李永慶,尚培中,任愛玲，柳 勇，谷化平，李 偉

(1.中國人民解放軍第251醫(yī)院普通外科，河北 張家口 075000；2.中國人民解放軍第251醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000)

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甲狀腺乳頭狀癌nm23H1和VEGF的表達(dá)及其意義

李永慶1,尚培中1,任愛玲1，柳 勇1，谷化平2，李 偉2

(1.中國人民解放軍第251醫(yī)院普通外科，河北 張家口 075000；2.中國人民解放軍第251醫(yī)院病理科，河北 張家口 075000)

目的 探討甲狀腺乳頭狀癌(PTC)nm23H1和VEGF表達(dá)及其意義。方法 應(yīng)用免疫組化染色EliVisionTMplus兩步法檢測(cè)164例PTC癌組織和30例癌旁甲狀腺組織中nm23H1和VEGF的表達(dá)狀況。結(jié)果 癌組織nm23H1總體陽性表達(dá)率(57.3%)顯著低于癌旁組織(93.3%)(P<0.05)，有浸潤(rùn)和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達(dá)率顯著低于無浸潤(rùn)和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)；癌組織VEGF總體陽性表達(dá)率(59.8%)顯著高于癌旁組織(13.3%)(P<0.05)，有浸潤(rùn)和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達(dá)率顯著高于無浸潤(rùn)和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)；癌組織nm23H1和VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.47)。結(jié)論 nm23H1和VEGF表達(dá)與PTC浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移相關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)對(duì)判斷預(yù)后有一定意義。

甲狀腺腫瘤；nm23H1；VEGF；浸潤(rùn)；轉(zhuǎn)移

nm23H1(nm表示non-metastasis，23表示第23個(gè)克隆基因，H1表示人類nm23家族成員的第1個(gè))是人類一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，與細(xì)胞分化、凋亡、增殖及DNA突變等相關(guān)，其表達(dá)狀況影響多種癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能。VEGF(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，vascular endothelial growth factor)在腫瘤中高表達(dá)可刺激新生血管形成，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲狀腺癌最常見的一種病理類型，約占甲狀腺癌的70%～80%[1]。我們采用免疫組化染色EliVisionTMplus兩步法檢測(cè)164例PTC組織nm23H1和VEGF的表達(dá)，探討其與PTC浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以期為指導(dǎo)臨床隨訪和治療提供參考指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2009-03-2016-02月于中國人民解放軍第251醫(yī)院行手術(shù)治療的PTC患者164例，其中男53例，女111例；年齡17～75歲，平均(39.4±11.9)歲。所有患者術(shù)前行彩超、CT、磁共振等影像學(xué)檢查了解腫瘤大體情況；術(shù)中根據(jù)具體探查及納米炭混懸液淋巴示蹤，按照治療指南及專家共識(shí)確定甲狀腺切除和頸淋巴結(jié)清除范圍；術(shù)后根據(jù)病理診斷及免疫組化結(jié)果綜合判定腫瘤大小、部位，是否有甲狀腺包膜、腺體外組織或血管浸潤(rùn)及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本組有浸潤(rùn)者99例，無浸潤(rùn)者65例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者93例，無轉(zhuǎn)移者71例。選取距瘤體2 cm以上、經(jīng)病理檢查確認(rèn)無腫瘤組織的同側(cè)或?qū)?cè)癌旁甲狀腺組織30例作為對(duì)照組。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

入選患者原發(fā)癌瘤直徑>1.0 cm，術(shù)前均未曾接受任何相關(guān)治療，針吸細(xì)胞學(xué)診斷或術(shù)中冰凍快速病理診斷為PTC，術(shù)中證實(shí)未累及氣管、食管。研究方案通過醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者及家屬均簽署知情同意書。

1.3 剔除標(biāo)準(zhǔn)

①直徑≤1.0 cm的微小乳頭狀癌；②術(shù)前曾接受甲狀腺制劑、131I或中藥治療的患者；③合并甲狀腺炎；④伴發(fā)其他部位腫瘤；⑤伴發(fā)其他部位明顯炎性疾病。

1.4 免疫組化染色方法

手術(shù)標(biāo)本均行常規(guī)HE染色，取相鄰切片行免疫組化染色。即用型鼠抗人nm23H1和VEGF單克隆抗體、EliVision試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規(guī)制備4 μm厚連續(xù)切片，65 ℃烘烤備用。微波-枸櫞酸鈉緩沖液修復(fù)抗原，采用EliVisionTMplus兩步法，按試劑盒說明書操作。以公司提供的陽性染色切片作陽性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.5 判定標(biāo)準(zhǔn)

