程小麗，朱向東，王　燕，郭婷婷，張曉婧

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

?

·實(shí)驗(yàn)研究·

四神丸對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠血清IL-23、IL-27含量和結(jié)腸黏膜Foxp3 mRNA表達(dá)的影響*

程小麗，朱向東，王燕，郭婷婷，張曉婧

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

目的：觀察四神丸針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠血清中IL-23、IL-27含量和結(jié)腸組織中Foxp3 mRNA表達(dá)的影響，探討四神丸對(duì)脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制。方法：使用TNBS/乙醇溶液灌腸、番瀉葉灌胃聯(lián)合氫化可的松腹腔注射復(fù)制脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎的大鼠模型。將120只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，四神丸低劑量組、中劑量組、高劑量組和SASP組，通過(guò)藥物進(jìn)行干預(yù)治療，利用光鏡觀察結(jié)腸組織病理形態(tài)并進(jìn)行評(píng)分，采用ELISA檢測(cè)法檢測(cè)大鼠血清中的IL-23和IL-27水平，RT-PCR檢測(cè)法檢測(cè)Foxp3mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：與空白對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠結(jié)腸組織的黏膜層有炎癥和潰瘍發(fā)生，證實(shí)模型成功。與空白對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠血清的IL-23、IL-27含量顯著升高，結(jié)腸組織Foxp3基因表達(dá)量明顯下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型對(duì)照組對(duì)比，四神丸低、中、高劑量組和SASP組血清IL-23 、IL-27水平降低，結(jié)腸組織Foxp3基因表達(dá)量升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論：四神丸有可能是通過(guò)對(duì)促炎因子lL-23、IL-27的下調(diào)表達(dá)，對(duì)Foxp3基因的表達(dá)量進(jìn)行升高表達(dá)，從而調(diào)節(jié)腸道中的異常免疫反應(yīng)，起到防治潰瘍性結(jié)腸炎的作用。

四神丸；潰瘍性結(jié)腸炎；IL-23；IL-27；Foxp3；作用機(jī)制；動(dòng)物；大鼠

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是較為常見(jiàn)的炎癥性腸病(inflam-matory boweLdisease，IBD)之一，也是一種非特異性的免疫性炎癥[1]，其病變部位好發(fā)于直腸和結(jié)腸，多表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、黏液膿血便、里急后重,具有易反復(fù)、病程遷延、不易治愈的特點(diǎn)。若任其發(fā)展，則有并發(fā)癥多、癌變的傾向，從而嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[2]。UC的病因和發(fā)病機(jī)制，目前尚不十分明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其發(fā)病與免疫、飲食、遺傳、環(huán)境，及心理等諸多因素有關(guān)，其中免疫系統(tǒng)的異常和紊亂被認(rèn)為是最為密切的影響因素。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)通常使用磺胺類(lèi)藥物、激素治療，但常因其副作用較大、患者難以耐受而使用受限。中醫(yī)學(xué)無(wú)UC這一病名[3]，根據(jù)其臨床表現(xiàn)多以腹瀉予以治療，而四神丸為治療腹瀉的經(jīng)典方劑之一[4]，且運(yùn)用四神丸治療脾腎陽(yáng)虛型潰瘍性結(jié)腸炎有顯著療效；只是該方法治療潰瘍性結(jié)腸炎的現(xiàn)代科學(xué)機(jī)制尚未得到闡明。本研究遵循中醫(yī)辨證論治的精髓，采用復(fù)合法建立大鼠 UC 模型，通過(guò)觀察四神丸的療效，以及從免疫學(xué)的角度探討該療效機(jī)制，為四神丸的廣泛臨床運(yùn)用以及進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)提供有力的依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物

SPF級(jí)Wistar大鼠120只，雌雄各半，體質(zhì)量(180±20) g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(甘)2011-0001。飼料亦由以上單位提供。

