李玲鐘笑梅施海姍候樂羅新妮王艷華胡國艷陳辛茹張蔚茹陳賁彭琪寧玉萍

阿爾茨海默病與輕度認知障礙患者血漿sCD40及sCD40L濃度研究☆

李玲*鐘笑梅△施海姍△候樂△羅新妮△王艷華△胡國艷△陳辛茹△張蔚茹△陳賁△彭琪△寧玉萍△*

目的 探索阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）及遺忘型輕度認知障礙（amenstic mild cognitive impairment，aMCI）患者血漿可溶性CD40（soluble CD40，sCD40）和可溶性CD40配體（soluble CD40 ligand，sCD40L）濃度變化特點及其臨床意義。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測20例AD患者、35例aMCI患者和32名正常對照者血漿sCD40和sCD40L濃度水平，簡易精神狀態(tài)檢查表（mini-mental state examination，MMSE）評估患者認知功能。 結果 AD組、aMCI組和對照組血漿sCD40濃度中位數(shù)（上下四分位數(shù)）分別為［123.3（97.4，149.5）pg/mL］、［102.9（63.6，124.0）pg/mL］和［70.66（51.0，90.8）pg/mL］，3組間sCD40濃度差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。AD組、aMCI組和對照組血漿sCD40L濃度中位數(shù)（上下四分位數(shù)）分別為［537.0（316.0，1134.0）pg/mL］、［316.0（190.0，546.0）pg/mL］和［167.0（107.5，478.0）pg/mL］，3組間sCD40L濃度差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。aMCI組血漿sCD40L濃度與MMSE得分呈負相關（r=-0.74，P＜0.01）。 結論 sCD40和sCD40L濃度水平在AD和aMCI患者血漿中異常增高，因此sCD40和sCD40L可作為AD的早期檢測指標，并提示CD40-CD40L信號可能參與AD的發(fā)生發(fā)展。

阿爾茨海默病 遺忘型輕度認知障礙 可溶性CD40可溶性CD40L

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）為最常見的神經系統(tǒng)退行性疾病之一，給患者、家庭及社會帶來非常沉重的負擔。輕度認知障礙（mild cognitive impairment，MCI）是介于正常老化和癡呆的之間的過渡狀態(tài)［1］，作為MCI的主要分型，遺忘型MCI（amnestic MCI，aMCI）以輕度記憶損害為主要臨床表現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn)每年約有12%的aMCI患者轉化為AD，比普通人群中癡呆發(fā)生率約高10倍［2］，是AD早期干預的最佳人群。目前越來越多研究顯示神經免疫炎癥可能是AD的發(fā)病機制之一。可溶性CD40（soluble CD40，sCD40）與可溶性CD40配體（soluble CD40 ligand，sCD40L）為調節(jié)免疫反應的信號分子。國內尚無同時在AD、aMCI患者中進行sCD40-sCD40L濃度檢測的臨床研究，而國外此類臨床研究也較少，且結果不盡一致，有研究提示AD患者血漿sCD40和sCD40L濃度較正常對照組高［3-5］，亦有研究發(fā)現(xiàn)AD患者血漿sCD40濃度較MCI患者明顯升高，而sCD40L則無明顯變化［6］。因此本研究采用ELISA法檢測AD、aMCI患者血漿sCD40、sCD40L濃度，探討其變化特點，為早期干預AD進一步提供臨床依據(jù)。

1　對象與方法

1.1研究對象 AD組來自2011年9月至2014年12月廣州市腦科醫(yī)院記憶障礙門診、神經內科門診及住院的AD患者。納入標準：①符合美國神經病學、語言障礙和中風研究所及阿爾茨海默病與相關障礙協(xié)會（NINCDS-ADRDA）制定的“很可能AD”診斷標準［7］；②簡易精神狀態(tài)檢查表（mini mental state examination，MMSE）得分文盲者＜17分，小學學歷者＜20分，初中及以上學歷者＜24分；③缺血指數(shù)量表（Hachinski inchemic score，HIS）得分＜4分。排除標準：①病史、體格檢查、實驗室檢查及顱腦影像學檢查顯示有引起認知障礙的其他疾?。虎诓∈?、體格檢查及實驗室檢查顯示有與免疫相關的疾??；③曾經使用精神科藥物（如抗精神病藥、抗抑郁劑等）或免疫抑制劑治療；④檢查前2周有明確感染史。

