孟曉丹

（河南省洛陽(yáng)市第三人民醫(yī)院藥劑科，洛陽(yáng)471000）

高效液相色譜法對(duì)降脂通便膠囊中大黃有效成分測(cè)定

孟曉丹

（河南省洛陽(yáng)市第三人民醫(yī)院藥劑科，洛陽(yáng)471000）

目的對(duì)降脂通便膠囊中大黃有效成分進(jìn)行含量測(cè)定。方法應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定本院制劑降脂通便膠囊有效成分大黃酚及大黃素的含量。結(jié)果大黃素的回歸方程為A1=3685.0C1-2.6838（r=0.9998），線性范圍為0.0129 μg～0.226 μg；大黃酚的回歸方程為A2=5695.6C2-5.2986（r=0.9998），線性范圍為0.0173 μg～0.302 μg。結(jié)論高效液相色譜（HPLC）法用于我院制劑降脂通便膠囊的含量測(cè)定控制。該方法簡(jiǎn)便易行，重現(xiàn)性好?？捎糜跍y(cè)定降脂通便膠囊中的大黃素和大黃酚的含量。

降脂通便膠囊；高效液相色譜；大黃素；大黃酚；含量測(cè)定

降脂通便膠囊是本院制劑室生產(chǎn)主要成分為：大黃、薏仁、山楂、枸杞子、紅棗、水蛭等，功能主治：補(bǔ)腎、降脂、袪濁、潤(rùn)腸通便。血脂、血壓、三酸甘油脂高者；身體臃腫、肥胖、易疲勞者；常年便秘、腹脹者；皮膚干澀、暗瘡、出現(xiàn)色斑者等。大黃為本方的君藥之一，其主要有效成分為大黃酚和大黃素作為本品質(zhì)量測(cè)定的控制標(biāo)準(zhǔn)［1］。本實(shí)驗(yàn)參考相關(guān)文獻(xiàn)，建立了高效液相色譜法測(cè)定本院制劑降脂通便膠囊中大黃酚、大黃素含量的方法，其結(jié)果顯示靈敏度高、分離效果好、準(zhǔn)確度高等多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 儀器與試藥儀器：電子天平（PrecisaSA-125A）、LC-100上海伍豐高效液相色譜儀，SH-AC青島色譜柱；對(duì)照品：大黃酚、大黃素均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，編號(hào)分別是110756-200510，110796-200513。供試品：降脂通便膠囊，由洛陽(yáng)市第三人民醫(yī)院制劑室提供。試劑：甲醇、磷酸等流動(dòng)相所用試劑均為色譜純，其余均為分析純，水用重蒸餾水。

1.2 對(duì)照品溶液制備精密稱取大黃素、大黃酚對(duì)照品各適量，加入甲醇制成每1 ml含大黃酚8 μg、大黃素4μg的混合溶液。

1.3 供試品溶液制備取樣品2 g，精密稱量，置入具塞錐形瓶中，加入精密稱量的甲醇50 ml，密塞，稱重，超聲處理30分鐘后冷卻，再次稱重，再用甲醇補(bǔ)足消耗的重量，搖勻過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液25 ml，置入圓底蒸餾瓶蒸干，殘?jiān)偌铀?0 ml、鹽酸2 ml、氯仿20 ml，然后加熱回流30分鐘，冷卻后分取氯仿層，水層則用氯仿振搖法提取，每次10 ml，共3次，然后再合并氯仿液蒸干，剩余殘?jiān)俅渭蛹状际蛊淙芙?，然后轉(zhuǎn)移到25 ml量瓶中，加甲醇至刻度處，搖勻即得。

1.4 陰性對(duì)照溶液制備取缺大黃的陰性樣品適量，按供試品溶液的制法制備陰性對(duì)照溶液。

1.5 干擾試驗(yàn)取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各按上述條件測(cè)定。樣品色譜圖中與對(duì)照品溶液有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間無(wú)此峰，說(shuō)明降脂通便膠囊的其它成分對(duì)大黃素和大黃酚的測(cè)定并無(wú)干擾，證實(shí)本測(cè)定法切實(shí)可行。

1.6 精密度試驗(yàn)精密量取樣品1份，按供試品溶液制備法制備，按上述色譜條件測(cè)定，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣共6次，得出大黃酚峰面積RSD值是0.5%（n=6）、大黃素峰面積RSD值是1.2%（n=6）。

1.7 重復(fù)性試驗(yàn)同一樣品精密稱取6份，按供試品溶液制備法制備，按上述色譜條件測(cè)定并精密計(jì)算其含量，結(jié)果：大黃酚和大黃素的平均含量為0.4 mg/粒，RSD= 1.5%（n=6）。