1.2藥品、試劑與儀器

四神丸源自《證治準(zhǔn)繩》，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑室制備。按照原方2∶4∶2∶1∶2∶2比例取肉豆蔻、補(bǔ)骨脂、五味子、吳茱萸、生姜、大棗，用8倍量 700 g/L的乙醇每次回流2 h，提取3次，得醇提取液和醇提取藥渣。合并3次醇提取液，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇后得醇提取濃縮液，將其干燥后得干膏，將干膏粉碎成細(xì)粉，加入揮發(fā)油。實(shí)驗(yàn)用不含賦形劑的浸膏，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。柳氮磺吡?SASP)，0.25 g/片，上海三維制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)H32020026；番瀉葉水煎液，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室熬制加工，藥材購(gòu)自蘭州惠仁堂藥店；氫化可的松注射液，天津藥業(yè)焦作有限公司產(chǎn)品，批號(hào)11080411。2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)，北京邦定泰克生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)2008-16-2；大鼠IL-23、IL-27檢測(cè)試劑盒，深圳市達(dá)科為生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20150502B；PCR引物設(shè)計(jì)，北京金唯智生物科技有限公司產(chǎn)品，批號(hào)108030404；TrizoL試劑(批號(hào) 19919)、瓊脂糖(批號(hào) 0000101394)，均為Invitrogen 公司產(chǎn)品；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(批號(hào) 0000007526)、PCR 試劑盒(批號(hào) 108030404)，均為Promega Corporation公司產(chǎn)品；異丙醇，天津市百世化工有限公司產(chǎn)品；三氯甲烷、無(wú)水乙醇，均為天津市化學(xué)試劑工廠產(chǎn)品； 二抗大鼠SP檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)13135A05。Biorad iMark酶標(biāo)儀，美國(guó)BLO-RAD公司產(chǎn)品；CT14RD高速冷凍離心機(jī)，天美科技有限公司產(chǎn)品；303-2型恒溫培養(yǎng)箱，北京科偉永鑫實(shí)驗(yàn)設(shè)備儀器公司產(chǎn)品 ；S1000TM型PCR儀、BIO-RAD凝膠成像儀，均為美國(guó)伯樂(lè)公司產(chǎn)品。

1.3動(dòng)物分組、模型的建立與給藥

將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，SASP組和四神丸低、中、高劑量組6組，每組各20只。采用TNBS/乙醇溶液灌腸、番瀉葉灌胃聯(lián)合氫化可的松腹腔注射法制作脾腎陽(yáng)虛型UC大鼠模型：將大鼠正常飼養(yǎng)1周，待其體質(zhì)量(180±20)g時(shí)，空白對(duì)照組以蒸餾水(每只3 mL/d)灌胃、生理鹽水(每只1 mL/d)腹腔注射；其余5組以番瀉葉(每只3 mL/d)灌胃、氫化可的松(每只5 mg/d)腹腔注射，共計(jì)21 d。21 d后，將Wistar大鼠禁食、不禁水24 h，用100 g/L水合氯醛(3 μL/g)腹腔麻醉，用橡膠輸液管輕緩注入大鼠距肛門(mén)7～8 cm 深的腸腔內(nèi)，將TNBS/乙醇液(100 ng/g+500 g/L 的乙醇0.25 mL)溶液注入，留置數(shù)分鐘；用針頭抽取少量空氣，采用同樣方法注入大鼠腸腔，以防治溶液外漏。灌腸結(jié)束后，讓動(dòng)物保持平躺狀態(tài)，自然清醒。空白對(duì)照組大鼠采用同樣方法用等量的生理鹽水灌腸。

于造模結(jié)束第2天開(kāi)始灌胃治療，每日1次，連續(xù)21 d。四神丸低、中、高劑量組分別按生藥1.12，2.24，4.48 g/(kg·d)的劑量(按照臨床成人用量的2.5，5及10倍折算)灌胃，SASP組按0.3g/kg劑量灌胃，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組以等體積的生理鹽水灌胃，灌胃體積均為10 μL/g。

1.4檢測(cè)指標(biāo)

治療21d 后，乙醚麻醉大鼠，股動(dòng)脈采血，取血清用于 ELISA 法檢測(cè)血清IL-23、IL-27含量；脫頸處死大鼠，取病變最嚴(yán)重處結(jié)腸5～8 cm，用冷PBS清洗結(jié)腸，肉眼觀察結(jié)腸損傷情況并評(píng)分；取病變最明顯處0.5 cm左右，迅速移至液氮中保存，用于免疫組化和基因表達(dá)檢測(cè)。

1.4.1一般情況

在造模及治療期間觀察各組大鼠精神、毛色、飲食、大便等情況。

1.4.2血清IL-23、IL-27含量檢測(cè)

