;Bleomycin;Montelukast

R595.3；R563.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.21.001

1005-8982（2016）21-0001-07

2016-05-31

四川省瀘州市科技局項(xiàng)目[No：2011-S-39（5/6）]