劉彩霞　景衛(wèi)利　程　雪　羅卉麗　黃梅.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院兒科，湖北十堰442000；2.湖北省十堰市婦幼保健院檢驗科，湖北十堰442000；.湖北省十堰市婦幼保健院兒科，湖北十堰442000

異丙托溴銨對小兒哮喘患者白細(xì)胞介素13、轉(zhuǎn)化生長因子β1及血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響

劉彩霞1景衛(wèi)利1程雪1羅卉麗2▲黃梅3
1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院兒科，湖北十堰442000；2.湖北省十堰市婦幼保健院檢驗科，湖北十堰442000；3.湖北省十堰市婦幼保健院兒科，湖北十堰442000

目的探討異丙托溴銨對小兒哮喘患者血清白細(xì)胞介素13（IL-13）、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）表達(dá)的影響。方法選取2013年12月～2015年10月于湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院就診的小兒哮喘患者60例作為研究對象，將所有患者隨機(jī)分為實驗組和對照組，每組各30例。對照組患者使用沙丁胺醇及氨茶堿進(jìn)行治療，實驗組在對照組治療的基礎(chǔ)上加用異丙托溴銨。治療前后檢測IL-13、TGF-β1、VEGF及肺功能水平，同時比較兩組治療后臨床總有效率。結(jié)果與治療前比較，兩組患者治療后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平明顯降低，第1秒用力呼氣容積（FEV1）和FEV1/用力肺活量（FVC）明顯提高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。實驗組治療后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平明顯低于對照組，F(xiàn)EV1和FEV1/FVC明顯高于對照組，臨床總有效率也明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論異丙托溴銨能夠改善小兒哮喘患者的肺功能，提高臨床療效，推測其機(jī)制可能與降低患者血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平有關(guān)。

異丙托溴銨曰小兒曰哮喘曰白細(xì)胞介素13曰轉(zhuǎn)化生長因子β1曰血管內(nèi)皮生長因子

哮喘（bronchial asthma）又稱支氣管哮喘，是一種由淋巴細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種細(xì)胞參與的慢性氣道炎癥性疾病，為小兒常見疾病之一［1］。近幾年小兒哮喘的患病率逐年升高，目前在我國的患病率為1.5%～2.0%，已嚴(yán)重威脅到我國小兒的生長發(fā)育健康，其中25%的患兒在1歲左右出現(xiàn)輕微癥狀，75%～85%的患兒會在4～5歲前出現(xiàn)胸悶、呼吸困難、反復(fù)可逆性喘息及咳嗽等癥狀。有研究指出急性發(fā)作哮喘患者血清白細(xì)胞介素13（IL-13）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等指標(biāo)表達(dá)提高［2］，當(dāng)前學(xué)者已經(jīng)證實IL-13與哮喘炎癥密切相關(guān)［3］，在氣道重塑中，轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）指標(biāo)占據(jù)重要地位，同時也能夠促進(jìn)IL-13的表達(dá)，VEGF能夠引起組織纖維化發(fā)展，引起氣道管腔縮小。目前，臨床上醫(yī)者主要采用沙丁胺醇及氨茶堿進(jìn)行治療，但臨床療效一般，故應(yīng)尋找療效更好的治療方案，異丙托溴銨（Ipratropium Bromide）為強效抗膽堿藥，對支氣管平滑肌M受體有較高的選擇性，且具有促進(jìn)支氣管黏膜纖毛運動以利于痰液排出的優(yōu)點［4］，但臨床上運用異丙托溴銨治療小兒哮喘的研究較少，因此，本研究通過觀察異丙托溴銨對小兒哮喘患者血清IL-13、TGF-β1、VEGF表達(dá)的變化，以期為異丙托溴銨治療小兒哮喘提供可能的臨床依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2013年12月～2015年10月于湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院（以下簡稱“我院”）門診及病房進(jìn)行治療的哮喘患兒60例作為研究對象，其中男36例，女24例；年齡3～15歲，平均（7.34±1.03）歲；體重指數(shù)（BMI）19.3～23.5 kg/m2。按照隨機(jī)數(shù)字表法將所有患者隨機(jī)分為實驗組與對照組。實驗組30例，男18例，女12例；年齡3～14歲，平均（7.25±0.95）歲；BMI（21.5± 1.8）kg/m2。對照組30例，男18例，女12例；年齡4～15歲，平均（7.52±1.08）歲；BMI（21.7±1.9）kg/m2。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，兩組患者性別、年齡、BMI等一般情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，患兒家屬簽署知情同意書。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

符合中華醫(yī)學(xué)會制訂的《哮喘診治指南》中關(guān)于小兒哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且患兒于急性發(fā)作期就診。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)