采用ELISA法測(cè)定血清IL-23、IL-27含量，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑盒要求操作。在檢測(cè)波長(zhǎng)450 nm和校正波長(zhǎng)620 nm同時(shí)讀板，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣本含量。

1.4.3結(jié)腸組織大體形態(tài)

大體形態(tài)損傷評(píng)分參照Luketal標(biāo)準(zhǔn)[5]進(jìn)行。0分：無(wú)損傷。1分：充血但沒(méi)有潰瘍。2分：充血而且腸壁變厚但沒(méi)有潰瘍。3分：有一處小潰瘍，直徑0～1 cm。4分：潰瘍較大，直徑1～2 cm，但腸管與外周臟器無(wú)粘連。5分：潰瘍直徑1～2 cm，腸管增厚，與周?chē)K器粘連嚴(yán)重。

1.4.4結(jié)腸組織中Foxp3蛋白的定位表達(dá)

采用免疫組化SP法。主要步驟：固定石蠟切片，將其常規(guī)脫蠟。每張切片滴加體積分?jǐn)?shù) 30 mL/L 的H2O2，于室溫放置 10 min。將切片浸入0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH值6.0)中進(jìn)行抗原熱修復(fù)，自然冷卻至室溫。滴加50 g/L的BSA 封閉液，室溫放置20 min。分別滴加Foxp3一抗，4 ℃冰箱過(guò)夜。滴加生物素化山羊抗兔 IgG，于37 ℃培養(yǎng)箱孵育20 min。滴加試劑 SABC，于37 ℃培養(yǎng)箱孵育 20 min。加DAB 顯色劑，蘇木素輕度復(fù)染3 min；經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。通過(guò)顯微鏡觀察結(jié)果，拍片。同一組片中，用PBS 代替一抗作孵育，其余步驟同上，來(lái)進(jìn)行染色對(duì)照。Foxp3蛋白主要表達(dá)于大鼠結(jié)腸組織中的腸道黏膜及黏膜下層，尤以胞漿為主。Foxp3表達(dá)陽(yáng)性為胞質(zhì)呈棕黃顆粒染色，顏色越深則表明表達(dá)越強(qiáng)；若未出現(xiàn)棕黃顆粒則為陰性。采用 BI-2000圖像分析系統(tǒng)之免疫組化分析系統(tǒng)，隨機(jī)選取 5 個(gè)視野，測(cè)量陽(yáng)性細(xì)胞平均積分光密度值(IOD)，其值越大則表明蛋白表達(dá)強(qiáng)，反之則表達(dá)弱。

1.4.5大鼠結(jié)腸組織中Foxp3的水平以及表達(dá)

采用RT-PCR法檢測(cè)。RNA的提取采用經(jīng)典的Trizol法，通過(guò)Bio-RAd核酸定量分析儀測(cè)定總 RNA 的濃度和純度，確保 2.0>A260/A280>1.8。參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,合成 cDNA,用 cDNA模板對(duì)大鼠內(nèi)參照β-actin 及Foxp3基因分別進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，引物由金唯智生物科技北京有限公司合成。內(nèi)參照β-actin 引物序列為：上游引物 5′-CCTCTATGCCAACACAGTGC-3′，下游引物5′-AAGGGTGTAAAACACAGCTC-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度 292 bp。Foxp3引物序列為：上游引物5′-AAAGTGGCAGGGAAGGAGTG-3′，下游引物5′-CAAGTCTCGTGTGAAGGCAGA-3′，產(chǎn)物長(zhǎng)度 196 bp。擴(kuò)增反應(yīng)體系為 50 μL,其中 cDNA 3 μL、上下游引物各 1 μL；MgCl23 μL、10×Reaction Buffer 5 μL、dNTP Mix 1 μL；Tap DNA 聚合酶 0.25 μL；無(wú)酶水補(bǔ)足至50 μL。擴(kuò)增參數(shù)為：預(yù)變性95 ℃、2 min，95 ℃變性 45 s，退火 53 ℃、45 s,72 ℃、延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)(β-actin為25個(gè)循環(huán))，總延伸72 ℃、5 min。PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物于 10 g/L瓊脂糖凝膠中電泳,在凝膠成像儀上成像,采用 Quantity One 圖像分析軟件分析數(shù)據(jù),獲得各電泳條帶的積分光密度(X)，用β-actin 的積分光密度(A)作為內(nèi)參照，計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量(X/A)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)　果

