張　松　吳　迪

(貴州師范大學(xué) a.貴州省山地環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;b.分析測(cè)試中心，貴州 貴陽(yáng) 550001)

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直接水解紫外光譜法測(cè)定豬肉中色氨酸的含量

張松a，b吳迪a，b

(貴州師范大學(xué) a.貴州省山地環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;b.分析測(cè)試中心，貴州 貴陽(yáng) 550001)

通過(guò)直接水解，采用對(duì)二甲氨基苯甲醛顯色的紫外光譜法測(cè)定豬肉中色氨酸的含量，建立了一種檢出限低、精密度高、回收率高的分析方法。線性范圍為0.02—14.0μg/mL，檢出限為9.2ng，回收率為98.8%—103.5%。該方法簡(jiǎn)單快速，靈敏度高，適用于樣品數(shù)目較多的定量分析。

直接水解；豬肉；色氨酸

色氨酸Tryptophan，(L-2-氨基-3(β-吲哚)丙酸)，在動(dòng)物體內(nèi)直接參與血漿蛋白質(zhì)的更新，可促使核黃素發(fā)揮作用，有助于煙酸及血紅素的合成，能顯著增加懷孕動(dòng)物胎仔體內(nèi)抗體，對(duì)泌乳期的乳牛和母豬有促進(jìn)泌乳作用。當(dāng)畜禽缺乏色氨酸時(shí)，生長(zhǎng)停滯，體重下降，脂肪積累降低，種公畜睪丸萎縮。色氨酸是一種重要的營(yíng)養(yǎng)劑，是人類(lèi)必需的氨基酸之一。它在人體內(nèi)不能合成，必須由食物供給。色氨酸含量不足時(shí)，影響免疫球蛋白的合成，降低免疫功能，還會(huì)導(dǎo)致胰島素分泌降低，所以色氨酸測(cè)定是評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)的重要依據(jù)[1]。

目前，色氨酸的測(cè)定方法主要有比色法、熒光強(qiáng)度測(cè)定法、反相高效液相色譜法、氣相色譜法和氨基酸分析法[2]。在氨基酸分析時(shí)，樣品前處理如果采用鹽酸水解法會(huì)使色氨酸全部被破壞掉；如果采用堿水解法即用淀粉為保護(hù)劑，氫氧化鈉溶液作堿水解處理，這種方法回收率低，數(shù)據(jù)精密度差。本文采用直接水解紫外光譜法測(cè)定豬肉中的色氨酸，方法簡(jiǎn)單，易操作，數(shù)據(jù)重復(fù)性好，做了回收率、精密度試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果與其他方法比對(duì)，結(jié)果滿意。

1　材料與方法

1.1樣品采集

新鮮豬肉(里脊肉)，主要采集大三元豬肉3個(gè)樣品、江口蘿卜豬肉6個(gè)樣品、特種野豬肉6個(gè)樣品。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑

硫酸溶液(21.2mol/L)：將576mL 98%的濃硫酸慢慢倒入300mL水中，冷卻后定容至1L；對(duì)二甲氨基苯甲醛—硫酸溶液(10mg/mL)：稱取2.5g對(duì)二甲氨基苯甲醛，用21.2mol/L硫酸溶液溶解定容至250mL；0.2%亞硝酸鈉溶液；10% KOH溶液；色氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(0.1mg/mL)：準(zhǔn)確稱取0.010 0g L-色氨酸對(duì)照品，用少量10% KOH溶液溶解，用水定容至100mL。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器

瓦里安CRAY 100紫外分光光度計(jì)；DFD-700恒溫水浴箱。

1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及反應(yīng)機(jī)理

分別向6支10mL試管中準(zhǔn)確加入色氨酸儲(chǔ)備液(0.1mg/mL)0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL(相當(dāng)于加入色氨酸0，20，40，60，80，100μg)；再分別加水1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0mL，加入10% KOH 1.0mL，冷水浴，加入5.0mL對(duì)二甲氨基苯甲醛—硫酸溶液，搖勻，室溫放置30min，加入0.2mL 0.2%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置20min。在590nm處以10mm比色皿測(cè)定吸光度，空白調(diào)零，以色氨酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

