王衛(wèi)娜

(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 南陽 473000)

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·實(shí)驗(yàn)研究·

三七總皂苷對(duì)糖尿病大鼠腎臟相關(guān)炎癥因子的影響*

王衛(wèi)娜

(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 南陽 473000)

目的：以血栓通膠囊為研究對(duì)象，探討三七總皂苷對(duì)糖尿病大鼠腎組織相關(guān)炎癥因子的影響。方法：將SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、三七總皂苷組，每組10只。三七總皂苷組給以100 μL/(g·d)灌胃，正常、模型對(duì)照組灌等體積的生理鹽水，共4周。檢測(cè)一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)、血糖(BS)、尿微量白蛋白(M-ALB)、腎臟肥大指數(shù)、丙二醛(MDA)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)。結(jié)果：與正常對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠NO、NOS、BS、Ccr、M-ALB、腎臟肥大指數(shù)升高，NO/ET降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。與模型對(duì)照組對(duì)比，三七總皂苷組大鼠NO、NOS、BS、Ccr、M-ALB、MDA 、腎臟肥大指數(shù)活性降低，NO/ET增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：三七總皂苷能夠改善糖尿病腎病模型大鼠腎臟病理變化，抑制腎臟TGF-β1,升高NO/ET含量，從而對(duì)腎臟進(jìn)行保護(hù)。

糖尿病腎??；三七總皂苷； 氧化應(yīng)激；動(dòng)物；大鼠

糖尿病腎病(diabeticn ephropathy, DN)是1型糖尿病和2型糖尿病的主要慢性并發(fā)癥之一，已經(jīng)成為導(dǎo)致慢性腎功能衰竭的最常見原因之一，發(fā)病與腎臟組織細(xì)胞中的自由基或氧化應(yīng)激水平異?？赡芟嚓P(guān)[1]。目前，針對(duì)糖尿病腎病缺乏有效的治療手段。三七總皂苷是三七的主要活性成分，有化瘀止血、活血、補(bǔ)虛強(qiáng)壯的功效，制劑有血栓通注射液、血栓通膠囊、三七總苷片和三七總苷膠囊。本研究以血栓通膠囊為研究對(duì)象，觀察了其對(duì)糖尿病大鼠腎臟一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)、血糖(BS)、尿微量白蛋白(M-ALB)、腎臟肥大指數(shù)、丙二醛(MDA)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)的影響，探討三七總皂苷防治DN的可能作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物

選擇3月齡SD大鼠，清潔級(jí)，雄性，35只，體質(zhì)量150～200 g，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司質(zhì)監(jiān)中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供，質(zhì)量合格證號(hào)為SCXK魯20130001。大鼠飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物室，室溫21～25 ℃。

1.2藥品與試劑

血栓通膠囊，每粒0.18 g,含三七總皂苷100 mg，哈爾濱珍寶制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20130511，臨用前以生理鹽水配制成10 g/L的溶液；鏈脲佐菌素，美國Sigma公司產(chǎn)品，批號(hào)20120907。尿蛋白測(cè)定試劑盒(批號(hào)20130719)、血糖測(cè)定試劑盒(批號(hào)20121218)，均購自南京建成生物工程公司。

1.3模型的建立、分組與給藥方法

造模：一次性腹腔注射鏈脲佐菌素60 μg/g，血糖≥16.65 mmol/L為糖尿病大鼠。將大鼠按數(shù)字隨機(jī)表法分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、三七總皂苷組，每組10只。造模成功后1周開始，三七總皂苷組以三七總皂苷100 μg/(g·d)灌胃給藥，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水，1 d 1次，連用4周。

1.4檢測(cè)指標(biāo)

用藥4周后，稱量體質(zhì)量，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)10 g/L 戊巴比妥鈉按 5 μL/g體質(zhì)量腹腔注射麻醉，分別取血、尿和兩側(cè)腎臟以備用。

1.4.1NO、ET、Ccr、BS和M-ALB

分離血清，放免法測(cè)定NO、ET的含量。采用自動(dòng)生化儀測(cè)定血、尿肌酐，計(jì)算Ccr。用氧化酶法測(cè)定BS。以酶聯(lián)免疫法測(cè)定M-ALB。

1.4.2腎臟肥大指數(shù)、MDA和TGF-β1

取大鼠腎組織，記錄腎質(zhì)量，計(jì)算腎臟肥大指數(shù)。比色法測(cè)定腎皮質(zhì)勻漿MDA。取—部分腎臟組織經(jīng)多聚甲醛固定，切片做HE染色，免疫組化法測(cè)定TGF-β1的表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)　果

2.1各組大鼠NO/ET 、NOS、NO和腎臟肥大指數(shù)對(duì)比

與正常對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠NO水平、NOS活性、腎臟肥大指數(shù)升高(P<0.01)，NO/ET降低(P<0.05)，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型對(duì)照組對(duì)比，三七總皂苷組大鼠NO水平、NOS、腎臟肥大指數(shù)活性降低，NO/ET 升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

