楊美平

河北平山縣人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科 平山 050400

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重型顱腦損傷并發(fā)急性腎損傷患者NGAL和CysC水平變化及診斷價(jià)值

楊美平

河北平山縣人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科 平山 050400

目的 研究重型顱腦損傷并發(fā)急性腎損傷(AKI)患者中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)和血清胱抑素C(CysC)水平的變化及診斷意義。方法 選取我院76例重型顱腦損傷合并AKI患者，采用雙夾心抗體ABC-ELISA法檢測NGAL，免疫散射比濁法檢測CysC，并與正常體檢者進(jìn)行比較，同時(shí)分析不同分期急性腎損傷患者及不同生存結(jié)局患者NGAL和CysC水平。結(jié)果 AKI患者NGAL、CysC水平均顯著高于正常組，隨分期上升均呈遞增趨勢，各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；76例中死亡18例，存活58例，死亡患者NGAL、CysC水平分別為(1.52±0.51)μg/L、(2.96±0.92)mg/L，顯著高于存活患者的(3.95±1.10)μg/L、(5.87±2.03)mg/L。結(jié)論 重型顱腦損傷患者NGAL和CysC表現(xiàn)為異常上升，且隨AKI分期發(fā)生改變，可作為預(yù)后的預(yù)測因子。

NGAL；CysC；重型顱腦損傷；急性腎損傷

重型腦損傷為臨床常見急危重癥，致死率達(dá)30%～60%[1]，除顱內(nèi)損傷本身傷情外，其并發(fā)急性腎損傷、全身感染或多器官功能障礙綜合征等同為影響預(yù)后的危險(xiǎn)因素。重型顱腦損傷合并AKI患者診斷難度較高，以往認(rèn)為血清肌酐及尿量可靠性較高，但重型顱腦損傷患者受非腎性因素影響較大，如手術(shù)、藥物等，因此，上述指標(biāo)特異性降低，急需尋求更為準(zhǔn)確的診斷指標(biāo)[2]。近年發(fā)現(xiàn)的幾種AKI生物標(biāo)志物用于診斷急性腎損傷的效果已得到認(rèn)可，主要包括CysC與NGAL，為研究兩者在重型顱腦損傷合并AKI中診斷的可行性，本次研究對我院76例患者進(jìn)行相關(guān)檢驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選取我院2011-08—2014-11收治的76例重型顱腦損傷合AKI患者為研究對象，男43例，女33例，年齡24～61(52.16±7.58)歲。另選同期正常體檢者30例為正常組，男19例，女11例，年齡23～58(53.13±7.42)歲；排除合并嚴(yán)重感染、乙肝相關(guān)腎炎、糖尿病腎病、狼瘡性腎炎及腫瘤相關(guān)腎疾病者。2組性別、年齡等基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1．2 檢測方法 空腹抽取肘靜脈血5 mL，保存至真空采血管內(nèi)，4 000 r/min離心2 min，分離上清，于-20 ℃保存待檢。NGAL檢測：雙夾心抗體ABC-ELISA法檢測，試劑由武漢博士德公司提供。洗滌液：將20 mL洗滌液與450 mL蒸餾水相溶，配制為470 mg洗滌液；顯色液：顯色液A、B于使用前15 min等量混合；校準(zhǔn)液RD5-24：校準(zhǔn)液原液20 mL加入蒸餾水80 mL，配制為100 mL稀釋液：標(biāo)準(zhǔn)品配置：加入1 000 mL蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液內(nèi)，配制為100 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品原液，后準(zhǔn)備7個(gè)EP管，第1個(gè)管中加入100 ng/mL 100 μL原液，后將900 μL RD5-24液體加入1管內(nèi)并混勻，第2管內(nèi)加入第1管500 μL液體，后將500 μL RD5-24液體于2管內(nèi)，重復(fù)上述操作，后配置成為10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156 ng/mL的管標(biāo)準(zhǔn)品。檢測過程：在室溫下將試劑盒放置15～20 min，沒孔加入100 μL樣品稀釋液RD5-24，第1孔為空白孔，2～8孔內(nèi)加入標(biāo)準(zhǔn)品，剩余孔為尿液樣品，每孔內(nèi)加入50 μL，將板蓋上，于2～8 ℃環(huán)境內(nèi)反應(yīng)2 h，完成后用洗滌液將每孔洗滌4次，后使其干燥，在每孔內(nèi)加入200 μL NGAL抗體結(jié)合液，將蓋子蓋好后2～8 ℃反應(yīng)2 h，后洗滌4次，每孔內(nèi)加入200 μL顯色液，注意在避光室內(nèi)下進(jìn)行，反應(yīng)30 min，每孔內(nèi)加入50 μL終止液，30 min內(nèi)在450 mm波長的酶標(biāo)儀內(nèi)讀取孔內(nèi)OD值，將OD作為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品為橫坐標(biāo)做曲線圖，根據(jù)OD值找出濃度范圍。CysC檢測：采取Behring免疫散射比濁法檢測，試劑購自北京嘉鴻生物科技有限公司，嚴(yán)格依照說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2．1 不同分期AKI患者NGAL和CysC水平比較 隨著AKI分期NGAL、CysC均呈遞增趨勢，AKI患者兩項(xiàng)水平顯著低于正常值，且不同分期AKI患者組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同分期AKI患者NGAL和CysC水平比較

