康欣欣唐志鵬王立娟劉琳琳吳中華（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)文獻(xiàn)研究所，上海 010；.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院脾胃病研究所，上海 000；.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院北院，上海 01999；.上海中醫(yī)藥大學(xué)科技實(shí)驗(yàn)中心，上海 010）

2.1 一般情況觀察 實(shí)驗(yàn)前，兩組動(dòng)物活動(dòng)、飲食正常；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，相較正常組，熱刺激組大鼠興奮度增高，對(duì)外界刺激易激動(dòng)，反應(yīng)激烈，進(jìn)食量及飲水增加，大小便同時(shí)增多。兩組每日平均體質(zhì)量走勢(shì)如圖1所示，熱刺激組與正常組相比，體質(zhì)量較輕，且差距逐漸加大（P＜0.05），但體質(zhì)量增速無(wú)明顯差異。

·實(shí)驗(yàn)報(bào)告·

熱刺激對(duì)大鼠下丘腦神經(jīng)損傷相關(guān)因子作用研究*

康欣欣1，2唐志鵬2△王立娟2劉琳琳3吳中華4
（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)文獻(xiàn)研究所，上海 201203；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院脾胃病研究所，上海 200032；3.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院北院，上海 201999；4.上海中醫(yī)藥大學(xué)科技實(shí)驗(yàn)中心，上海 201203）

目的 觀察熱刺激后，下丘腦瞬時(shí)電位感受器陽(yáng)離子通道V1子類（TRPV1）、α-CGRP、β-CGRP、生長(zhǎng)阻滯和DNA損傷基因（Gadd45a）及生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43（Gap43）的mRNA含量，探討外周熱刺激狀況下，神經(jīng)中樞的應(yīng)答狀況。方法 20只Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組與熱刺激組，熱刺激組用熱的辣椒乙醇溶液灌胃及熱烘飼養(yǎng)法飼養(yǎng)2周，觀察大鼠活動(dòng)、飲食及大小便狀況，體視顯微鏡及HE染色法觀察大鼠胃黏膜病理改變。同時(shí)用RT-PCR法檢測(cè)兩組下丘腦的TRPV1、α-CGRP、β-CGRP、Gadd45a及GAP43的mRNA表達(dá)情況。結(jié)果 熱刺激組大鼠興奮度增高，飲食及大小便都增加，但體質(zhì)量增長(zhǎng)減緩，體視顯微鏡及病理切片觀察顯示胃黏膜充血水腫，5種mRNA含量均明顯升高（P＜0.05）。結(jié)論 外周熱刺激不但引發(fā)末梢感受器的組織損傷，也引發(fā)了下丘腦的神經(jīng)細(xì)胞損傷，同時(shí)中樞產(chǎn)生活躍的組織修復(fù)活動(dòng)，并增加神經(jīng)遞質(zhì)的分泌，加強(qiáng)對(duì)溫度調(diào)控信號(hào)的傳遞。

熱刺激 TRPV1 CGRP Gadd45a GAP43

【Abstract】Objective：To observe the concentration of TRPV1，α-CGRP，β-CGRP，Gadd45a and GAP43 in hypothalamus after thermal stimulation，and to investigate the response of nerve centers to peripheral hot stimulus.Methods：20 Wistar rats were randomly divided into 2 groups：the normal group and the thermal damage group.The thermal damage group was fed in warm condition for two weeks by stomach tube with a hot mixed solution made by ethanol and peppers.After that，the conditions of movement，eating and drinking，urine and stool of the rats were observed.Then the Wistars's gastric mucosal lesions were also studied with stereo microscope and HE staining method.At the same time，the mRNA expression condition of TRPV1，α-CGRP，β-CGRP，Gadd45a and GAP43 in hypothalamus were measured with the Real time-PCR method.Results：The rats′excitement level，diet amount，urine and stool were all enhanced.However，their weight increasing rate was reduced.Stereo microscope observation and Pathological examination all showed a mucosal hyperemia and edema.The concentrations of 5 mRNAs all significantly increased（P＜0.05）.Conclusion：The peripheral thermal stimulus damage not only the outer issues，but also the nerve cells in the hypothalamus.At the same time，the nerve centers result in an active issue recovery，and increase the output of neurotransmitter to enhance the transmission of thermoregulation.

