張亞杰　張兵帥　韓曦英　王琪瑞　王萌　孫云婷

摘要：目的：研究藜蘆與丹參反藥配伍組合不同配比和劑量變化對(duì)急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響。方法：采用均勻設(shè)計(jì)法，按2因素7水平以急性血瘀模型大鼠血小板聚集率為指標(biāo)，觀察藜蘆與丹參2種合煎液灌胃給藥后對(duì)急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響。結(jié)果：經(jīng)回歸分析可知，藜蘆與丹參存在拮抗作用，且當(dāng)1∶5<藜蘆∶丹參<10∶1時(shí)拮抗作用最強(qiáng)。結(jié)論：藜蘆拮抗丹參降低急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的作用，其作用強(qiáng)度隨配比和劑量的不同而改變。

關(guān)鍵詞：均勻設(shè)計(jì)；丹參；藜蘆；血小板聚集率

中圖分類(lèi)號(hào)：G642.0 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1674-9324（2016）44-0090-03

“十八反”中“諸參辛芍叛藜蘆”，藜蘆與丹參是相反藥對(duì)中的一對(duì)，能否在臨床上合用，一直都存在爭(zhēng)議。丹參因其肯定的活血化瘀作用而被廣泛用于心血管疾病的治療，藜蘆也具有心血管方面的作用[1，2]，二者合用于心血管方面疾病會(huì)產(chǎn)生怎樣的效果有待于進(jìn)一步研究。所以選擇丹參常用的活血化瘀功效作為研究基礎(chǔ)，通過(guò)均勻設(shè)計(jì)法考察藜蘆與丹參在不同劑量配比的條件下對(duì)急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響，為藜蘆與丹參的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

一、材料

（一）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠，體重200±20g，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK-（吉）2011-0021，喂食常規(guī)飼料，自由飲水。

（二）藥品與試劑

黎蘆的產(chǎn)地是長(zhǎng)春華家，購(gòu)于長(zhǎng)春市吉深藥店；丹參的產(chǎn)地為山東鄒平縣，購(gòu)自于長(zhǎng)春市吉深藥店；經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院鑒定教研室翁麗麗教授鑒定，分別為百合科葵蘆屬植物葵蘆“Veratrumnigrum I，.”的干燥根及根莖，丹參為雙子葉植物唇形科Labiatae鼠尾草屬植物丹參“Salvia miltiorrhizaBge.”的干燥根及根莖。

復(fù)制模型的鹽酸腎上腺素注射液：丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：1502011。

（三）儀器與設(shè)備

SC-2000血小板聚集測(cè)試儀（北京賽科希德科技發(fā)展有限公司）。

二、方法

（一）藥品制備

稱(chēng)取丹參與黎蘆飲片，浸泡、加熱回流提取、過(guò)濾、再煎、合并2次濾液保存于4℃冰箱中。

（二）分組與給藥

1.丹參與藜蘆配伍均勻設(shè)計(jì)方法。以前期探索的丹參對(duì)血小板聚集率影響的有效劑量，藜蘆參考的急性毒性劑量范圍和臨床用藥劑量范圍，確定丹參的劑量范圍是4.50～19.60g/kg；藜蘆的劑量范圍為0.03～0.87g/kg，將丹參和藜蘆作為兩個(gè)考察因素，每一個(gè)因素各設(shè)7個(gè)水平，按均勻設(shè)計(jì)表U7（72）及其使用表進(jìn)行設(shè)計(jì)，共得到7種配比，具體見(jiàn)表1、2。

2.對(duì)急性血瘀模型大鼠血小板聚集率的影響。將大鼠按體重隨機(jī)分為空白組、模型組、藜蘆與丹參不同配比組共9組，每組各10只。其中空白組與模型組給予生理鹽水1ml/100g體重灌胃，其余各組給予相應(yīng)藥液1ml/100g體重灌胃，連續(xù)給藥10天。除空白組外，其余各組均于末次給藥后皮下注射濃度為1mg/ml鹽酸腎上腺素注射液，即按體重為0.01mg/kg。半小時(shí)后，將所有大鼠放入冰水中刺激5分鐘，時(shí)至將其打撈出來(lái)并將身上的水擦干烤干。兩小時(shí)后，按體重（0.01mg/kg）再次通過(guò)皮下注射鹽酸腎上腺素。次日用10%的水合氯醛麻醉，從頸動(dòng)脈插管放血，以構(gòu)椽酸鈉抗凝，離心，測(cè)量血小板聚集率。

3.數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用±S表示，先用SPSS 13.0軟件的秩和檢驗(yàn)或單因素方差分析，后采用matlab7.8軟件進(jìn)行多元逐步回歸分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

三、結(jié)果

各組大鼠血小板聚集率結(jié)果見(jiàn)表3，采用秩和檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，各組與模型組比較，大部分給藥組大鼠的血小板聚集率均降低（P<0.05、P<0.01），提示藜蘆與丹參合用具有降低大鼠血小板聚集率的作用。

