朱旺明，崔祥東，陳翠英，藍(lán)漢冰，譚永剛，黃永政，朱志明，陳玉敏

（1.佛山市信豚生物科技有限公司，佛山南海528211；2.廣州市信豚水產(chǎn)技術(shù)有限公司，廣州天河510642）

飼料中不同維生素E水平對加州鱸生長和抗氧化性能的影響

朱旺明1，2*，崔祥東1，2，陳翠英1，2，藍(lán)漢冰1，2，譚永剛1，黃永政1，2，朱志明2，陳玉敏2

（1.佛山市信豚生物科技有限公司，佛山南海528211；2.廣州市信豚水產(chǎn)技術(shù)有限公司，廣州天河510642）

以維生素E實(shí)際添加量分別為20.50（對照組）、39.86、54.74、87.52和131.78 mg/kg的5種等氮等脂的試驗(yàn)飼料飼養(yǎng)初始體重為（34.27±0.26）g的加州鱸幼魚8周，研究不同維生素E水平對其生長及抗氧化性能的影響。結(jié)果表明，隨著飼料維生素E添加水平的升高，加州鱸的增重率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率逐漸升高，但當(dāng)飼料中維生素E添加量為131.78 mg/kg時，其增重率和特定生長率顯著降低（P＜0.05）。各維生素E添加組的脂體比顯著低于對照組，而肥滿度則顯著高于對照組（P＜0.05）。飼料中添加維生素E顯著降低了血清丙二醛的含量（P＜0.05），但對血清總抗氧化能力、過氧化氫酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性無顯著影響（P＞0.05）。由此可知，飼料中添加一定量的維生素E可促進(jìn)加州鱸的生長，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的含量。以特定生長率和增重率為評價指標(biāo)，經(jīng)二次回歸方程預(yù)測加州鱸飼料中維生素E的適宜添加水平為63.33～69.44 mg/kg。

加州鱸；維生素E；生長；抗氧化

維生素E又名生育酚，為一類化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的酚類化合物，在清除自由基、維護(hù)生物膜結(jié)構(gòu)、抗氧化和增強(qiáng)機(jī)體免疫力和抗病力等方面具有非常重要的作用（Niki，2014；Brigelius-Flohe，2006）。研究發(fā)現(xiàn)，魚類自身不能合成維生素E或合成的量太少，不能充分滿足機(jī)體的需要，必需從外界攝入（通常是飼料）以維持機(jī)體的生長、繁殖和健康。飼料中維生素E缺乏或不足時，容易導(dǎo)致魚體出現(xiàn)一系列缺乏癥，如紅細(xì)胞生成障礙、貧血、組織水腫、皮下出血、肝臟和肌肉退化等（Hamre，2011）。

加州鱸（Micropterus salmoides），又名大口黑鱸，為肉食性溫水魚類，具有生長快、肉質(zhì)鮮美、抗病力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是我國養(yǎng)殖的主要淡水魚品種之一。當(dāng)前加州鱸養(yǎng)殖以投喂冰鮮雜魚為主，或采用冰鮮雜魚與飼料混合投喂的方式，由于其營養(yǎng)需求、消化吸收和代謝機(jī)制的研究相對缺乏，人工配合飼料的研制一直未能取得重大突破。目前，有關(guān)加州鱸蛋白質(zhì)、脂肪和維生素需要的研究已有報道（Chen等，2015、2013；梁勤朗，2012；肖溫溫，2012），但對加州鱸維生素E營養(yǎng)需求的研究不多。Chen等（2015）研究發(fā)現(xiàn)，在大口黑鱸飼料中硒添加量為1.9 mg/kg的基礎(chǔ)上添加維生素E 160 mg/kg，能在一定程度上減輕魚油氧化帶來的負(fù)面影響。而Zhu等（2012）認(rèn)為飼料中維生素E的水平為400 IU/kg時，大口黑鱸的生長速度最快。本試驗(yàn)通過在配合飼料中添加不同劑量的維生素E，研究維生素E對加州鱸生長性能及抗氧化性能的影響，旨在探討加州鱸對配合飼料中維生素E的需求，以期為加州鱸的人工配合飼料的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料飼料以維生素E醋酸酯作為添加源，分別按照維生素E含量為0（對照組）、20、40、80、160 mg/kg添加，以微晶纖維素為填充劑，使各試驗(yàn)組飼料其他營養(yǎng)水平保持一致。維生素E醋酸酯購自浙江醫(yī)藥股份有限公司，有效含量為50%。采用反相高效液相色譜法測得上述5組飼料中維生素E的實(shí)際添加量分別為20.50（對照組）、39.86、54.74、87.52、131.78 mg/kg。所有飼料原料經(jīng)80目過篩，充分混勻后制成粒徑為3 mm的膨化飼料，烘干后置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩；A(chǔ)飼料成分及營養(yǎng)水平見表1。