aMCI組來自廣州市社區(qū)體檢的中老年人。納入標準為根據(jù)Petersen等［8］1999年確立的診斷標準診斷為aMCI：①以記憶下降為主訴，最好有知情者證實，癥狀持續(xù)3個月以上；②有記憶減退的客觀證據(jù)，聽覺詞語學習測驗（auditory verbal learning，AVLT）延遲回憶得分≤“正常老人得分的均數(shù)-1.5個標準差”，本研究中為12個詞語學習4次后間隔30 min，回憶的詞語數(shù)（即長延遲回憶得分）≤4分；③總體認知功能相對正常，MMSE得分文盲者＞17分，小學學歷者＞20分，初中及以上學歷者＞24分，總體衰退量表（global deterioration scale，GDS）評分2～3級；④日?；顒幽芰o顯著缺損；⑤不符合癡呆的診斷標準。排除標準同AD組。

對照組為來自廣州市社區(qū)體檢的中老年人。納入標準：①性別、年齡、受教育程度與AD、aMCI患者相匹配；②認知功能正常，無記憶力減退的主訴，量表初篩和臨床評估不符合上述AD、aMCI診斷標準；③無癡呆家族史及中樞神經系統(tǒng)疾病史。排除標準同AD組。

共納入87名研究對象，其中男性22名，女性65名，年齡54～76歲，平均（67.3±4.5）歲。本研究獲廣州市腦科醫(yī)院倫理委員會批準通過，所有受試者或其家屬在入組前簽署知情同意書。

1.2研究方法

1.2.1量表評定 由1名經過訓練的專業(yè)人員對入組對象進行MMSE、AVLT測評，以評估被試的認知功能。

1.2.2血標本采集與保存 清晨采集受試者空腹靜脈血2 mL于EDTA抗凝管，在4℃用3000 r/min速度離心15 min，使用聚乙烯管分裝血漿，儲存于-80℃冰箱，避免反復凍融。

1.2.3檢測 sCD40和 sCD40L濃度sCD40和sCD40L濃度采用商品化ELISA試劑盒（eBioscience）檢測，檢測步驟嚴格按照說明書進行。使用Curve Expert 1.4軟件繪制標準曲線，根據(jù)擬合公式計算sCD40和sCD40L相應濃度水平。

1.3統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學分析。MMSE得分、總膽固醇水平、糖化血紅蛋白水平呈正態(tài)分布，組間比較采用單因素方差分析，Bonferrioni法進行兩兩比較；sCD40及sCD40L濃度、收縮壓及舒張壓水平為非正態(tài)分布，用中位數(shù)（下四分位數(shù)，上四分位數(shù)）描述，組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗，Bonferrioni法進行兩兩比較。AD組、aMCI組MMSE評分與血漿sCD40和sCD40L濃度的相關程度采用Spearman相關分析。檢驗水準α為0.05，雙側檢驗。

2　結果

2.1社會人口學與臨床資料 AD組納入20例患者，aMCI組35例患者，對照組32名對照。3組間年齡（F=6.33，P=0.06）、性別（χ2=1.73，P=0.42）、受教育年限（F=4.75，P=0.08）、糖化血紅蛋白（F= 6.25，P=0.07）、總膽固醇（F=2.54，P=0.24）、收縮壓（χ2=5.64，P=0.08）、舒張壓（χ2=2.37，P=0.44）血壓水平差異均無統(tǒng)計學意義。3組間MMSE評分差異有統(tǒng)計學意義（F=18.79，P＜0.01），AD組MMSE評分低于aMCI組（P＜0.01）和對照組（P＜0.01），aMCI組MMSE得分低于對照組（P＜0.01）。見表1。

