范慧潔，張新麗

(河南省周口市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 466000)

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·臨床研究·

IFN-γ釋放實(shí)驗(yàn)和結(jié)核抗體檢測(cè)在肺結(jié)核診斷中的臨床價(jià)值

范慧潔，張新麗△

(河南省周口市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 466000)

目的 探討IFN-γ釋放實(shí)驗(yàn)(IGRA)和結(jié)核抗體檢測(cè)在肺結(jié)核診斷中的臨床價(jià)值。 方法 選取2015年4月至2016年3月該院確診的158例肺結(jié)核患者(肺結(jié)核組)及162例其他呼吸道疾病患者(對(duì)照組)為研究對(duì)象，進(jìn)行IGRA實(shí)驗(yàn)和結(jié)核抗體檢測(cè)，比較2種方法檢測(cè)2組患者的陽(yáng)性率結(jié)果。結(jié)果 IGRA實(shí)驗(yàn)和結(jié)核抗體檢測(cè)在肺結(jié)核組的陽(yáng)性率分別為80.38%(127/158)和50.63%(80/158)，均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為6.008和132.662,P<0.05)。IGRA實(shí)驗(yàn)與結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果的符合率為44.94%，IGRA檢測(cè)陽(yáng)性率高于結(jié)核抗體檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.516,P<0.05)。IGRA實(shí)驗(yàn)的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、準(zhǔn)確率分別為80.38%、83.95%、83.01%、81.44%、82.19%，結(jié)核抗體檢測(cè)分別為50.63%、 62.96%、57.14%、56.67%和56.88%。 結(jié)論 2種檢測(cè)方法為肺結(jié)核診斷提供有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，IGRA實(shí)驗(yàn)具有更高的靈敏度和特異度，但費(fèi)用較高，尚不能大規(guī)模應(yīng)用于臨床。

IFN-γ釋放實(shí)驗(yàn)； 結(jié)核抗體； 肺結(jié)核

結(jié)核病由結(jié)核分枝桿菌引起的傳染性疾病，是影響公共健康的重大問(wèn)題[1]。2014年全球新增結(jié)核感染病例960萬(wàn)，病死率達(dá)150萬(wàn)[2]。肺結(jié)核作為一種最常見(jiàn)的結(jié)核病，早期診斷和治療仍存在困難?，F(xiàn)應(yīng)用結(jié)核抗體檢測(cè)和IFN-γ釋放實(shí)驗(yàn)(IGRA)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比分析，評(píng)估其在肺結(jié)核診斷中的臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年4月至2016年3月該院確診的158例肺結(jié)核患者為研究對(duì)象(肺結(jié)核組)，男89例，女69例，年齡17～87歲，平均年齡(57.34±16.56)歲。對(duì)照組為其他呼吸道疾病患者162例，男72例，女50例，年齡15～85歲，平均年齡(52.94±15.64)歲，包括COPD、肺氣腫、慢性支氣管炎等。肺結(jié)核診斷依據(jù)臨床癥狀、體征、影像學(xué)、細(xì)菌學(xué)、血清學(xué)及抗結(jié)核療效并參照《內(nèi)科學(xué)(第8版)》診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.2 儀器及試劑 熱電酶標(biāo)儀MK3購(gòu)自南京貝登生物科技有限公司；結(jié)核抗體試劑有3種，即TB-CHECK試劑盒購(gòu)自蘭州雅華生物技術(shù)有限公司，TB-DOT試劑盒購(gòu)自北京貝爾生物工程有限公司，TB-Ab試劑盒購(gòu)自濰坊市生物技術(shù)有限公司；IGRA試劑盒購(gòu)自北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)股份有限公司。

1.3 結(jié)核抗體檢測(cè) 采集患者血清，TB-CHECK和TB-DOT 2種檢測(cè)方法均為膠體金法，肉眼判斷陰、陽(yáng)性。TB-Ab采用ELISA法，使用酶標(biāo)儀測(cè)出OD值，根據(jù)說(shuō)明書(shū)結(jié)果判斷陰、陽(yáng)性。3種抗體任意一種或多種為陽(yáng)性時(shí)均為結(jié)核抗體檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性。

1.4 IGRA實(shí)驗(yàn) 采集人體肝素抗凝靜脈血4 mL以上，2 h內(nèi)將全血標(biāo)本輕柔顛倒混勻3～5次后依次分裝到“N”、“T”、“P”3種培養(yǎng)管中，1毫升/管。將培養(yǎng)管輕柔顛倒混勻后放入37 ℃水浴箱中(22±2)h，取血漿按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行ELISA檢測(cè)。每例患者3種培養(yǎng)血漿各1孔，校準(zhǔn)品各雙孔，空白對(duì)照1孔，分別在相應(yīng)孔中加入樣品稀釋液20 μL(空白對(duì)照孔除外)，然后分別在相應(yīng)孔中加入待測(cè)標(biāo)本或校準(zhǔn)品50 μL(空白對(duì)照孔除外)，輕輕震蕩混勻，封板至37 ℃溫育60 min。每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL(空白對(duì)照孔除外)，輕輕震蕩混勻，封板至37 ℃溫育60 min。洗板機(jī)洗板5遍，最后1次甩干，每孔加入顯色劑A、B各50 μL，輕輕振蕩混勻，37 ℃避光顯色15 min。每孔加終止液50 μL，輕輕振蕩混勻，10 min內(nèi)使用酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450 nm處，用空白孔調(diào)零后檢測(cè)各孔OD值，計(jì)算判斷陰陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，組間比較使用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2種方法檢測(cè)2組患者的結(jié)果比較 結(jié)核抗體檢測(cè)和IGRA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺結(jié)核組的陽(yáng)性率分別為50.63%(80/158)和80.38%(127/158)，均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為6.008和132.662,P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 2種方法檢測(cè)2組患者的結(jié)果比較[n(%)]