表1 加州鱸試驗(yàn)飼料組成與營養(yǎng)水平%

1.2 試驗(yàn)魚與飼養(yǎng)管理試驗(yàn)于2015年7—9月在佛山市信豚生物科技有限公司南沙中試實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行，加州鱸購于廣東省佛山市南海區(qū)優(yōu)鱸1號養(yǎng)殖場，先放入暫養(yǎng)箱中用基礎(chǔ)飼料（對照組飼料）馴養(yǎng)2周至其完全適應(yīng)池塘網(wǎng)箱試驗(yàn)環(huán)境。馴養(yǎng)結(jié)束后，選取平均體重為（34.27±0.26）g的健康加州鱸幼魚750尾，隨機(jī)分在15個網(wǎng)箱（1.5 m× 1.5 m×2 m）中，每個網(wǎng)箱50尾，分別投喂5組飼料，每組飼料3個重復(fù)，飼養(yǎng)周期為8周。每天投喂兩次（8∶00和17∶00），投喂率為體重的2%～4%，同時根據(jù)水溫、天氣和魚的攝食情況調(diào)整投喂量。每天記錄投喂量和試驗(yàn)魚的死亡數(shù)據(jù)，并定期檢查水體的氨氮、亞硝酸鹽、溶解氧等理化因子。試驗(yàn)期間水溫為28.0～32.0℃，露天養(yǎng)殖，自然光照，pH值為7.2～7.8，水中氨氮含量0.1～0.2 mg/L，亞硝酸鹽小于0.05 mg/L，溶氧大于5.0 mg/L。

1.3 樣品采集養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束前，停食24 h，然后對每個網(wǎng)箱中的所有加州鱸進(jìn)行計數(shù)、稱重，記錄生長情況。從每個網(wǎng)箱隨機(jī)撈取5尾魚，測定體重、體長等相關(guān)指標(biāo)，同時進(jìn)行血液和肝臟樣品的采集。用1 mL無菌注射器尾靜脈采血，置于無菌離心管中，4℃靜置12 h后，3500 g離心10 min，制備血清，-80℃保存?zhèn)溆?。取肝臟組織，剔除其表面的結(jié)締組織附著物，并按重量1∶10加入PBS（pH 7.4）緩沖液，均漿機(jī)高速均漿后，3500 g低溫離心20 min，取上清液，置于-80℃保存?zhèn)溆?。另每箱隨機(jī)取4尾魚，擦干體表水分，經(jīng)液氮速凍后保存于-20℃，用于全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的分析。

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 生長性能指標(biāo)的測定

成活率（SR，%）=試驗(yàn)結(jié)束時魚尾數(shù)/試驗(yàn)開始時尾數(shù)×100；

增重率（WG，%）=（終末體重–初始體重）/初始體重×100；

特定生長率（SGR，%/d）=ln（試驗(yàn)魚末重/試驗(yàn)魚初重）/飼養(yǎng)時間×100；

飼料系數(shù)（FCR）=飼料攝食量/試驗(yàn)魚增重；

蛋白質(zhì)效率（PER，%）=試驗(yàn)魚增重/（試驗(yàn)魚飼料攝食量×飼料蛋白含量）×100；

臟體比（VSI）=試驗(yàn)魚內(nèi)臟重/試驗(yàn)魚體重× 100；

肝體比（HIS）=試驗(yàn)魚肝臟重/試驗(yàn)魚體重× 100；

魚體肥滿度（CF）=試驗(yàn)魚體重/試驗(yàn)魚體長3× 100。

1.4.2 常規(guī)營養(yǎng)成分測定飼料、全魚和肝臟的粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分和水分按照國標(biāo)GB/T 6432-1994、GB/T 6433-2006、GB/T 6438-2007和GB/T 6435-2014的方法測定。飼料維生素E的含量按照國標(biāo)GB/T 17812-2008中的皂化提取法進(jìn)行提取，然后采用反相高效液相色譜法分析。