表1　AD組、aMCI組和對照組的社會人口學與臨床資料［（x±s）或M（QL，QU）］

表2　AD組、aMCI組和對照組血漿sCD40、sCD40L濃度［M（QL，QU）］

2.2血漿sCD40、sCD40L濃度 3組間血漿sCD40濃度差異有統(tǒng)計學意義（χ2=8.45，P=0.01），AD組高于aMCI組（P＜0.01）和對照組（P＜0.01），aMCI組高于對照組（P＜0.01）。3組間血漿sCD40L濃度差異有統(tǒng)計學意義（χ2=7.15，P=0.03），AD組高于aMCI組（P＜0.01）和對照組（P＜0.01），aMCI組高于對照組（P＜0.01）。見表2。

2.3血漿sCD40、sCD40L濃度與MMSE得分相關分析 AD組血漿sCD40濃度（r=-0.35，P=0.13）、sCD40L濃度（r=-0.11，P=0.52）與MMSE評分相關性無統(tǒng)計學意義。aMCI組血漿sCD40濃度與MMSE評分無統(tǒng)計學相關性（r=-0.25，P=0.30），血漿sCD40L濃度與MMSE評分呈負相關（r=-0.74，P＜0.01）。

3　討論

AD的主要病理特征是腦內Aβ淀粉樣蛋白沉積，神經元纖維纏結和神經元丟失。MCGEER等［9］首次提出AD的神經退行性病變可能是腦內免疫和炎癥反應過度激活所致。RAPPTER等［10］報道免疫趨化因子通過介導細胞間通訊，參與AD炎癥反應過程。

CD40表達于內皮細胞、小膠質細胞等。CD40L主要表達于星形膠質細胞、CD4+T細胞及血小板。sCD40L是由膜型CD40L水解而成。sCD40具有與CD40L結合的生物學活性，CD40、CD40L均是腫瘤壞死因子受體超家族成員［11］。

本研究發(fā)現(xiàn)AD組和aMCI組sCD40、sCD40L濃度均高于對照組，而AD組sCD40、sCD40L濃度更高于aMCI組。該結果與國外研究結果基本一致：MOCALI等［3］發(fā)現(xiàn)AD患者外周血sCD40濃度較正常對照者明顯升高；DESIDERI等［4］研究發(fā)現(xiàn)AD患者sCD40L濃度較正常對照組明顯升高；AIT-GHEZALA等［5］研究亦證實AD患者外周血sCD40、sCD40L濃度較正常對照者高。但是，BUCHHAVE等［6］隨訪MCI患者發(fā)現(xiàn)，在最后轉化為AD的患者中sCD40濃度明顯升高，而sCD40L則無明顯變化。體外實驗發(fā)現(xiàn)CD40-CD40L相互作用可增強Aβ誘導的膠質細胞活化［12］，產生大量炎癥因子、谷氨酸鹽及活性氮族等物質，上述毒性物質一方面降低膠質細胞清除Aβ斑塊能力，另一方面促進炎性反應對神經元造成損傷，從而形成炎癥反應的惡性循環(huán)［13-14］。有研究發(fā)現(xiàn)CD40-CD40L還可上調血管內皮細胞間粘附分子 -1（intercellularcelladhesionmolecule-1， ICAM-1）表達，而ICAM-1可促進外周活化T細胞進入腦內介導炎癥反應，進一步引起神經元、突觸的損傷［15-16］。另有研究報道CD40-CD40L可通過引起氧化應激導致活性氮利用度下降，從而損害血管內皮細胞的再生能力，導致腦內微循環(huán)、腦灌注損傷［17］。因此結合本研究結果，推測sCD40-sCD40L可能參與AD的發(fā)生發(fā)展，且可能在aMCI階段已經開始產生作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)sCD40L濃度與aMCI組MMSE得分呈明顯負相關，AD組sCD40L與MMSE得分無明顯相關性；AD組、aMCI組sCD40與MMSE得分均無明顯相關性。這可能是由于CD40-CD40L通路存在時，AD患者腦內Aβ蛋白生成增多［18］，Tau蛋白電泳遷移率加快、磷酸化Tau蛋白含量生成量明顯增加［19］，神經元興奮性毒性升高，對突觸損傷加重，導致認知功能障礙加重。而亦有動物實驗發(fā)現(xiàn)給予抗CD40L抗體阻斷CD40-CD40L通路后，AD模型小鼠完成水迷宮任務較對照組好［20］，提示CD40-CD40L可能與AD認知功能的改變有關。DESIDERI等［9］發(fā)現(xiàn)AD患者血漿sCD40L濃度隨癡呆嚴重程度加重而增高，提示sCD40L可能是反映aMCI患者認知損害程度的狀態(tài)指標。而又有研究報道，轉化為AD的aMCI患者sCD40濃度與MMSE得分呈負相關，而sCD40L濃度與MMSE得分無相關性［11］。本研究相關分析結果與既往研究結果均不一致，究其原因可能與樣本量偏小、患者來源不同等有關，今后需進一步擴大樣本量，并對AD患者按癡呆嚴重程度分亞組進一步探討sCD40、sCD40L濃度與MMSE的相關性。