1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取1份樣品，按供試品溶液制備法制備，按上述色譜條件測(cè)定，隔2 h進(jìn)樣1次，測(cè)峰面積并精密計(jì)算，結(jié)果：大黃酚24 h內(nèi)的RSD為0.9%（n=12），大黃素24 h內(nèi)的RSD為1.4%（n=12），顯示樣品溶液測(cè)定結(jié)果24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.9 回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的降脂通便膠囊內(nèi)容物粉末每份0.5 g，共取6份，分別加入大黃酚對(duì)照品溶液（0.0252 mg/ml）7 ml、大黃素對(duì)照品溶液（0.01068 mg/ml）12 ml。按上述色譜條件測(cè)定并計(jì)算回收率，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 降脂通便膠囊大黃素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

樣品加樣回收試驗(yàn)結(jié)果表明，回收率在95～105%之間，RSD＜3%，表明本方法回收率完全符合含量測(cè)定要求。

1.10 降脂通便膠囊中大黃素、大黃酚含量測(cè)定取降脂通便膠囊10批，依法測(cè)定其中大黃素、大黃酚之含量，每批均測(cè)定2次，具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 降脂通便膠囊中大黃素大黃酚含量測(cè)定結(jié)果

根據(jù)10批樣品總測(cè)定結(jié)果，參照《中國(guó)藥典》2000版一部大黃藥材含量測(cè)定項(xiàng)下大黃素、大黃酚總量的限度［2］，因考慮其中藥材來(lái)源不同以及制劑過(guò)程中的損失等，將其含量測(cè)定限度定為上述10批樣品平均含量的70%，即0.929 mg/g×70%=0.6503 mg/g，每粒按0.4 g計(jì)，則0.6503 mg/g×0.4 g/粒=0.260 mg/粒。故降脂通便膠囊中所含大黃以大黃酚（C15H10O4）和大黃素（C15H10O5）總量計(jì)算，不得少于0.260 mg。

2 討論

本院制劑降脂通便膠囊處方中主藥大黃、薏仁、山楂等有補(bǔ)益肝腎、降脂潤(rùn)腸之效，其主要有效成分大黃酚、大黃素含量相對(duì)較高，故選擇大黃酚、大黃素的含量測(cè)定作為觀察指標(biāo)。因大黃、薏仁、枸杞子、紅棗中的降脂物質(zhì)蒽醌類化合物用乙醇加熱回流提取法來(lái)提取更為充分，故本實(shí)驗(yàn)將此幾種物質(zhì)用乙醇加熱回流法進(jìn)行提??；枸杞子、山楂用醇提法才能提取出有效降脂成分；黃連與含蒽醌類化合物的藥材共煎會(huì)影響所含生物堿成份的含量，故本實(shí)驗(yàn)將黃連采取另外提取的方法。在預(yù)試驗(yàn)中，用HPLC法分別對(duì)2種制備工藝制出的樣品進(jìn)行含量測(cè)定，除山楂醇提法外其余方法測(cè)出的大黃酚、大黃素含量遠(yuǎn)低于醇提工藝，故而制備工藝中選擇用醇提法來(lái)進(jìn)行提取。采用HPLC法測(cè)定制劑中大黃素、大黃酚的含量時(shí)，經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)大黃素、大黃酚色譜峰均分離更好，陰性對(duì)照完全無(wú)干擾，其試驗(yàn)結(jié)果精密準(zhǔn)確而可靠，理論塔板數(shù)相對(duì)較高，所以本實(shí)驗(yàn)可作為本院制劑降脂通便膠囊的質(zhì)量控制方法。

［1］張國(guó)用.抗腫瘤中藥的作用機(jī)制研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2012（2）：158-159.

［2］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：17-328.

Determination on Effective Components of Rhubarb in Jiangzhi Tongbian Capsule by High Performance Liquid Chromatography

MENG Xiaodan
Department of Pharmacy，Luoyang Third People's Hospital，Henan Province，Luoyang 471000，China

Objective To determine the content of effective components of Rhubarb in Jiangzhi Tongbian capsule.Methods The high performance liquid chromatography（HPLC）was used to determine the effective components of rhubarb and emodin in our hospital. Results The regression equation of emodin was A1=3685.0C1-2.6838（r=0.9998），the linear range was 0.0129 mu g to 0.226 mu g，the regression equation was A2=5695.6C2-5.2986（r=0.9998），and the linear range was 0.0173 mu g to 0.302 Mu G.Conclusion The HPLC was used for the determination of the content of the capsule in the preparation of our hospital.This method is simple and easy to operate，and has good reproducibility.It can be used to determine the content of emodin and rhubarb in Jiangzhi Tongbian capsule.

Jiangzhi Tongbian capsule；high performance liquid chromatography；emodin；rhubarb；content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.20.064

1672-2779（2016）-20-0140-02

楊杰 本文校對(duì)：張松歌

2016-09-05）