①合并慢性阻塞性肺疾病；②合并嚴(yán)重感染或肝腎功能不全；③合并先天性心臟??；④合并蕁麻疹、過敏性鼻炎等疾??；⑤對研究中使用的藥物過敏。

1.4方法

對照組：沙丁胺醇（江蘇平光制藥有限責(zé)任公司，國藥準(zhǔn)字H32025021），用法：氣霧吸入，每次0.1～0.2mg，必要時4 h 1次，每天不超過8次，持續(xù)治療7 d；氨溴索（揚州中寶制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H32024040），用法：每次2～3 mg/kg，以25%～50%葡萄糖20～40 mL稀釋后緩慢靜注，或以5%葡萄糖500 mL稀釋后靜滴，持續(xù)治療7 d。實驗組：治療方法與對照組相同，并在對照組治療的基礎(chǔ)上加用異丙托溴銨（北京海德潤制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H11022421），用法：霧化吸入，3～6歲兒童1.25 mL/次，6～15歲兒童2.5 mL/次，持續(xù)治療7 d。

1.5觀察指標(biāo)及療效判定標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1血清IL-13堯TGF-β1堯VEGF水平檢測治療前后1 d抽取所有患者肘部靜脈血3 m L，以3500 r/min的速度離心10min后送至我院檢驗科進(jìn)行檢驗。IL-13、TGF-β1、VEGF水平均采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（ELASA）法，試劑盒由浙江愛康生物科技有限公司生產(chǎn)，所用儀器為FX-6MG酶聯(lián)免疫光譜分析儀。檢測方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，并嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程進(jìn)行操作和質(zhì)控。

1.5.2肺功能檢測對所有患者均進(jìn)行肺功能檢測，方法：先對所有患者的用力肺活量（FVC）及第1秒用力呼氣容積（FEV1）進(jìn)行檢測，然后計算出FEV1/FVC的百分比，儀器由日本佳能公司生產(chǎn)，所用儀器為佳能AS-505型肺功能儀。

1.5.3臨床療效判定顯效：患兒的癥狀及體征有大幅度的改善；有效：患兒的癥狀及體征在一定程度上有所減輕；無效：患兒的癥狀及體征無變化甚至有所加重?？傆行?（顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x依s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組治療前后血清IL-13堯TGF-β1堯VEGF水平比較

與治療前比較，兩組患者治療后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平均明顯降低（P＜0.05）；實驗組患者治療后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2兩組治療前后肺功能指標(biāo)比較

與治療前比較，兩組患者治療后FEV1和FEV1/ FVC均顯著提高（P＜0.05），且實驗組治療后FEV1和FEV1/FVC均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表1　兩組治療前后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平比較（ng/L，依s）

表1　兩組治療前后血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平比較（ng/L，依s）

注：與本組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后比較，#P＜0.05；IL-13：白細(xì)胞介素13；TGF-β1：轉(zhuǎn)化生長因子β1；VEGF：血管內(nèi)皮生長因子

組別IL-13 TGF-β1VEGF對照組（n=30）治療前治療后實驗組（n=30）治療前治療后67.59±9.42 34.52±4.46*730.14±103.36 410.24±52.38*440.73±62.88 157.36±21.37*66.74±9.25 25.26±2.88*#728.83±103.46 356.56±40.25*#442.35±62.68 110.23±13.68*#

表2　兩組治療前后肺功能指標(biāo)比較（依s）

表2　兩組治療前后肺功能指標(biāo)比較（依s）

注：與本組治療前比較，*P＜0.05；與對照組治療后比較，#P＜0.05；FEV1：第1秒用力呼氣容積；FVC：用力肺活量

組別FEV1（L）FEV1/FVC（%）對照組（n=30）治療前治療后實驗組（n=30）治療前治療后53.03±5.44 72.46±9.37*63.33±6.71 74.75±9.47*52.63±5.65 82.68±11.35*#63.26±6.63 86.73±12.47*#

2.3兩組臨床療效比較

實驗組治療后臨床總有效率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3　兩組臨床療效比較［n（%）］