陽性顆粒呈棕黃色或棕褐色，由2位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行雙盲獨(dú)立觀察，按染色深淺強(qiáng)度評(píng)分：無染色0分，棕黃色1分，棕褐色2分；按染色癌細(xì)胞所占比例評(píng)分：≤30%1分，31%～70%2分，≥71%3分。每例按兩項(xiàng)評(píng)分之和定性：0分陰性(-)，1～3分弱陽性(+)，4～6分強(qiáng)陽性(++)。弱陽性和強(qiáng)陽性均計(jì)為陽性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)資料應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 nm23H1和VEGF在癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

nm23H1陽性物質(zhì)主要定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，少量可見于細(xì)胞膜(圖1)，癌組織中nm23H1總體陽性率為57.3%(94/164)，其中強(qiáng)陽性率為26.8%(44/164)，弱陽性率為39.5%(50/164)，陰性率為42.7%(70/164)；癌旁甲狀腺組織中nm23H1總體陽性率為93.3%(28/30)，其中強(qiáng)陽性率為83.3%(25/30)，弱陽性率為10.0%(3/30)，陰性率為6.7%(2/30)。癌組織nm23H1總體陽性率(χ2=14.095)、強(qiáng)陽性率(χ2=35.332)和弱陽性率(χ2=5.361)與癌旁甲狀腺組織比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。VEGF陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜(圖2)，癌組織中VEGF總體陽性率為59.8%(98/164)，其中強(qiáng)陽性率為33.5%(55/164)，弱陽性率為26.2%(43/164)，陰性率為40.2%(66/164)；癌旁甲狀腺組織中VEGF總體陽性率為13.3%(4/30)，其中強(qiáng)陽性率為3.3%(1/30)，弱陽性率為10.0%(3/30)，陰性率為86.7%(26/30)。癌組織VEGF總體陽性率(χ2=21.920)、強(qiáng)陽性率(χ2=11.267)與癌旁甲狀腺組織比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而弱陽性率(χ2=3.688)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

圖1 甲狀腺乳頭狀癌組織nm23H1免疫組化陽性染色(EliVisionTMplus×100)

圖2 甲狀腺乳頭狀癌組織VEGF免疫組化陽性染色(EliVisionTMplus×100)

表1 nm23H1和VEGF在甲狀腺乳頭狀癌組織及癌旁組織中的表達(dá) n(%)

2.2 nm23H1和VEGF表達(dá)與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

有浸潤(rùn)與無浸潤(rùn)PTC患者比較，nm23H1陽性率分別為38.4%(38/99)和86.2%(56/65)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=36.600，P<0.05)；VEGF陽性率分別為69.7%(69/99)和44.6%(29/65)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.264，P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與無轉(zhuǎn)移PTC患者比較，nm23H1陽性率分別為33.3%(31/93)和88.7%(63/71)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=50.508，P<0.05)；VEGF陽性率分別為69.9%(65/93)和46.5%(33/71)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.178，P<0.05)。

2.3 nm23H1和VEGF表達(dá)的相互關(guān)系

nm23H1陽性的94例PTC患者中VEGF陽性35例(37.2%)，nm23H1陰性的70例PTC患者中VEGF陽性63例(90.0%)；nm23H1陽性表達(dá)者VEGF陽性表達(dá)率顯著低于nm23H1陰性表達(dá)者(χ2=46.452，P<0.05)。癌組織中nm23H1和VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.47)。

3 討 論

PTC組織大多分化較好，病程較長(zhǎng)，但有不少患者癌組織仍具有較高的局部浸潤(rùn)性和區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率[1]。各種新型超聲技術(shù)的應(yīng)用雖然提高了PTC診斷率，但其敏感性仍不夠高[2-4]。近年已發(fā)現(xiàn)不少與PTC發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物，其應(yīng)用價(jià)值在臨床診療中不斷得到肯定[5-8]。nm23H1編碼的蛋白含有亮氨酸重復(fù)序列、α螺旋和堿性結(jié)構(gòu)域，具有典型核苷二磷酸激酶(NDPK-A)活性，能催化多種反應(yīng)，與癌轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，通過參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、微管蛋白聚合與解體、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)以及細(xì)胞黏附等復(fù)雜的生物學(xué)功能，維持細(xì)胞正常分裂狀態(tài)，抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。其低表達(dá)可引起系列編碼產(chǎn)物減少，導(dǎo)致多種信號(hào)傳導(dǎo)異常，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。在胃癌、結(jié)直腸癌和肺癌等多種惡性腫瘤中的低表達(dá)與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示預(yù)后不良[9-10]。研究表明，nm23H1表達(dá)與甲狀腺濾泡狀癌的發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性[11]，但與PTC惡性發(fā)展的相關(guān)性尚存爭(zhēng)議[12-14]，有作者認(rèn)為其敏感性高，特異性低，不能單獨(dú)應(yīng)用nm23H1 鑒別甲狀腺疾病的良惡性[15]。VEGF是一種高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，其結(jié)構(gòu)為鏈內(nèi)及鏈間二硫鍵交聯(lián)形成的同型二聚體糖蛋白，與血小板源性生長(zhǎng)因子有一定的同源性，可增加微血管通透性，促進(jìn)血漿纖維蛋白外滲，為血管形成過程中多種細(xì)胞遷移提供一個(gè)纖維網(wǎng)絡(luò)，通過與血管內(nèi)皮上2個(gè)特殊受體Flt和Flt/KDR作用，刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖，產(chǎn)生纖維蛋白溶酶原激活物，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞移動(dòng)，利于腫瘤細(xì)胞脫落進(jìn)入血管，向結(jié)締組織基質(zhì)擴(kuò)散，為腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件[16-17]。VEGF陽性表達(dá)率與PTC發(fā)生、發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[18-20]，中國人較韓國人、日本人等具有更密切的相關(guān)性[21]，術(shù)后隨訪過程中血清VEGF高表達(dá)提示腫瘤復(fù)發(fā)[22-23]。