在酸性條件下，色氨酸與對(duì)二甲氨基苯甲醛發(fā)生縮合反應(yīng)：

希夫堿對(duì)二甲氨基苯甲醛縮色氨酸為藍(lán)色，在590nm有最大吸收，吸光度與色氨酸濃度成正比。

1.5豬肉樣品的檢測(cè)

取新鮮豬肉(里脊肉)，碎肉機(jī)粉碎，取0.25g(準(zhǔn)確稱量0.000 1g)于50mL比塞管中，加入25mL 10%KOH，37.5℃水解18h，冷卻，用水定容到50mL，中速定量濾紙過(guò)濾,取續(xù)濾液2.0mL，加冷水浴，加入對(duì)二甲氨基苯甲醛硫酸溶液5.0mL，搖勻，室溫放置30min，加入0.2mL 0.2%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置20min，于590nm處測(cè)定吸光度。

2　結(jié)果

豬肉中色氨酸的含量測(cè)定結(jié)果如表1所示。

3　討論

3.1色氨酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線

色氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示：色氨酸濃度與吸光值線性關(guān)系良好，y=0.121 4x-0.127 5，相關(guān)系數(shù)R=0.999 7，線性范圍:0.02—14.0μg/mL，與朗伯—比爾定律相符,故可采用對(duì)照法計(jì)算測(cè)定結(jié)果。由信號(hào)強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)差的3倍與工作曲線斜率之比得出檢出限為9.2ng[3]。

表1　豬肉中色氨酸的含量測(cè)定結(jié)果

3.2回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)備已知色氨酸含量的樣品6份，分別加入不同量的標(biāo)準(zhǔn)色氨酸，按照前面的方法對(duì)其進(jìn)行處理，回收率測(cè)定結(jié)果如表2所示。樣品加標(biāo)回收率均在95%—105%之內(nèi)，表明該方法測(cè)定豬肉中色氨酸含量是可靠的。

表2　回收率測(cè)定結(jié)果

3.3精密度試驗(yàn)

本文采用變異系數(shù)來(lái)表示樣品測(cè)量的精密度，通常變異系數(shù)小于10%，說(shuō)明方法的精密度好[4]。從表3可以看出，該方法的變異系數(shù)均小于10%，說(shuō)明該方法有很高的精密度。

表3　變異系數(shù)表

4　結(jié)論

本文采用直接水解法測(cè)定豬肉中色氨酸含量，建立了一種檢出限低、精密度高、回收率高的分析方法。線性范圍為0.02—14.0μg/mL，檢出限為9.2ng，回收率為98.8%—103.5%。該方法簡(jiǎn)單快速，靈敏度高，同樣適用于樣品數(shù)目較多的定量分析。

[1]陳芷荃,楊若萱.嬰兒奶粉中色氨酸測(cè)定方法的研究[J].上海食品科技,1986，(1):5—9.

[2]雷紹榮,胡謨彪,羅玲.飼料中色氨酸含量的測(cè)定[J].飼料工業(yè),1997,18(12):31—32.

[3]蒲云月,陳少波.氨基酸分析儀法測(cè)定奶粉中色氨酸[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2015,(8).

[4]趙壽春,呂明.紫外分光光度法測(cè)定食品中的色氨酸[J].黑龍江商學(xué)院學(xué)報(bào),1988,(2).

責(zé)任編輯：李增華

10.3969/j.issn.1674-6341.2016.05.012

2016-06-24

張松(1981—)，男，貴州德江人，助理實(shí)驗(yàn)師。研究方向：儀器分析教學(xué)和重金屬污染。

O657.3；Q517

A

1674-6341(2016)05-0028-02