1.4.3 抗氧化性能指標(biāo)的測定血清總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）和丙二醛（MDA）均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定，具體測定方法參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計分析采用SPSS 16.0對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。在單因素方差分析（One-Way ANOVA）達(dá)到顯著水平時（P＜0.05），采用Turkey’s檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)表示為“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同維生素E水平對加州鱸生長性能和飼料利用率的影響由表2可以看出，加州鱸幼魚的增重率、特定生長率和蛋白質(zhì)效率呈現(xiàn)相似的趨勢，都隨飼料中維生素E添加水平的升高先逐漸升高，在維生素E添加量為87.52 mg/kg時達(dá)到最高值，而后則開始下降，且增重率和特定生長率顯著高于添加量最高組（131.78 mg/kg）（P＜0.05）。相反，加州鱸的飼料系數(shù)隨飼料中維生素E添加水平的升高逐漸降低，在維生素E添加量為87.52 mg/kg時達(dá)到最低值，131.78 mg/kg維生素E添加組的飼料系數(shù)最高，但各組之間差異并不顯著（P＞0.05）。將維生素E添加水平與增重率和特定生長率作二次回歸曲線分析可得，獲得最大增重率時飼料中維生素E最低添加量分別為69.44 mg/kg（圖1）和63.33 mg/kg（圖2）。攝食添加39.86 mg/kg維生素E飼料組的成活率最高，但與其余各組差異不顯著（P＞0.05）。

表2 不同維生素E飼喂水平對加州鱸生長性能、飼料利用效率和形體指標(biāo)的影響

圖1 加州鱸增重率與飼料維生素E添加水平的關(guān)系

圖2 加州鱸特定生長率與飼料維生素E添加水平的關(guān)系

2.2 不同維生素E水平對加州鱸形體指標(biāo)和體成分的影響由表2可知，與對照組相比，飼料中添加54.74 mg/kg維生素E顯著降低了加州鱸的臟體比（P＜0.05）。維生素E低水平組（20.50、39.86 mg/kg）的肝體比顯著高于各維生素E高水平組（54.74、87.52、131.78 mg/kg）。對照組魚的脂體比顯著高于各維生素E添加組，而肥滿度則顯著低于各維生素E添加組（P＜0.05）。不同維生素E添加水平對加州鱸魚體成分的影響不顯著（P＞0.05）（表3）。

表3 不同維生素E飼喂水平對加州鱸體成分的影響

2.3 不同維生素E水平對加州鱸抗氧化性能的影響由表4可知，隨著飼料維生素E添加水平的增加，血清丙二醛的含量逐漸下降，且添加量最高組的丙二醛含量顯著低于對照組（P＜0.05），但不同維生素E添加水平對加州鱸血清抗氧化指標(biāo)的影響均不顯著（P＞0.05）。飼料添加54.74 mg/kg維生素E組的血清總抗氧化能力最高，但其超氧化物歧化酶的活性卻最低。各維生素E添加組的谷胱甘肽過氧化物酶的活性都高于對照組，但各組間差異并不顯著（P＞0.05）。

