喬 姝， 高麗君， 寶勿仁必力格， 高雅瓊， 韓麗紅， 秦佩媛， 蘇 燕， 秦文斌

(1.包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院輸血科,內(nèi)蒙古包頭 014010；2.包頭醫(yī)學(xué)院血紅蛋白研究室； 3.連云港市立醫(yī)院檢驗科)

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ABO血型的雙向全程釋放電泳圖譜*

喬 姝1， 高麗君2， 寶勿仁必力格2， 高雅瓊2， 韓麗紅2， 秦佩媛3， 蘇 燕2， 秦文斌2

(1.包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院輸血科,內(nèi)蒙古包頭 014010；2.包頭醫(yī)學(xué)院血紅蛋白研究室； 3.連云港市立醫(yī)院檢驗科)

目的:創(chuàng)建雙向全程電泳圖譜，比較研究A型、B型、AB型、O型4種血型的差異。方法：取10支試管，第1管只加全血20 μL，不加蒸餾水，第2管加全血18 μL，蒸餾水2 μL，第3管加全血16 μL，蒸餾水4 μL，以此類推，第10管加全血2 μL，蒸餾水18 μL。用這10種標(biāo)本做雙向十層電泳，第一向時加入前進和后退兩種再釋放，第二向為普泳。麗春紅-聯(lián)苯胺復(fù)染后觀察結(jié)果。結(jié)果：從10個前進區(qū)帶和10個后退區(qū)帶可以看出A型、B型、AB型、O型4種血型的電泳圖譜互不相同。結(jié)論:各種血型的血紅蛋白釋放結(jié)果不同，說明紅細(xì)胞表面的A抗原和B抗原對紅細(xì)胞釋放血紅蛋白有影響。

ABO血型；血紅蛋白釋放；雙向全程電泳圖譜

1900年Landsteiner發(fā)現(xiàn)血型[1]，第二年他指出將不同人的血清與紅細(xì)胞混合可以區(qū)分A、B、O三組[2]，von Decastello和Sturli[3]增加第四組(AB)。A組個體血清能夠凝集B組人的紅細(xì)胞，但不凝集同組中其他人的紅細(xì)胞；B組人的血清凝集A組人的紅細(xì)胞，但不凝集同組中其他人的紅細(xì)胞；O組的紅細(xì)胞不能被任何人的血清所凝集，但其血清卻具有雙重凝集能力，既能凝集A組又能凝集B組的細(xì)胞。AB組血清中沒有凝集素，但細(xì)胞可以被其它所有血型的血清凝集。結(jié)構(gòu)分析表明A和B抗原是糖蛋白和糖脂的糖類決定簇，A型末端糖基是N-乙酰氨基半乳糖，B型末端糖基是半乳糖[4]。

如上所述，ABO血型的研究由來已久，但無人從紅細(xì)胞釋放血紅蛋白角度進行研究。本文從雙向全程釋放電泳方面來研討ABO各型之間的差異，結(jié)果見正文。

1 材料及方法

1.1 材料 ABO血型標(biāo)本來自包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科血庫。

1.2 方法 參考文獻[5]，具體如下。

1.2.1 標(biāo)本處理 取10支試管，第1管只加全血，不加蒸餾水，第2～9管里加蒸餾水由少到多、加全血由多到少，構(gòu)成一個連續(xù)的、完整的等低滲條件，具體操作參見表1。

表1 全血的等滲、低滲全程處理

注：第1管為等滲，原來的全血，沒有蒸餾水。第2～10管為低滲。水量逐漸增加，全血相應(yīng)減少，第10管中全血占10 %，蒸餾水占90 %。

1.2.2 雙向電泳 用以上一系列標(biāo)本直接做電泳。第一向電泳為先普泳，再來前進再釋放和后退再釋放。普泳即電勢梯度6 V/cm，泳2 h 15 min，停電15 min。前進再釋放即電勢梯度6 V/cm，再通電30 min。后退再釋放即電勢梯度6 V/cm，倒極再通電15 min。第二向電泳為普泳即電勢梯度6 V/cm，倒極轉(zhuǎn)向再泳1 h 15 min。

1.2.3 染色 先染麗春紅,將凝膠板直接放入麗春紅染液中過夜，取出、照相，再晾干或烤干。再染聯(lián)苯胺,將凝膠板直接放入聯(lián)苯胺染液中，加3 %過氧化氫直到血紅蛋白變成藍(lán)黑顏色，轉(zhuǎn)入漂洗液(5 %醋酸、1 %甘油)換洗2次，每次5 min，取出晾干。

