許會卿，張新鋼，朱利華

急性喘息兒童感染HBoV的臨床分析

許會卿，張新鋼，朱利華

目的分析研究急性喘息兒童人博卡病毒（HBoV）感染的臨床特征。方法對219例因急性喘息就診的患兒采用實(shí)時熒光定量PCR法對鼻咽部抽吸物（NPA）進(jìn)行博卡病毒（HBoV）檢測，陽性病例采用實(shí)時熒光定量PCR對其DNA載量進(jìn)行測定，并結(jié)合其臨床特征進(jìn)行綜合分析。結(jié)果HboV感染患兒22例，總陽性率為10.05%，平均檢出年齡為1歲7月，未見明顯季節(jié)性及性別差異。HBoV感染重癥喘息患兒（7.9×108拷貝/ml）與非重癥喘息患兒（3.4×108拷貝/ml）HBoV的病毒載量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05），HBoV協(xié)同感染（4.5×108拷貝/ml）與獨(dú)立感染（2.7×108拷貝/ml）患兒病毒載量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）。結(jié)論博卡病毒是小兒急性喘息性疾患的重要病原體，常年均可檢出，HBoV可能不是小兒急性喘息的唯一致病因素。

喘息，急性；博卡病毒；病毒載量；病原學(xué)

呼吸道病毒感染始終是國內(nèi)外醫(yī)院病原學(xué)控制的難題，并且越來越被重視［1］，自瑞典學(xué)者Allander從兒童呼吸道感染樣本中分離出人博卡病毒（HBoV）以來，由于病例納入標(biāo)準(zhǔn)的不統(tǒng)一，其致病機(jī)制、生物學(xué)特征至今仍然不是十分明確，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣。盡管有文獻(xiàn)表明HBoV與兒童喘息性疾病有關(guān)，但鑒于納入病例標(biāo)準(zhǔn)的差異，研究結(jié)論并不統(tǒng)一，甚至有文獻(xiàn)提出與兒童喘息相關(guān)性并不明顯［2］，所以對兒童喘息與HBoV感染的關(guān)系有必要展開進(jìn)一步研究。筆者回顧性分析219例因急性喘息就診兒童的臨床資料，檢測其HBoV感染情況并對其臨床特征進(jìn)行分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2009年11月至2010年12月寧波市婦女兒童醫(yī)院臨床癥狀表現(xiàn)為喘息的患兒219例，所納入病例均為第一次喘息發(fā)作，既往無反復(fù)鼻塞、咳嗽及喘息等呼吸道癥狀，同時除外先天性心臟病、先天性喉喘鳴及先天性支氣管肺發(fā)育不良等基礎(chǔ)疾患，其診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《實(shí)用兒科學(xué)》［3］。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本的采集在入院當(dāng)天收集患兒鼻咽部抽吸物（NPA），吸出至一含有約3ml病毒保存液的無菌離心管中；迅速轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，振蕩混勻后10 000 r/min，離心5 min，離心半徑9.5 cm。取上清－80℃冰箱保存待測。

1.2.2標(biāo)本DNA的提取所有樣本室溫解凍后，分別取200l利用QIAmp DNA Mini Kit（Qiagen）提取樣本中的總DNA，操作嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

1.2.3HBoV目的基因的擴(kuò)增采用同時檢測HBoVNP-1、NS1目標(biāo)基因以杜絕假陰性［4］。根據(jù)HBoV ST1（DQ000495）設(shè)計引物，分別擴(kuò)增NP-1基因片斷（354bp）和NS1基因片段（291 bp）。引物由上海生工生物公司合成。擴(kuò)增條件皆為：94℃預(yù)變性4 min；94℃變性1 min，55℃退火1min，72℃延伸1min，35個循環(huán)；72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物的鑒定：5 lPCR產(chǎn)物加樣，凝膠成像系統(tǒng)觀看目的條帶，保存分析圖像。引物序列具體見表1。

表1　HBoV目的基因引物序列

1.2.4HBoV-DNA病毒載量測定由本院中心實(shí)驗(yàn)室采用實(shí)時熒光定量PCR （RT-PCR）方法完成。

1.3統(tǒng)計方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料采用2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，組間HBoV病毒載量計量資料采用Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)。＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HBoV檢出情況所有219份樣本中，HBoV檢出22份，陽性檢出率為10.05%。其中男性14例（63.6%），女性8例（36.4%）；最小年齡為4個月，最大4歲8個月，平均年齡為1歲7個月；春季5例，夏季4例，秋季6例，冬季7例，一年四季均可見陽性檢測患兒，檢出率季節(jié)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（2=0.17，=0.68）。

2.2HBoV病毒載量與臨床分析

2.2.1HBoV檢出患兒病毒載量與臨床感染情況分析所有 HBoV檢出病例中，普通喘息患兒13例（59.1%），重癥患兒 9例（40.9%）。協(xié)同感染 15例（68.2%），獨(dú)立感染7例（31.8%）。普通感染與重癥感染患兒HBoV病毒載量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（=2.14，＞0.05）。協(xié)同感染與獨(dú)立感染患兒HBoV病毒載量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（=3.95，＞0.05）。見表2。