3　討論

哮喘是支氣管哮喘的簡稱，是由多種炎癥細(xì)胞與細(xì)胞組分共同參與介導(dǎo)的氣道慢性炎癥性疾病，以氣道高反應(yīng)性（AHR）與可逆而廣泛的氣流阻塞為特征［5］。哮喘是由復(fù)雜而尚未完全理解的基因和環(huán)境相互作用而導(dǎo)致的，可能引起疾病的相關(guān)因素包括宿主因素，例如遺傳、肥胖、性別；環(huán)境因素，例如過敏原、吸煙、空氣污染、職業(yè)性致敏物、感染、飲食藥物、內(nèi)分泌、精神緊張及運動等。本病的發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜且尚未十分明確，目前主要的幾種認(rèn)識包括變態(tài)反應(yīng)、氣道炎癥、氣道神經(jīng)-受體調(diào)節(jié)失常及氣道重構(gòu)與其相互作用等［6-7］。反復(fù)發(fā)作的并伴有哮鳴音的呼氣性呼吸困難為本病的典型臨床癥狀，多在夜間或凌晨時發(fā)作、加重，可伴有發(fā)作性胸悶或咳嗽［8］，體征以發(fā)作時兩肺廣泛的哮鳴音、呼氣延長為主，發(fā)作十分嚴(yán)重時哮鳴音反而減弱即沉默肺［9］。支氣管哮喘近年來在全世界的發(fā)病率都有明顯增加的趨勢，其中兒童哮喘的發(fā)病率為3.3%～29.0%，成人為1.2%～25.5%，中國的哮喘患者約有3000萬例，小兒哮喘患者的學(xué)習(xí)生活與生長發(fā)育均被嚴(yán)重影響［10］。異丙托溴銨是一種抗膽堿藥物，對支氣管平滑肌上的M受體具有較高選擇性的阻滯作用［11］，可以使節(jié)后迷走神經(jīng)通路阻斷，從而使迷走神經(jīng)的興奮性降低而舒張支氣管，其松弛氣道平滑肌的作用較強，且作用持續(xù)時間較長，對呼吸道腺體及心血管系統(tǒng)的影響都較小，還具有使黏液分泌減少的特點［12-13］。本研究通過對患者血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平的檢測以及肺功能與臨床療效的觀察，來研究異丙托溴銨對小兒哮喘的作用機(jī)制。

氣道炎癥是哮喘最重要的發(fā)病機(jī)制，是引起哮喘氣道高反應(yīng)性和氣道可逆且彌漫性阻塞的病理基礎(chǔ)［14］。IL-13是一種可以介導(dǎo)變態(tài)反應(yīng)的多效能細(xì)胞因子，其主要來源是活化的Th2細(xì)胞，其在哮喘相關(guān)的炎性因子中位于主導(dǎo)地位。IL-13能夠促進(jìn)IgE的合成使其水平升高，對IL-12與干擾素7的分泌具有抑制作用［15］；使Th1/Th2平衡失調(diào)，而偏向Th2，增加Th2型細(xì)胞因子的表達(dá)，加重炎性反應(yīng)；對嗜酸性粒細(xì)胞的凋亡產(chǎn)生抑制作用，使其存活時間加長，維持了氣道炎癥［16］；還能直接使成纖維細(xì)胞受刺激而增殖活化，加強纖維素的產(chǎn)生，進(jìn)而參與到氣道重塑的過程中；同時對VEGF與TGF-β1的生成都具有誘導(dǎo)促進(jìn)作用［17］。TGF-β1是一種同時具有抗炎與促炎雙重作用的因子，其致纖維化的作用公認(rèn)十分強烈［18］。一方面TGF-β1能對氣道平滑肌細(xì)胞的增殖和分化進(jìn)行刺激，引起平滑肌發(fā)生肥大與增生，還對膠原的沉積具有促進(jìn)作用，在氣道重構(gòu)的過程中扮演十分關(guān)鍵的角色。另一方面，它通過對炎癥細(xì)胞的影響來參與氣道炎癥：它能使Th2細(xì)胞的存活時間延長，從而增加IL-13的合成，對上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞進(jìn)行刺激使其產(chǎn)生IL-1、IL-8等；對炎癥細(xì)胞趨化浸潤向哮喘氣道具有誘導(dǎo)促進(jìn)的作用，使相關(guān)免疫炎癥細(xì)胞的存活時間延長，加強肥大細(xì)胞脫顆粒作用，引起哮喘氣道中的炎癥細(xì)胞大量聚集，使氣道炎癥程度加重［19］。VEGF是特異性影響血管形成的重要細(xì)胞生長因子，又被稱為血管通透因子。VEGF對由嗜酸性粒細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)具有十分重要的作用，它可以和其表面的flt-1受體結(jié)合，使磷脂酰肌醇-3-激酶與PKC的活性增強，從而對嗜酸性粒細(xì)胞的活性物質(zhì)的釋放以及趨化與活化產(chǎn)生促進(jìn)作用，進(jìn)而加重了氣道炎癥，使氣道反應(yīng)性與黏液分泌增加［20］。同時，在炎癥過程中血管反應(yīng)是重要的中心環(huán)節(jié)之一，VEGF既能增加血管的通透性，使血漿蛋白的滲出增多，又能對血管的新生進(jìn)行誘導(dǎo)，這兩種反應(yīng)相互增強，導(dǎo)致炎癥加劇，持續(xù)時間延長。VEGF能引起上皮下組織纖維化、使基底膜增厚，導(dǎo)致氣道壁黏膜發(fā)生水腫及增厚，最終引起氣道管腔直徑減小，參與氣道重構(gòu)，其機(jī)制可能與VEGF對Th2細(xì)胞與TGF-β1的生成促進(jìn)有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，治療后與對照組比較，實驗組患者血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平明顯較低（P＜0.05），提示異丙托溴銨能夠有效減輕哮喘患兒氣道炎性反應(yīng)，減緩氣道重構(gòu)。