2.1各組大鼠一般情況對(duì)比

空白對(duì)照組：大鼠皮毛光澤順滑，反應(yīng)靈活，精神、飲食正常，大便正常。模型對(duì)照組：造模完成時(shí)，大鼠精神萎靡、活動(dòng)減少，大便清稀不成形，毛發(fā)松散無(wú)光澤，爪甲顏色較淡，尾巴變涼，弓背倦怠，喜扎堆，飲食、飲水量顯著下降。自造模第2天，大鼠出現(xiàn)持續(xù)稀便、肛周污濁、毛色晦暗無(wú)光澤且有被糞便沾染的現(xiàn)象，部分大鼠出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的血便。第7天，上述現(xiàn)象最為突出，是病證最顯著階段。因?yàn)榇笫笞陨碛幸欢ǖ男迯?fù)功能，自第14天開(kāi)始上述癥狀有一定程度的改善，第21天改善較為明顯，飲食增多，皮毛較前潔凈順滑，大便較前略成形，反應(yīng)較前靈敏。其余各治療組經(jīng)過(guò)治療后癥狀均有不同程度的改善，SASP組大鼠皮毛較有光澤，反應(yīng)較靈敏，精神較正常，活動(dòng)尚靈敏，飲食尚可，大便基本正常，個(gè)別有稀便現(xiàn)象；四神丸組大鼠皮毛光澤，反應(yīng)靈活，精神活動(dòng)可，飲食接近正常，大便呈顆粒狀，其中中劑量組各癥狀恢復(fù)最好，與空白對(duì)照組對(duì)比基本無(wú)異。

2.2各組大鼠血清IL-23、IL-27水平對(duì)比

與空白對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠血清IL-23、IL-27含量升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型對(duì)照組對(duì)比，四神丸高、中、低劑量組和SASP組血清IL-23 、IL-27水平降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

組 別動(dòng)物數(shù)劑量/(g·kg-1)IL-23/(ng·L-1)IL-27/(ng·L-1)空白對(duì)照組2008.5863±0.330910.0378±0.9794模型對(duì)照組0209.9217±0.4344**8.8211±0.8449**SASP組200.468.3898±0.5932#10.0144±0.6148##四神丸低劑量組2011.188.3855±0.5531#9.9243±0.8579#四神丸中劑量組2022.378.3052±1.4298#9.7982±0.4151#四神丸高劑量組2044.738.2952±0.4982#9.8748±0.4082#

注：與空白對(duì)照組對(duì)比，**P<0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，#P<0.05，##P<0.01。

2.3各組大鼠結(jié)腸組織大體形態(tài)對(duì)比

模型對(duì)照組大鼠結(jié)腸黏膜可見(jiàn)明顯的充血、水腫、潰瘍，腸壁變厚、腸道縮短等。經(jīng)過(guò)3種劑量四神丸和SASP治療后，大鼠結(jié)腸黏膜損傷情況均有改善，但各組具體的修復(fù)情況不同。其中，SASP組和四神丸中、高劑量組的大鼠黏膜僅存在少量的充血水腫，其余損傷基本恢復(fù)至正常形態(tài)。四神丸組、SASP 組與模型對(duì)照組對(duì)比，結(jié)腸損傷評(píng)分降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2　各組大鼠結(jié)腸組織大體形態(tài)評(píng)分對(duì)比　　±s

注：與空白對(duì)照組對(duì)比，**P<0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，##P<0.01。

2.4各組大鼠結(jié)腸組織Foxp3基因表達(dá)量對(duì)比

與空白對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠結(jié)腸組織Foxp3基因表達(dá)量下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對(duì)照組對(duì)比，四神丸高、中、低劑量組和SASP組Foxp3基因表達(dá)量升高(P<0.05)。見(jiàn)表3。

組 別劑量/(g·kg-1)Foxp3相對(duì)表達(dá)量空白對(duì)照組00.9086±0.1477模型對(duì)照組00.4725±0.1108**SASP組0.460.8472±0.0806#Δ*四神丸低劑量組11.180.8762±0.0870#Δ*四神丸中劑量組22.370.6641±0.3281#四神丸高劑量組44.730.7506±0.0493#