表2　HBoV病毒載量在不同臨床感染情況中的分析

2.2.2HBoV協(xié)同感染情況與臨床情況分析HBoV陽性檢測的兒童中，協(xié)同感染組患兒中12例為雙重感染，3例為三重感染，協(xié)同感染病原學(xué)檢查主要為呼吸道合胞病毒和支原體，具體檢出情況見表3。

表3　HBoV陽性兒童病原學(xué)檢出率

3　討論

近年來研究發(fā)現(xiàn)，HBoV是與兒童呼吸道疾病密切相關(guān)的一種新型細(xì)小病毒，但其發(fā)病規(guī)律及致病機(jī)制至今仍不十分清楚［2］。目前國內(nèi)外有關(guān)兒童喘息與HBoV感染的相關(guān)性報道較少，筆者通過對2009年11月至2010年12月間收集的急性下喘息兒童的鼻咽部抽吸物（NPA）樣本進(jìn)行病原學(xué)分析，檢測到22例博卡病毒感染陽性樣本，陽性檢測率為10.05%；符合目前報道的1.8%～19%的波動范圍［5］，而本文的檢測結(jié)果缺乏明顯的季節(jié)性流行趨勢，這可能與樣本納入標(biāo)準(zhǔn)、地域差異及實(shí)驗(yàn)設(shè)計的不統(tǒng)一有關(guān)。

目前國內(nèi)外缺乏有關(guān)兒童HBoV感染與喘息的相關(guān)性報道，有限的報道對這方面描述充滿爭議。Deerojanawong等［6］學(xué)者發(fā)現(xiàn)HBoV的病毒載量在5歲以下喘息患兒中明顯增高，但病毒載量與患兒喘息發(fā)作程度并不一致，亦有學(xué)者認(rèn)為高的HBoV病毒載量提示可能加重患兒喘息程度并延長住院時間［7］。而新近有報道采取不同的隊(duì)列，對有早產(chǎn)史及足月的下呼吸道感染兒童分別進(jìn)行NPA采樣后進(jìn)行病原學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)HBoV無論單獨(dú)感染還是合并感染均可在兩組喘息患兒NPA樣本中檢出，并且與兩組患兒喘息發(fā)病嚴(yán)重程度相關(guān)性并不明顯，提示盡管HBoV與兒童喘息性疾病密切相關(guān)，但并不是唯一因素［8］，新近Ting等［9］通過Meta分析進(jìn)一步肯定了這種推論。本文結(jié)果顯示，HBoV與兒童喘息性疾病密切相關(guān)，病毒載量與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)性并不明顯。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Ting等［9］的結(jié)論有部分相似之處，但本文結(jié)果提示普通喘息患兒與重癥患兒HBoV病毒載量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而在HBoV感染陽性的重癥患兒病例中，均為混合感染，這說明在嬰幼兒急性感染情況下，病毒復(fù)制的數(shù)量與疾病的進(jìn)展及嚴(yán)重程度不一定有關(guān)；而要綜合分析患兒的臨床情況或者綜合分析各類型病原體的感染情況，HBoV感染不一定是重癥病例的主要病原體，但在多重感染的情況下可能會加重疾病的嚴(yán)重程度。

研究顯示，喘息是小兒呼吸道HBoV感染的重要臨床癥狀表現(xiàn)的主要形式［9］，與筆者所納入的病例臨床特征相似，而且在本樣本中，有大量危重癥的喘息病例，提示該年齡階段可能是HBoV重癥感染的危險人群，有推測母傳抗體保護(hù)作用的減退可能是其重要原因之一［10］。在筆者納入的病例中，單獨(dú)感染患兒較混合感染患兒病毒載量無明顯差異，類似結(jié)論在國內(nèi)外少有報道。推測HBoV雖然可以獨(dú)立誘發(fā)兒童呼吸道喘息性疾病，但在混合感染情況下并不一定起主導(dǎo)致病作用?？偟膩砜?，由于多數(shù)患兒為混合感染，且感染病原體的情況多樣，所以很難完全獨(dú)立地評價HBoV的致病機(jī)制，這也加大了獨(dú)立分析其臨床表現(xiàn)的困難性。

綜上所述，HBoV在伴喘息發(fā)作患兒中存在著較高的檢出率，是引發(fā)兒童喘息的另一重要病原。目前尚缺乏有關(guān)HBoV感染后有關(guān)呼吸道病理生理學(xué)改變的報道，有限的分子生物學(xué)研究提示炎癥介質(zhì)的變化與HBoV病毒載量相關(guān)性并不明顯［7］，且缺乏長期隨訪性研究，所以對于HBoV引起嬰幼兒喘息性疾病的主要機(jī)制以及更大范圍的流行病學(xué)資料等還需進(jìn)一步研究，以促進(jìn)兒童喘息性疾病的治療和預(yù)防。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.04.044

R725.6

A

1671-0800（2016）04-0500-03

2015-11-10

（本文編輯：姜曉慶）

寧波市社會發(fā)展科研項(xiàng)目（2009C50023）

315012寧波，寧波市婦女兒童醫(yī)院

朱利華，Email:xuhuiqing 413@sina.com