表4 不同維生素E飼喂水平對加州鱸體成分的影響

3 討論

研究表明，適量的維生素E可以促進(jìn)魚類健康生長、提高飼料利用率和成活率，而維生素E缺乏或過量均會使機(jī)體處于一種不良的生理狀態(tài)，不利于自身的生長發(fā)育（Hamre，2011）。Huang等（2004）報道，85 IU/kg維生素E顯著提高了奧尼羅非魚（Oreochromis niloticus×O.aureus）的生長和飼料利用率，且飼料缺乏或添加過量（298 IU/kg）維生素E均導(dǎo)致奧尼羅非魚生長和飼料利用率顯著下降。飼料中添加適量維生素E（27.8～107.5 mg/kg）可明顯提高團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）幼魚的增重率和攝食率（周明等，2013）。本試驗(yàn)也表明，適量添加維生素E能提高加州鱸幼魚的增重率和特定生長率，而當(dāng)飼料中維生素E含量在131.78 mg/kg時，生長性能顯著下降。在本試驗(yàn)中，維生素E含量較低的對照組（20.50 mg/kg）未見有明顯的維生素E外部缺乏癥出現(xiàn)，這可能是因?yàn)樵囼?yàn)魚自身肝臟儲存有一定量的維生素E且試驗(yàn)周期較短而不足以產(chǎn)生維生素E缺乏癥。

以加州鱸特定生長率和增重率為指標(biāo)，通過二次回歸方程求得的飼料中維生素E的最低需要量為63.33、69.44 mg/kg。這一結(jié)果與花鱸（Lateolabrax japonicus）（60.5mg/kg）（周立斌等，2009）和羅非魚（50～100 mg/kg）（Huang等，2004；Shaiu和Shaiu，2001）等相近，低于石斑魚（Epinephelus malabaricus）（104～115 mg/kg）（Lin和Shiau，2005）、軍曹魚（Rachycentron canadum）（78～111 mg/kg）（Zhou等，2013）和草魚（Ctenopharyngodon idellus）（100～200 mg/kg）（Li等，2014；Takeuchi等，1992），但高于青魚（Mylopharyngodon piceus）（45 mg/kg）（黃云等，2013）和雜交條紋鱸（M. chrysops female×M.saxatilis）（28 mg/kg）（Kocabas和Gatlin，1999）。不同魚類對維生素E的消化吸收代謝不同，可能導(dǎo)致對維生素E需求量的不同。此外，飼料的組成、試驗(yàn)條件、試驗(yàn)魚規(guī)格等多種因素都會影響魚類對維生素E的需求量（NRC，2011；Hamre，2011）。

維生素E在魚類上的抗氧化作用主要體現(xiàn)在以下三個方面：一是抗脂質(zhì)過氧化，二是抗蛋白質(zhì)過氧化，三是保護(hù)抗氧化酶活性（許友卿等，2010）。在脂質(zhì)過氧化過程中，會產(chǎn)生大量的自由基和丙二醛（MDA），而維生素E能通過保護(hù)超氧化物歧化酶、清除自由基、降低或終止脂質(zhì)過氧化反應(yīng)而降低機(jī)體組織或血液中的MDA水平（王仁忠等，2009；Sahoo等，2008），因此MDA經(jīng)常被作為測定脂質(zhì)過氧化程度以及抗氧化物質(zhì)抗氧化能力的一個重要指標(biāo)（De Zwart等，1999；Harats等，1990）。大量研究表明，飼料中添加維生素E能顯著降低草魚（Li等，2014）、黑鯛（Peng等，2009；彭士明等，2008）、大鯪鲆（?；赖?，2014）的MDA含量。本試驗(yàn)也同樣發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中維生素E添加量的上升，加州鱸血清中的MDA含量明顯降低。這表明飼料中添加維生素E能有效降低加州鱸機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，降低血液中MDA水平。