本研究同時對AD、aMCI患者及對照者血漿中sCD40和sCD40L濃度進行測定，發(fā)現(xiàn)AD患者血漿中sCD40和sCD40L濃度較aMCI患者明顯升高，而aMCI患者sCD40和sCD40L濃度也較對照者明顯增高。這些結果說明CD40-CD40L可能參與AD的病理機制過程，為臨床早期干預AD進一步提供了依據(jù)。但是本研究為橫斷面研究，且樣本量小，今后還需對AD、aMCI患者進行隨訪研究，以進一步證實免疫炎癥反應在AD中的潛在機制以及在臨床上的應用價值。

［1］昂秋青，肖世富，姚培芬，等.輕度認知功能障礙的神經心理學和腦血流灌注研究［J］.中國神經精神疾病雜志，2000，26（6）：330-333.

［2］DEKOSKY ST，CARRILLO MC，PHELPS C，et al.Revision of the criteria for Alzheimer's：A symposium［J］.Alzheimers Dement，2011，7（1）：e1-e12.

［3］MOCALI A，CEDROLA S，DELLA MALVA N，et al.Increased plasma levels of soluble CD40，together with the decrease of TGF beta 1，as possible differential markers of Alzheimer disease［J］.Exp Gerontol，2004，39（10）：1555-1561.

［4］DESIDERI G，CIPOLLONE F，NECOZIONE S，et al.Enhanced soluble CD40 ligand and Alzheimer's disease：evidence of a possible pathogenetic role［J］.Neurobiol Aging，2008，29（3）：348-356.

［5］AIT-GHEZALA G，ABDULLAH L，VOLMAR CH，et al.Diagnostic utility of APOE，soluble CD40，CD40L，and Abeta1-40 levels in plasma in Alzheimer's disease［J］.Cytokine，2008，44（2）：283-287.

［6］BUCHHAVE P，JANCIAUSKIENE S，ZETTERBERG H，et al. Elevated plasma levels of soluble CD40 in incipient Alzheimer' s disease［J］.Neurosci Lett，2009，450（1）：56-59.

［7］DUBOIS B，F(xiàn)ELDMAN HH，JACOVA C，et al.Research criteria for the diagnosis of Alzheimer's disease：revising the NINCDS-ADRDAcriteria［J］.LancetNeurol，2007，6（8）：734-746.

［8］PETERSEN RC，SMITH GE，WARING SC，et al.Mild cognitive impairment：clinical characterization and outcome［J］.Arch Neurol，1999，56（3）：303-308.

［9］MCGEER PL，ROGERS J，MCGEER EG.Neuroimmune mechanisms in Alzheimer disease pathogenesis［J］.Alzheimer Dis Assoc Disord，1994，8（3）：149-158.

［10］RAPPERT A，BIBER K，NOLTE C，et al.Secondary lymphoid tissue chemokine（CCL21）activates CXCR3 to trigger a Cl-current and chemotaxis in murine microglia［J］.J Immunol，2002，168（7）：3221-3226.

［11］FOY TM，ARUFFO A，BAJORATH J，et al.Immune regulation by CD40 and its ligand GP39［J］.Annu Rev Immunol，1996，14：591-617.

［12］王寶萍，李東風，胡方方，等.CD40L在阿爾茨海默病中的免疫調節(jié)作用.中國神經精神疾病雜志［J］，2012，38（5）：310-313.

［13］SUZANNE E，HICKMAN，ELIZABETH，et al.Microglial dysfunction and defective beta-amyloid clearance pathways in aging Alzheimer's disease mice［J］.J Neurosci，2008，28（33）：8354-8360.