哮喘發(fā)病時患者的呼吸功能受到明顯的影響，相關(guān)指標(biāo)下降顯著。肺功能檢查屬于物理檢查方法的一種，對患者身體沒有任何損害，沒有痛苦與不適反應(yīng)，且具有較高的敏感度，方便重復(fù)檢查，患者也容易接受，能夠?qū)颊叩暮粑δ芮闆r進(jìn)行診斷，對肺功能的損傷程度與性質(zhì)進(jìn)行確診。在肺功能的多項指標(biāo)中，以FEV1/FVC最為可靠。實驗結(jié)果表明，治療后與對照組比較，實驗組患者的肺功能明顯較好（P＜0.05），提示異丙托溴銨能明顯改善小兒哮喘患者的肺功能。

根據(jù)對治療后患兒的統(tǒng)計，本研究發(fā)現(xiàn)實驗組的30例患者中有12例的臨床相關(guān)癥狀與體征有明顯緩解或基本消失，表現(xiàn)出顯效的治療效果，15例患者的臨床相關(guān)癥狀與體征有一定緩解，表現(xiàn)出有效的治療效果，總有效率高達(dá)90%；而對照組中有8例患兒的臨床相關(guān)癥狀與體征沒有緩解甚至出現(xiàn)加重的情況，其總有效率為73.33%。本研究結(jié)果顯示，實驗組治療后臨床總有效率高于對照組（P＜0.05），提示異丙托溴銨能明顯提高小兒哮喘的臨床療效。

本研究通過對60例小兒哮喘患者的血清IL-13、TGF-β1、VEGF水平變化的檢測以及肺功能與臨床療效的觀察，提示異丙托溴銨能明顯減輕氣道炎性反應(yīng)，減緩氣道重構(gòu)，改善肺功能，提高臨床療效。今后筆者將對其具體作用機(jī)制進(jìn)行更深入的研究，以期對本研究中所反映出的結(jié)果做出更具體的論證。

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Effect of Ipratropium Brom ide for the expression of interleukin 13,trans－form ing grow th factor-茁1and vascular endothelial grow th factor in chil－dren w ith asthma

LIU Caixia1JINGWeili1CHENG Xue1LUOHuili2▲HUANGMei3
1.Department of Pediatrics，Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine，Hubei Province，Shiyan 442000，China；2.Department of Clinical Laboratory，Shiyan Maternal and Child Health-Care Hospital，Hubei Province，Shiyan 442000，China；3.Department of Pediatrics，Shiyan Maternal and Child Health-Care Hospital，Hubei Province，Shiyan 442000，China

Ob jective To investigate the effect of Ipratropium Bromide for the expression of interleukin 13（IL-13），transforming growth factor-β1（TGF-β1）and vascular endothelial growth factor（VEGF）in children with asthma.Meth－ods Sixty children with asthma treated in Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine from December 2013 to October 2015 were selected as research objects，and they were random ly divided into the experiment group and the control group，with 30 cases in each group.The control group was treated by Salbutamol and Aminophylline，on basis of the control group，the experiment group was added with Ipratropium Bromide.The levels of IL-13，TGF-β1，VEGF and pulmonary function of the two groups before and after treatmentwere detected，at the same time，the clinical total effective rates of the two groups after treatmentwere compared.Resu lts Compared with before treatment，the levels of IL-13，TGF-β1，VEGF of the two groups after treatmentwere significantly decreased，the forced expiratory volume in one second（FEV1）and FEV1/forced vital capacity（FVC）were significantly increased，the differences were all statistically significant（P＜0.05）.The levels of IL-13，TGF-β1，VEGF of experiment group after treatmentwere all lower than those of control group，the FEV1and FEV1/FVC were higher than those of control group，the clinical total effective rate was also higher than that of control group，the differences were all statistically significant（P＜0.05）.Conclusion Ipratropium Bromide can improve the pulmonary function of children with asthma and enhance clinical efficacy，the mechanism may be related to decreasing the levels of IL-13，TGF-β1，VEGF.

Ipratropium Bromide；Children；Asthma；Interleukin 13；Transforming growth factor-β1；Vascular endothelial growth factor

R725.6

A

1673-7210（2016）06（c）-0149-05

湖北省十堰市科學(xué)技術(shù)研究與開發(fā)項目計劃（14Y67）。

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（2016-02-08本文編輯：張瑜杰）