1.2.4 結(jié)果保存 晾干凝膠與玻板結(jié)合，可長期保存。

2 結(jié)果

2.1 A型血電泳圖 由圖1可以看出，前進帶只見于7～10泳道(←所指處)，后退帶也如此，此時，前進帶較強，后退帶較弱。

2.3 AB型血電泳圖 由圖3可以看出，前進帶1～10泳道都有，但前后泳道較強，中間較弱，后退帶也如此，只是，此時前進帶與后退帶強度相近。

2.4 O型血電泳圖 由圖4可以看出，這個進退帶都比較強，前進帶幾乎均勻增強，后退帶先弱后強，下邊后幾個退帶的強度反而超過了對應(yīng)前進帶。

ABO血型取決于紅細(xì)胞表面的A抗原和B抗原。A型血的特點是紅細(xì)胞有A抗原，沒有B抗原，血清含抗B抗體,沒有抗A抗體；B型血的特點是紅細(xì)胞有B抗原，沒有A抗原，血清含抗A抗體,沒有抗B抗體；AB型血是紅細(xì)胞同時有A、B兩種抗原，血清不含抗B和抗A抗體；O型血紅細(xì)胞沒有A、B兩種抗原，血清含有抗B和抗A抗體。紅細(xì)胞表面的抗原與紅細(xì)胞內(nèi)部成分有什么聯(lián)系，例如與紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白有何聯(lián)系，它們對紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白的電泳釋放有何影響，不同血型效果是否有差異。

全程釋放電泳圖譜中的進退帶來源于紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白的電泳釋放，而且是一系列等滲、低滲條件下的電泳釋放，可以全面反映紅細(xì)胞膜對血紅蛋白釋放的影響?，F(xiàn)在看來，紅細(xì)胞表面的A抗原和B抗原對紅細(xì)胞釋放血紅蛋白有影響，而且不同血型影響各異，說明不同抗原對紅細(xì)胞釋放血紅蛋白的影響是不一樣的，涉及到前進、后退帶。

A抗原和B抗原是一種糖脂，其中寡糖不同決定抗原的特異性，它們都與紅細(xì)胞膜骨架的帶4.1蛋白相連?，F(xiàn)在看來可能是紅細(xì)胞表面的這些糖脂影響到血紅蛋白的釋放，帶4.1蛋白可能起到引領(lǐng)作用。這種推測是否正確，有待進一步深入研究。

[1] Landsteiner K.Zur Kenntnis der antifermentativen lytishen und agglutinietenden Wirkungen des Blutserums und der Lymphe[J].Zbl Bakt,1900,27：357-366.

[2] Landsteiner K.Uber Agglutinationserscheinnungen normalen menschlichen Blutes [J].Klin Wschr,1901,14：1132-1134.

[3] von Decastello A, Sturli A.Ueber die isoagglutinine im Serum gesunder und kranker menchen[J].Mfinch Med Wschr,1902,49:1090-1095.

[4] Watkins WM.Biochemistry and genetics of the ABO,H,Lewis and P blood group systems[J].Advances in Human Gentics,1980,10：1-136.

[5] 秦文斌.活體紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白的電泳釋放[J].中國科學(xué)生命科學(xué)，2011，41(8)：597-607.

Two-way full release electrophoresis map of ABO blood type

QIAO Shu, GAO Lijun, BAO Wurenbilige,GAO Yaqiong，HAN Lihong,QIN Peiyuan,SU Yan,QIN Wenbin

(1.DepartmentofBloodTransfusion,TheFirstAffiliatedHospitaltoBaotouMedicalCollege，Baotou014010，China; 2.ResearchLaboratoryofHemoglobininBaotouMedicalCollege; 3.DepartmentofLaboratoryMedicine,LianYungangMunicipalHospital)

Objective:To compare and study the difference in blood type A, B, AB, O, after creating a two-way full electrophoresis map.Method：10 test tubes were used. Only 20 ul whole blood was added to the first tube, without distilled water；18 ul whole blood and 2 ul distilled water were added to the second tube；16 ul whole blood and 4 ul distilled water were to the third tube；by analogy, 2 ul whole blood and 18 ul distilled water were added to the tenth tube. The 10 kinds of specimen were adopted for two-way ten-layer electrophoresis. Forward and backward re-release was added to the first phase, and the second phase was ordinary electrophoresis. Observation was conducted after ponceau-benzidine redyeing.Results:From 10 forward zone and 10 back zone the electrophoresis map for blood type A, B, AB, O was not the same between each other.Conclusion:The results of hemoglobin release for all kinds of blood type are different, reflecting that A and B antigens on the surface of the red blood cells have an effect on hemoglobin release from red blood cell.

ABO blood type; Hemoglobin release; Two-way full electrophoresis map

內(nèi)蒙古自治區(qū)教育廳重點科研項目(NJ09157)

秦文斌

2015-10-16)