組 別動(dòng)物數(shù)NO/ET/(ng·L-1)NOS/(ng·L-1)NO/(μmol·L-1)腎指數(shù)/10-3正常對(duì)照組100.10±0.010.10±0.010.02±0.016.12±0.33模型對(duì)照組100.08±0.02*0.39±0.02**1.81±0.12**8.67±0.58**三七總皂苷組100.18±0.03##0.19±0.04##0.04±0.01##6.98±0.67##

注：與正常對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05,**P<0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，##P<0.01。

2.2各組大鼠BS、Ccr、M-ALB和 MDA對(duì)比

與正常對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠MDA、BS、Ccr和M-ALB增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型對(duì)照組對(duì)比，三七總皂苷組大鼠MDA、BS、Ccr和M-ALB降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

組 別動(dòng)物數(shù)BS/(mmol·L-1)Ccr/(mL·min-1)M-ALB/(μg·L-1)MDA/(μmol·L-1)正常對(duì)照組107.8±0.60.10±0.010.02±0.017.8±0.6模型對(duì)照組1025.6±1.4**0.39±0.02**1.81±0.12**25.6±1.4**三七總皂苷組1011.3±0.9##0.19±0.04##0.04±0.01##11.3±0.9##

注：與正常對(duì)照組對(duì)比，**P<0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，##P<0.01。

2.3各組大鼠腎小球TGF-β表達(dá)對(duì)比

與正常對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組大鼠TGF-β1表達(dá)增多，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與模型對(duì)照組對(duì)比，三七總皂苷組大鼠TGF-β1表達(dá)降低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 見表3。

表3　各組大鼠腎小球TGF-β表達(dá)對(duì)比　　±s

注：與正常對(duì)照組對(duì)比，**P<0.01；與模型對(duì)照組對(duì)比，##P<0.01。

3　討　論

糖尿病腎病是糖尿病的嚴(yán)重微血管并發(fā)癥之一。既往研究已揭示高糖、TGF-β等與糖尿病腎臟肥大形成可能有關(guān)[1]。機(jī)體在高血糖及糖尿病腎病時(shí)產(chǎn)生的過量ROS激活轉(zhuǎn)錄因子，可引起糖尿病腎臟組織損傷以及引起細(xì)胞死亡[2]。本研究結(jié)果顯示，糖尿病大鼠腎臟腎組織MDA、Ccr，M-ALB含量升高，TGF-β1表達(dá)明顯增多，說明這些因素參與了糖尿病腎病的病理過程;以三七總皂苷治療后，腎組織MDA、Ccr，M-ALB含量降低，TGF-β1表達(dá)明顯減少，進(jìn)而可以說三七總皂苷可能對(duì)糖尿病腎病的治療起著一定的作用。

腎小球高濾過和高功能是糖尿病早期的病理生理狀態(tài)。NO影響腎臟濾過效率及腎皮質(zhì)血流量，是具有舒血管作用的活性因子。糖尿病時(shí)NO增多，促進(jìn)炎癥產(chǎn)生與發(fā)展[3-4]，對(duì)腎細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用[5]?？梢?，NO作為血管活性物質(zhì)參與了腎小球高灌注高濾過的發(fā)生發(fā)展和腎細(xì)胞的損傷。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型對(duì)照組大鼠NO水平、NOS活性、腎臟肥大指數(shù)顯著升高，NO/ET顯著降低；三七總皂苷治療后大鼠NO水平、NOS、腎臟肥大指數(shù)活性顯著降低，NO/ET也顯著降低。提示了三七總皂苷可以通過影響NO水平、NOS活性、NO/ET的變化，進(jìn)而改變腎小球的高濾過和高功能，改善腎臟的功能。

[1]錢軍.黃平絞股藍(lán)皂苷對(duì)早期糖尿病腎病大鼠腎臟TGF-β1蛋白含量影響的研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2007,14(4)：263-264.

[2]王凌云，柳潔.氧化應(yīng)激在糖尿病腎病中的意義及吡格列酮干預(yù)研究[J].山西醫(yī)藥雜志：上半月，2008，37(4)：316.

[3]陳俊紅，陳俊榮，牟兆新，等.酒大黃對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化兔血脂和NO及主動(dòng)脈iNOS表達(dá)的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(6)：160.

[4]張翊玲，張旭華.被動(dòng)吸煙對(duì)大鼠肺組織、肺泡灌洗液、血清中NO及NOS的影響[J].廣東醫(yī)學(xué)，2011，32(3)：296.

[5]侯亞利，張玉平，雷慧，等.益母草注射液減少DIC大鼠多個(gè)組織器官一氧化氮合成與釋放的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21(12)：103.

(編輯陶珠)

1001-6910(2016)02-0073-02

R587.2

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2016.02.34

南陽市科技局科技攻關(guān)項(xiàng)目(2012GG069)；南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校自然科學(xué)項(xiàng)目 (2NYYZ2004)

2015-06-30；

2015-11-17