動物機(jī)體內(nèi)清除自由基的抗氧化酶系統(tǒng)主要包括超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶以及谷胱甘肽還原酶等（彭士明等，2008）。維生素E能清除動物體內(nèi)的氧化應(yīng)激物質(zhì)對機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)的氧化脅迫，從而保護(hù)抗氧化酶，使其活性維持正常（Huang等，2004）。在本試驗(yàn)結(jié)果中，飼料中添加維生素E能有效提高加州鱸血清中的谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，但各組間沒有顯著差異。Mourente等（2002）的試驗(yàn)結(jié)果同樣表明，添加維生素E對金頭鯛肝臟GSH-Px和GR活性沒有顯著影響。彭士明等（2008）報道也指出，投喂氧化魚油的情況下，添加維生素E對黑頭鯛肝臟的GSH-Px活性沒有顯著影響。但Garg等（2009）報道，維生素E能顯著降低脂質(zhì)過氧化水平，同時提高機(jī)體還原型谷胱甘肽（GSH）含量，顯著提高谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（GST）的活性。本試驗(yàn)中的超氧化物歧化酶（SOD）均略低于對照組，但與對照組均沒有顯著差異（P＞0.05）。同樣，陳聘等（2010）在黃顙魚試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，飼料中添加維生素E對黃顙魚血液中的SOD活性沒有顯著影響，但也有研究表明，血液中的SOD活性隨著飼料中維生素E含量的升高而上升（李志華等，2013；蔡中華等，2001；Wise等，1993）。本試驗(yàn)中的過氧化氫酶（CAT）活性各組間沒有明顯差異。在大多數(shù)的有關(guān)飼料中添加氧化魚油的前提下添加維生素E的研究結(jié)果表明，飼料中添加維生素E能顯著降低機(jī)體組織中CAT的水平（唐筱等，2010；彭士明等，2008；Mourente等，2002），這是否是因?yàn)樵谡Ｇ闆r下（沒有氧化油脂或其他脅迫條件下），機(jī)體內(nèi)的CAT會保持一個相對平穩(wěn)的水平還值得進(jìn)一步研究。本試驗(yàn)結(jié)果表明，總抗氧化能力（T-AOC）在維生素E添加量為54.74 mg/kg時達(dá)到最高，而已有資料中有關(guān)飼料中添加維生素E對機(jī)體組織或血液中總抗氧化能力影響的研究較少。本試驗(yàn)中的各抗氧化酶活性指標(biāo)與對照組之間并不存在顯著差異，與其他研究者的研究結(jié)果存在一定差異，原因可能與試驗(yàn)飼料的設(shè)計以及試驗(yàn)對象有關(guān)，相對于其他試驗(yàn)飼料，本試驗(yàn)的對照組中維生素E的含量比較高，可能已滿足機(jī)體維持各種酶活性處于正常水平的需要，因而導(dǎo)致各試驗(yàn)組與對照組之間沒有顯著差異，有關(guān)維生素E與抗氧化酶之間的關(guān)系還有待進(jìn)一步的深入研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在體重為（34.27±0.26）g的加州鱸配合飼料中添加維生素E可促進(jìn)加州鱸的生長，提高飼料蛋白質(zhì)效率，降低血清中丙二醛水平，保持抗氧化酶活性穩(wěn)定等。綜合生長性能指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)，建議加州鱸人工配合飼料中維生素E的添加量為63.33～69.44 mg/kg。

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To investigate the effects of dietary vitamin E on growth performance and antioxidant activity of Micropterus salmoides，five diets supplemented with graded levels of vitamin E 20.50（control），39.86，54.74，87.52 and 131.78 mg/kg dry weight，respectively were fed to triplicate treatments of 50 juveniles each with the initial weight of（34.27±0.26）g for 8 weeks.The results showed that the weight gain（WG）and special growth rate（SGR）and the protein efficiency ratio of fish were increased with vitamin E level in the diet increasing.But the weight gain（WG）and special growth rate（SGR）of fish fed the diet with 131.78 mg/kg vitamin E were significantly decreased（P＜0.05）.The lipid/body rate of the fish fed the dies supplemented vitamin E was significantly lower than that of the control group.And the fullness of the fish fed the dies supplemented vitamin E was significantly higher than that of the control group（P＜0.05）.The serum malondialdehyde（MDA）content of fish fed the diet added vitamin E was significaming lower than that of the control group（P＜0.05）.But there was no significantly effects on total antioxidant capacity（T-AOC），catalase（CAT），superoxide dismutase（SOD）and glutathione peroxidase（GSH-PX）among groups（P＞0.05）.The results indicated that vitamin E could increase the weight gain and decrease the lipid peroxide content of juvenile Micropterus salmoides，and the suitable level of dietary vitamin E was 63.33～69.44 mg/kg.

Micropterus salmoides；vitamin E；growth；antioxidant activity

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161709

S816.7

A

1004-3314（2016）17-0032-06

科技型中小企業(yè)創(chuàng)新資金項(xiàng)目（14C26214402665）

*通訊作者