本組研究資料表明，nm23H1在PTC組織中的總體陽性表達(dá)率、強(qiáng)陽性表達(dá)率和弱陽性表達(dá)率均顯著低于癌旁甲狀腺組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明nm23H1在癌旁甲狀腺組織中多呈陽性表達(dá)，而在PTC中的表達(dá)陽性率較低；VEGF在PTC組織中的總體陽性表達(dá)率和強(qiáng)陽性表達(dá)率均顯著高于癌旁甲狀腺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而弱陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明VEGF在PTC中的表達(dá)大多數(shù)呈強(qiáng)陽性，在癌旁甲狀腺組織中表達(dá)大多數(shù)為陰性、弱陽性。nm23H1和VEGF在癌組織和癌旁甲狀腺組織的不同表達(dá)，表明nm23H1基因低表達(dá)和VEGF高表達(dá)與PTC發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性，有助于甲狀腺良惡性病變的鑒別診斷。在有浸潤(rùn)和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，nm23H1陽性表達(dá)率均顯著低于無浸潤(rùn)和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，而VEGF陽性表達(dá)率均顯著高于無浸潤(rùn)和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，表明兩者在PTC的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過程中可能發(fā)揮了一定作用。我們還觀察到，nm23H1和VEGF在PTC組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與文獻(xiàn)[24-25]報(bào)道基本一致，提示它們?cè)赑TC惡性發(fā)展過程中可能具有協(xié)同調(diào)節(jié)作用。聯(lián)合檢測(cè)nm23H1和VEGF有助于了解PTC臨床病理進(jìn)程，提高對(duì)其生物學(xué)特性尤其是浸潤(rùn)能力和轉(zhuǎn)移潛能的判斷水平。深入研究nm23H1和VEGF在PTC中的作用機(jī)制，對(duì)評(píng)估患者預(yù)后、隨訪中及時(shí)發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)、指導(dǎo)臨床施行再次手術(shù)、針對(duì)性開展靶向治療等具有一定臨床意義。

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[責(zé)任編輯：李薊龍 英文編輯：劉彥哲]

Expressions and Significance of nm23H1 and VEGF in Papillary Thyroid Carcinoma

LI Yong-qing1,SHANG Pei-zhong1,REN Ai-ling1,LIU Yong1,GU Hua-ping2,LI Wei2

(1.Department of General Surgery,PLA No.251Hospital,Zhangjiakou,Hebei 075000,China；2.Department of Pathology,PLA No.251Hospital,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Objective To investigate the expressions of nm23H1 and VEGF in papillary thyroid carcinoma(PTC)and their clinical significance.Methods The expressions of nm23H1 and VEGF in 164 cases of PTC and 30 cases of para-tumorous tissue were studied by EliVision plus two-step immunohistochemical method.Results The positive rate of nm23H1(57.3%)in PTC was significantly lower than that in para-tumorous tissue(93.3%)(P<0.05).The positive rate of nm23H1 in the patients with tumor invasion and lymphatic metastasis was significantly lower than that without tumor invasion and lymphatic metastasis(P<0.05).The positive rate of VEGF(59.8%)in PTC was significantly higher than that in para-tumorous tissue(13.3%)(P<0.05)．The positive rate of VEGF in the patients with tumor invasion and lymphatic metastasis was significantly higher than that without tumor invasion and lymphatic metastasis(P<0.05).There was a negative correlation between nm23H1 and VEGF expression(r=-0.47).Conclusion Expressions of nm23H1 and VEGF might be correlated with the invasive and metastasic potential in PTC.nm23H1 and VEGF could be considered as prognostic indicators for PTC.

thyroid neoplasm；nm23H1；VEGF；invasion；metastasis

李永慶(1963-)，男，內(nèi)蒙古錫林浩特人，副主任醫(yī)師，主要研究方向：普通外科。

尚培中(1964-)，男，河南商丘人，主任醫(yī)師，主要研究方向：普通外科。

R 736.1

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2016.10.001

來稿日期：2016-08-10