2.2 2種檢測(cè)方法的結(jié)果比較 IGRA實(shí)驗(yàn)與結(jié)核抗體檢測(cè)肺結(jié)核組患者的結(jié)果符合率為44.94%，IGRA實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性率高于結(jié)核抗體檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.516,P<0.05)，IGRA實(shí)驗(yàn)和結(jié)核抗體檢測(cè)的靈敏度分別為80.38%和50.63%，特異度為83.95%和62.96%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為83.01%和57.14%，陰性預(yù)測(cè)值為81.44%和56.67%，準(zhǔn)確率為82.19%和56.88%。見(jiàn)表2、3。

表2 2種檢測(cè)方法的結(jié)果比較(n)

注：χ2=4.516，P=0.034。

表3 2種檢測(cè)方法的性能比較(%)

3 討 論

結(jié)核抗體主要檢測(cè)血清中結(jié)核特異分泌抗原抗體、結(jié)核特異外膜抗原抗體和結(jié)核分枝桿菌抗體免疫球蛋白G(IgG)，具有簡(jiǎn)便、快速、低成本低特點(diǎn)，是臨床常用輔助項(xiàng)目。IGRA實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)經(jīng)結(jié)核分枝桿菌特異性抗原刺激特異性效應(yīng)T細(xì)胞產(chǎn)生的γ-干擾素(IFN-γ)水平，從而判斷是否具有針對(duì)結(jié)核分枝桿菌的特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)，具有較高的靈敏度和特異度[3-5]。

機(jī)體受結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)，針對(duì)其不同的抗原可產(chǎn)生特異性的免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)和IgG抗體，而IgG是構(gòu)成結(jié)核抗體的主要部分。Feng等[6]研究報(bào)道，活動(dòng)性肺結(jié)核患者血清IgG陽(yáng)性率在46.2%～65.7%之間，與本研究結(jié)果大致相同。血清學(xué)結(jié)核抗體檢測(cè)存在假陰性和假陽(yáng)性，有以下幾種情況：(1)新感染患者還未在體內(nèi)產(chǎn)生抗體或抗體水平較低，未達(dá)到檢測(cè)限，導(dǎo)致假陰性。(2)免疫缺陷患者產(chǎn)生抗體的能力較低，也會(huì)造成假陰性。(3)接種疫苗或曾經(jīng)感染結(jié)核但已痊愈的患者體內(nèi)仍有結(jié)核抗體，檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，但不能認(rèn)為存在結(jié)核現(xiàn)癥感染。(4)結(jié)核分枝桿菌與其他細(xì)菌存在交叉抗原決定簇，也可導(dǎo)致假陽(yáng)性。本研究有2種結(jié)核抗體檢測(cè)采用膠體金法，人工操作和結(jié)果判讀存在某種程度的人為誤差，提示結(jié)核抗體檢測(cè)存在一定的局限性，必須與其他檢測(cè)結(jié)合。

IGRA實(shí)驗(yàn)的靈敏度和特異度均高于結(jié)核抗體檢測(cè)，且不受卡介苗接種及機(jī)體免疫狀況的影響，可用于新肺結(jié)核感染和隱匿性肺結(jié)核感染的輔助診斷[7]。IGRA實(shí)驗(yàn)為非創(chuàng)傷性體外實(shí)驗(yàn)，方便、快速，最低檢出量為2 pg/mL，并針對(duì)特異性的結(jié)核分枝桿菌抗原，具有較高的靈敏度和特異度。張宏宇等[8]研究報(bào)道，T-SPOT TB實(shí)驗(yàn)在肺結(jié)核診斷方面的靈敏度和特異度均高于PPD、涂片鏡檢法、痰培養(yǎng)法和結(jié)核抗體檢測(cè)，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。本研究使用的是T-SPOT TB實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化，與美國(guó)FDA認(rèn)證的同類(lèi)試劑QFT具有較高的符合率，可用于結(jié)核感染的輔助診斷，但其結(jié)果不能代替痰涂片、培養(yǎng)或影像學(xué)等較為經(jīng)典的結(jié)核分枝桿菌感染的診斷方法，也不作為臨床診斷的唯一證據(jù)。

綜上所述，IGRA實(shí)驗(yàn)優(yōu)于結(jié)核抗體檢測(cè)，但費(fèi)用昂貴，并不適合臨床結(jié)核分枝桿菌感染患者的篩查，所以結(jié)核抗體檢測(cè)仍需繼續(xù)開(kāi)展。2種方法聯(lián)合檢測(cè)可減少誤診和漏診，更好地服務(wù)于臨床。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.058

A

1673-4130(2016)20-2931-03

2016-02-21

2016-04-15)

△通訊作者，E-mail:zhangxinli198@163.com。