注：與空白對(duì)照組對(duì)比，**P<0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，#P<0.05；與四神丸中劑量組對(duì)比，△P<0.05；與四神丸高劑量組對(duì)比，＊P<0.05。

3　討　論

潰瘍性結(jié)腸炎屬中醫(yī)學(xué)“痢疾”“腸風(fēng)”“腸癖”“便血”“泄瀉”“帶下”“臟毒”等范疇。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為：UC的發(fā)生由飲食、勞倦、情志損傷等多重因素相互作用使五臟失調(diào)所致，濕邪是其最主要的致病因素之一。脾主運(yùn)化水濕，雖然UC的病變部位在腸，但中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病的發(fā)生、發(fā)展與脾有著密切關(guān)系。UC病程較長(zhǎng)，根據(jù)久病及腎理論，該病易損傷腎臟，從而引起腎虛。腎主二便，腎虛則氣化不行，大便失約而為泄瀉，故目前臨床治療應(yīng)從脾虛泄瀉、腎虛泄瀉來(lái)論治。四神丸是治療五更泄瀉的經(jīng)典名方之一，臨床治療UC臨床療效顯著，但作用機(jī)制不明。

目前，免疫因素是UC發(fā)病研究的熱點(diǎn)之一[7]。IL-23、IL-27為新近發(fā)現(xiàn)的IL-12之家族成員，與IL-12組織結(jié)構(gòu)類(lèi)似、生物功能相近，可以參與免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病，以及腫瘤等多種免疫調(diào)節(jié)過(guò)程[8]，尤其是在慢性腸病發(fā)病中起著重要的免疫調(diào)節(jié)作用。IL-23歸屬于介導(dǎo)細(xì)胞免疫的因子之一，主要來(lái)源于活化的樹(shù)突狀細(xì)胞與巨噬細(xì)胞。IL-23不僅參與機(jī)體的抗感染免疫和抗腫瘤免疫，還在自身免疫性疾病的發(fā)病和長(zhǎng)期慢性復(fù)發(fā)性炎癥中起著不可或缺的作用。IL-23可誘導(dǎo)T細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，如IL-17、IL-10、IFN-γ等[9]，其中，IL-17為已被證實(shí)為促炎因子，其可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞進(jìn)行增殖、成熟和趨化，從而促使T細(xì)胞活化與增殖；此外，還可以促進(jìn)TNF、IL-1、IL-6等促炎細(xì)胞因子的釋放。有文獻(xiàn)[10]報(bào)道，IL-23是引發(fā)腸道炎癥的關(guān)鍵介質(zhì)之一。IL-27主要由活化的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞產(chǎn)生，表達(dá)部位主要在髓細(xì)胞系。IL-27作用于免疫反應(yīng)早期階段，通過(guò)STAT1、T-bet途徑使CD4+T細(xì)胞增殖，使其向Th1細(xì)胞方向分化；同時(shí)可協(xié)同IL-12刺激細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，促進(jìn)單核細(xì)胞產(chǎn)生TNF、IL-1、IL-12等炎性細(xì)胞因子[11]，從而導(dǎo)致炎癥的發(fā)生。另一方面，在Th1細(xì)胞高度活化時(shí)，IL-27還可通過(guò)抑制Th2和Th17細(xì)胞的分化，從而促進(jìn)IL-10的產(chǎn)生，抑制炎癥因子IL-2的分泌，進(jìn)而抑制Th1型免疫反應(yīng)從而達(dá)到抗炎作用[12]。