注：與Ⅰ期比較，①P<0.05；與Ⅱ期比較，②P<0.05；與Ⅲ期比較，③P<0.05

2．2 NGAL和CysC對AKI死亡事件發(fā)生的判斷 76例患者中死亡18例，存活58例；死亡患者NGAL、CysC水平顯著高于存活患者。見表2。

表2 NGAL和CysC對AKI死亡事件發(fā)生的判斷

3 討論

重型顱腦損傷合并AKI近年發(fā)病率明顯上升，可進(jìn)展為嚴(yán)重腎損傷，病死率高達(dá)40%，以往多采用血肌酐等指標(biāo)進(jìn)行檢測，但敏感性較低，且非腎因素對其水平影響較大，易出現(xiàn)漏診或誤診[3]，故尋找替代指標(biāo)對患者病情回歸及預(yù)后有重要的臨床意義。

NGAL是脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族成員，分子量25 u，以共價(jià)鍵結(jié)合于中性粒細(xì)胞明膠酶，通常在肝臟、結(jié)腸、腎臟中表達(dá)，但表達(dá)水平極低，如機(jī)體發(fā)生炎癥或上皮細(xì)胞受損時(shí)NGAL被誘導(dǎo)則表達(dá)升高，多高表達(dá)于腎小管，同時(shí)可誘導(dǎo)腎小管間質(zhì)中浸潤的中性粒細(xì)胞凋亡，可抑制炎性細(xì)胞對腎臟組織的損傷[4-5]。動(dòng)物學(xué)研究顯示，微陣列基因表達(dá)譜分析檢測NGAL最為穩(wěn)定和及時(shí)，且NGAL診斷AKL敏感度為90%，特異性則可達(dá)到99.5%[6-7]?；颊甙l(fā)生重癥顱腦損傷或急性腎損傷時(shí)，以ELISA法檢測NGAL可在血液及尿液中獲得較高水平表達(dá)[8]。

CysC為半胱氨酸蛋白酶抑制物家族成員，其水平通常較為恒定，受影響因素少，如年齡、性別、炎癥等均對其無明顯影響，因此特異性較高。CysC經(jīng)腎小球?yàn)V過，而腎小球不分泌CysC，人體只有腎臟對循環(huán)中CysC進(jìn)行清除[9]。眾多研究顯示，腎臟出現(xiàn)損傷后，CysC異常改變時(shí)間較血肌酐變化更早，提前1～2 d[10]，且隨損傷程度加重不斷增高。因此，CysC較血肌酐在短時(shí)間內(nèi)對輕、中度腎損傷的診斷價(jià)值更高[11-12]。

本次研究中重型顱腦損傷合并AKI患者NGAL及CysC水平顯著高于正常組，且Ⅲ期組明顯高于Ⅰ期組、Ⅱ期組，死亡患者NGAL及CysC明顯高于存活患者，表示NGAL及CysC可用于評估急性腎損傷病情程度，可作為死亡預(yù)測因子。

綜上，NGAL和CysC診斷重型顱腦損傷合并AKI效果顯著，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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(收稿2015-10-23)

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1673-5110(2016)19-0110-03