藥物交互作用分析：將藜蘆與丹參均勻設(shè)計(jì)7組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用matlab統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行多元逐步回歸，以藜蘆、丹參為自變量x1、x2，血小板聚集率因變量y，得擬合方程y=29.0861+46.0206X1+1.8186X2-28.6143X12-

1.8965X1X2-0.0662X22三維效果圖，見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，藜蘆和丹參的共同用藥顯著降低了血小板聚集率。

血小板聚集率與藥物配伍比例和用藥劑量相關(guān)性分析：由方程y進(jìn)行外延推論，分別以藥物總劑量（藜蘆+丹參）、不同比例（丹參：藜蘆）作為自變量D、K，血小板聚集率為相應(yīng)的因變量y1'，得理論擬合方程y1'=29.0861+（46.0206D）/（K+1）+（1.8186DK）/（K+1）-（28.6143D2）/（K+1）2-（1.8965D2K）/（K+1）2-（0.0662D2K2）/（K+1）2，結(jié)果見(jiàn)圖1?？倓┝吭谝欢l件下，丹參所占比例越大，血小板聚集率越小，說(shuō)明丹參在起主要作用，在圖1中從拋物線的下降階段、曲線斜率上看，丹參所占比例越大，血小板聚集率下降速率越快，說(shuō)明藜蘆對(duì)其藥效降低的強(qiáng)度越大。當(dāng)藜蘆和丹參的比例小于1∶10時(shí)，y值即血小板聚集率值趨于接近，此時(shí)藜蘆對(duì)丹參藥效降低強(qiáng)度最大；二者比例大于5∶1時(shí)，曲線趨于接近，此時(shí)藜蘆對(duì)川貝藥效降低強(qiáng)度趨于最小。藜蘆與丹參配伍比例為1∶10<藜蘆∶丹參<5∶1時(shí)，二者合用明顯降低了丹參的減小血小板聚集率的作用。

大鼠血小板聚集率與藥組配伍比例和用藥劑量相關(guān)性分析：總劑量0～19.69g·kg，合煎液對(duì)血小板聚集率的影響呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，如拋物線：小于5g·kg時(shí)呈上升趨勢(shì)，大于10g·kg時(shí)呈下降趨勢(shì)，大于5g·kg小于10g·kg時(shí)不同配比下上升或下降趨勢(shì)不同，丹參比例越高，拋物線上升或下降速率越慢，而藜蘆的比例越高，上升或下降的速率越快。

四、討論

“十八反”有的醫(yī)家認(rèn)為反藥合用會(huì)導(dǎo)致毒性增加，強(qiáng)調(diào)此為絕對(duì)禁忌；也有認(rèn)為反藥在一定條件下是可以同用，確實(shí)也可以取得良好的療效。所以本課題選擇了藜蘆與丹參這一相反藥對(duì)作為研究對(duì)象，評(píng)價(jià)二者是否具有相反性。從收集的文獻(xiàn)中可以看出，對(duì)藜蘆和丹參的合用研究多為體外研究，以相應(yīng)毒性成分的變化為基礎(chǔ)[3，4]，但是藥物在進(jìn)入機(jī)體后在代謝功能的作用下可能發(fā)生新的成分變化，所以并不能依據(jù)于體外的數(shù)據(jù)就確定了藜蘆和丹參的相反關(guān)系，還要從動(dòng)物的體內(nèi)研究進(jìn)行確認(rèn)，所以本研究選擇丹參和藜蘆的主要藥理作用作為觀察指標(biāo)，通過(guò)均勻設(shè)計(jì)方法評(píng)價(jià)這一相反藥配伍組合在不同比例和劑量條件下對(duì)急性血瘀大鼠的血小板聚集率影響。

急性血瘀大鼠的血小板聚集率影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，丹參和藜蘆都具有降低血小板聚集率的作用，與文獻(xiàn)的研究結(jié)果相符。回歸分析得知，在藜蘆0.03～0.87g/kg和丹參4.50～19.60g/kg的合煎液中，藜蘆與丹參對(duì)降低急性血瘀大鼠的血小板聚集率存在一定的拮抗作用，藜蘆能減弱丹參對(duì)血小板聚集率的降低作用，且比例為1∶10<藜蘆∶丹參<5∶1時(shí)，此種拮抗作用最強(qiáng)。

參考文獻(xiàn)：

[1]韓國(guó)柱，李欣燕，呂莉.烏蘇里藜蘆堿對(duì)大鼠血小板聚集以及小鼠全血凝血時(shí)間及尾出血時(shí)間的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)會(huì)通訊，2002，19（2）：8-10.

[2]李欣燕，任洪燦，韓國(guó)柱.烏蘇里藜蘆堿在大鼠的血液流變學(xué)作用[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26（3）：165-167.

[3]王福霞，劉磊.高效液相色譜法測(cè)定藜蘆-丹參配伍化學(xué)成分變化[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28（5）：656-657.

[4]敖書(shū)華，劉磊.HPLC研究藜蘆-丹參配伍后藜蘆定的含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（1）：17-18.