［14］CAMERON B，LANDRETH GE.Inflammation，microglia，and alzheimer's disease［J］.Neurobiol Dis，2010，37（3）：503-509.

［15］CIPOLLONE F，F(xiàn)ERRI C，DESIDERI G，et al.Preprocedural level of soluble CD40L is predictive of enhanced inflammatory response and restenosis after coronary angioplasty［J］.Circulation，2003，108（22）：2776-2782.

［16］TOWN T，TAN J，F(xiàn)LAVELL RA，et al.T-cells in Alzheimer's disease［J］.Neuromolecular Med，2005，7（3）：255-264.

［17］SUO Z，TAN J，PLACZEK A，CRAWFORD F，et al.Alzheimer's beta-amyloid peptides induce inflammatory cascade in human vascular cells：the roles of cytokines and CD40［J］.Brain Res，1998，807（1-2）：110-117.

［18］AIT-GHEZALA G，VOLMAR CH，F(xiàn)RIELING J，et al.CD40 promotion of amyloid beta production occurs via the NF-kappaB pathway［J］.Eur J Neurosci，2007，25（6）：1685-1695.

［19］TAN J，TOWN T，PARIS D，et al.Microglial activation resulting from CD40-CD40L interaction after beta-amyloid stimulation［J］.Science，1999，286（5448）：2352-2355.

［20］TODD ROACH J，VOLMAR CH，DWIVEDI S，et al.Behavioral effects of CD40-CD40L pathway disruption in aged PSAPP mice［J］.Brain Res，2004，1015（1-2）：161-168.

（責任編輯：肖雅妮）

The study of plasma levels of sCD40 and sCD40L in Alzheimer's disease and mild cognitive impairment.

LI Ling，ZHONG Xiaomei，SHI Haishan，HOU Le，LUO Xinni，WANG Yanhua，HU Guoyan，CHEN Xinru，ZHANG Wenru，CHEN Ben，PENG Qi，NING Yuping.Department of Guangzhou Brain Hospital，Guangzhou 510000，China.Tel：020-81268720.

Objective To explore the plasma levels of soluble CD40（sCD40）and soluble CD40 ligand（sCD40L）in the patients with Alzheimer's disease（AD）and those with amnestic mild cognitive impairment（aMCI）.Methods The levels of plasma sCD40 and sCD40L were measured in 20 patients with AD，35 patients with aMCI，and 32 cognitively normal controls（NC）using commercially available ELISAs.The cognitive function of AD and aMCI patients was measured by mini-mental state examination（MMSE）.Results There were significant differences in plasma sCD40 among AD，aMCI and NC groups（P＜0.05）as the medians（the upper and lower quartiles）of plasma levels were 123.3（97.4，149.5）pg/mL，102.9（63.6，124.0）pg/mL and 70.66（51.0，90.8）pg/mL，respectively.There were significant differences in plasma sCD40L among AD，aMCI and NC groups（P＜0.05）as plasma levels were 537.0（316.0，1134.0）pg/mL，316.0（190.0，546.0）pg/mL and 167.0（107.5，478.0）pg/mL.A negative correlation between the plasma concentrations of sCD40L and the MMSE scores was found in aMCI patients（r=-0.736，P＜0.001）.Conclusions There are relevant changes of plasma sCD40 and sCD40L levels in patients with AD and aMCI.The present results suggest that plasma levels of sCD40 and sCD40L may be appropriate biomarkers for AD patients and indicate that CD40-CD40L signaling may be involved in AD pathophysiology.

Alzheimer's Disease Amnestic mild cognitive impairment sCD40 sCD40L

R749.1

A

10.3969/j.issn.1002-0152.2016.08.003

☆國家自然科學基金（編號：30970902）；廣州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技項目（編號：2014A011044）；廣州市腦科醫(yī)院廣州市醫(yī)學重點學科建設項目子項目（編號：GBH2014-QN03）

*中山大學附屬第五醫(yī)院精神心理科（珠海 519000）

△廣州市腦科醫(yī)院

（E-mail：ningjeny@126.com）

（2015-12-22）