Foxp3是叉狀頭轉(zhuǎn)錄因子的家族成員之一[13]，與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的發(fā)育、分化和功能發(fā)揮密不可分[14]，被認(rèn)為是屬于Treg的標(biāo)志性分子。Treg細(xì)胞是具有免疫調(diào)節(jié)功能的一類(lèi)T細(xì)胞亞群，在多種免疫性疾病中有著重要作用。雖然其具體的作用機(jī)制尚不清楚，但越來(lái)越來(lái)多的研究證明：Treg細(xì)胞能通過(guò)多種機(jī)制來(lái)抑制免疫應(yīng)答，在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定中發(fā)揮重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxp3基因敲除或突變的小鼠，由于CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量減少，F(xiàn)oxp3表達(dá)缺陷，其自身免疫病的發(fā)病率大大增高。在人類(lèi)體內(nèi)，同源的Foxp3突變有引起基因性疾病的可能性，如腸病、免疫失調(diào)、內(nèi)分泌疾病等[15]。由此可知，F(xiàn)oxp3可能是影響自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)制的重要因子之一，其突變或缺失能夠引起嚴(yán)重的自身免疫性疾病。本研究結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠血清的IL-23、IL-27含量普遍升高，結(jié)腸組織Foxp3基因表達(dá)量明顯下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型對(duì)照組對(duì)比，四神丸低、中、高劑量組和SASP組血清IL-23、IL-27含量降低，結(jié)腸組織Foxp3基因表達(dá)量升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果表明：四神丸可能是通過(guò)下調(diào)促炎因子lL-23、IL-27表達(dá)，升高Foxp3基因表達(dá)量，來(lái)調(diào)節(jié)腸道中的異常免疫反應(yīng)，從而達(dá)到防治UC的作用。

[1]朱立，王新月.潰瘍性結(jié)腸炎病因病機(jī)理論探討[J].杏林中醫(yī)藥，2010,30(1)：10-11.

[2]崔俊峰，王建民，李明.中醫(yī)藥治療潰瘍性結(jié)腸炎研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2011，23(1)：92-93.

[3]吳春江, 李志濤, 趙雙梅.中醫(yī)藥治療潰瘍性結(jié)腸炎研究進(jìn)展[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2009, 30(6):72-74.

[4]杜波，王婧.四神丸合理中湯加味治療潰瘍性結(jié)腸炎76例[J].中醫(yī)雜志，2011，52(20)：1778-1779.

[5]國(guó)家中醫(yī)藥管理局醫(yī)政司.中醫(yī)臨床診療術(shù)語(yǔ)[M].北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1997.

[6]Hristine C, Michel C, Lecannu G.The Prebiotic characteristics of fructooligosaccharides are necessary for reduction of TNBS-induced colitis in rats[J].J Nutr,2003,133(1)：21-27.

[7]劉杰民,王敏,黃貴華,等.潰瘍性結(jié)腸炎由脾及腎病機(jī)演變規(guī)律初探[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2011,18(8): 94-95.

[8]Shimizu M,Shimamura M,Owaki T,et al.Antiangiogenic and antitumor activities of IL-27[J].J Immunol,2006,176(12):7317-7324.

[9]dePaus RA, van de Wetering D, van Dissel JT, et al.IL-23 and IL-12 responses in activated human T cells retrovirally transduced with IL-23 receptor variants[J].MoL Immunol，2008，45(15): 3889-3895.

[10]Yen D, Cheung J, Scheerens H, et al.IL-23 is essentiaLfor T cell-mediatedcolitis andPromotes inflammation via IL-17 and IL-6[J].J Clin Invest,2006,116(5):1310-1316.

[11]Takeda A, Hamano S, Yamanaka A, et aL.Cutting edge: role of IL-27/WSX-1signaling for induction of T-bet through activation of STATLduring initial ThL commitment[J].J Immunol,2003,170(10):4886-4890.

[12]Stumhofer JS,Laurence A,Wilson EH, et aL.Interleukin 27 negatively regulates the development of interleukin 17-producing T helper cells during chronic inflammation of the centraLnervous system[J].Nat Immunol,2006,7(9):937-945.

[13]Hori S,Nomura T, Sakaguchi S. ControL of regulatory T celL development by the transcription factor Foxp3[J].Science,2003, 299(5609):1057-1061.

[14]孔珍珍,李付廣.Foxp3在CD25+CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)育和功能中作用的研究進(jìn)展[J].國(guó)際免疫學(xué)雜志,2010(33): 205-08.

[15]Khattri R, Cox T,Yasayko SA,et al.An essentiaLrole for Scurfin in CD4+CD25+T regulatory cells[J].Nat Immunol,2003(4):337-342.

(編輯陶珠)

1001-6910(2016)02-0066-05

R574.62

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2016.02.32

朱向東，教授，博士，zhuxiangdong33@163.com

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(BH-2013-8)

2015-05-08；

2015-12-03