【Key words】Thermal stimulus；TRPV1；CGRP；Gadd45a；GAP43

維持體溫的相對(duì)恒定是機(jī)體一切生理活動(dòng)的基礎(chǔ)。經(jīng)典的體溫調(diào)節(jié)模式是：致熱源或者致冷源刺激溫度感受器，傳入神經(jīng)將刺激信息傳入體溫調(diào)節(jié)中樞，中樞發(fā)出降溫或升溫的調(diào)控指令，該指令經(jīng)過(guò)傳出神經(jīng)進(jìn)入外周效應(yīng)器，引起內(nèi)分泌腺、骨骼肌、皮膚血管和汗腺等組織、器官活動(dòng)的改變，從而調(diào)整產(chǎn)熱和散熱的過(guò)程，諸如：毛孔擴(kuò)張或收縮、汗液分泌增加、肌肉收緊、血流加速或減緩等反應(yīng)［1］。引起溫度升高的熱刺激中有外周環(huán)境溫度、濕度，飲入熱性食物、化學(xué)藥物、炎癥感染等多種因素。人們通過(guò)截?cái)嘞虑鹉X以上腦組織及下丘腦以下腦組織的方法，確定下丘腦為體溫調(diào)節(jié)的中樞。傳統(tǒng)認(rèn)為，溫度的刺激能引發(fā)外周的組織損傷，而中樞對(duì)于溫度刺激的應(yīng)答機(jī)制尚不清楚。辣椒被認(rèn)為是一種熱性食物，引發(fā)人體的熱性改變，因此可以作為一種內(nèi)源性熱刺激源［2］。由于熱刺激引起的中樞應(yīng)答機(jī)制缺乏實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持，基于此，本實(shí)驗(yàn)嘗試對(duì)大鼠進(jìn)行熱的辣椒乙醇溶液刺激，以此模擬內(nèi)源性的熱刺激，同時(shí)將大鼠至于熱烘環(huán)境中，模擬外源性的熱刺激，病理觀察胃黏膜損傷，并用realtime-PCR方法檢測(cè)大鼠下丘腦的瞬時(shí)電位感受器陽(yáng)離子通道V1子類（TRPV1）、α-CGRP、β-CGRP、生長(zhǎng)阻滯和DNA損傷基因（Gadd45a）與生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43（Gap43）的mRNA表達(dá)，研究大鼠下丘腦對(duì)熱刺激之后的應(yīng)答機(jī)制，以探討體溫中樞在熱刺激之后的反應(yīng)機(jī)理?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

選用清潔級(jí)雄性健康wistar大鼠20只，體質(zhì)量（180±20）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2012-0001。大鼠為同一批繁殖并在實(shí)驗(yàn)觀察期間嚴(yán)格控制在同一飼養(yǎng)環(huán)境和條件下。在上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（SXYK滬2009-0069）清潔級(jí)動(dòng)物房適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后開始實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由攝食飲水，飼養(yǎng)室光照12 h，黑暗12 h，室溫22～24℃，濕度45%～65%。

1.2 儀器

Adventurer Ohaus AR1140/C型電子分析天平（美國(guó)奧豪斯公司）；Sonics超聲細(xì)胞破碎儀（美國(guó)SONICS ＆MATERIALS公司）；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)Centrifuge 5417R（德國(guó)EPPENDORF公司）；實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀7500 fast（美國(guó)ABI）；紫外分光光度計(jì)752（上海第三分析儀器廠）高壓蒸汽消毒器YXQ.SGH.280（上海醫(yī)用核子儀器廠）；低溫冰箱MDF-292（SANYO CO.）體視顯微鏡；DV4 quotation。

1.3 試劑

DEPC，DEPC處理水（天根生化科技公司）；異丙醇，氯仿，75%預(yù)冷乙醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）及70%、10%乙醇（自配）；Trizol液，反轉(zhuǎn)錄試劑盒，熒光定量PCR試劑盒（takara）。0.5 mL DEPC加于500 mL雙蒸水中，室溫下?lián)u床過(guò)夜，加熱消毒后密封保存。

1.4 實(shí)驗(yàn)藥物

干辣椒（茄科植物，辣椒屬，簇生椒，Capsicum annuumvar.fasciculatum），購(gòu)自上海禾煜貿(mào)易有限公司。將干辣椒50℃烘干，烘干至衡重，即稱重。粉碎成細(xì)末，過(guò)80目篩。將粉碎后的辣椒干以70%酒精水浴70℃浸泡3次，每次時(shí)間為1 h，料液比為1∶12。將萃取液減壓水浴蒸餾，蒸餾溫度為60℃，得油狀物。將蒸餾后的提取物以10%乙醇溶解，并定容至料液比為0.3 g/mL。將辣椒油密封置于4℃冷藏備用。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 分組與處理 將20只Wistar大鼠隨機(jī)數(shù)字表達(dá)法分成兩組，正常組、熱刺激組各10只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，開始灌胃。灌胃劑量為0.02 mL/g。正常組予0.9%氯化鈉注射液，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為室溫22～24℃，濕度45%～65%。熱刺激組予10%乙醇的辣椒溶液（60℃），每日1次，保持飼養(yǎng)環(huán)境溫度30℃，濕度45%～65%。造模灌胃熱烘共7 d，再恢復(fù)正常飼養(yǎng)7 d，制成熱刺激模型。觀察大鼠行為、體質(zhì)量、飲水進(jìn)食、大小便量、性狀。自賁門處至幽門處切除大鼠胃，并沿胃大彎剪開，以0.9%氯化鈉注射液沖洗內(nèi)容物后，以10%甲醛固定，以蘇木精-伊紅（HE）染色法制備病理切片。術(shù)前禁食不禁水24 h，以CO2窒息法處死大鼠，摘取大鼠下丘腦，置-70℃保存。

1.5.2 mRNA抽提 取組織50 mg，加入1 mL Trizol液，充分勻漿；22℃，靜置5 min；加入氯仿0.2 mL，顛倒混勻15 s；22℃，靜置3 min；4℃，14000 r/min離心15 min。取上清液0.5 mL；加入0.5 mL異丙醇，混勻；22℃，靜置10 min；4℃，14000 r/min離心10 min。棄上液，加入1 mL 4℃75%乙醇，充分混勻；4℃，10000 r/min離心5 min。棄上液，真空干燥5 min；用40 μL DEPC處理水溶解，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.3 RT-PCR 1）分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的濃度。取樣本5μL加入石英比色杯內(nèi)，加入雙蒸水1 mL，充分混勻。與雙蒸水對(duì)照。讀260 nm和280 nm測(cè)得值，當(dāng)260 nm與280 nm的比值在1.8與2.0之間時(shí)，表示樣本RNA純度較高，并記錄。計(jì)算：OD260為1時(shí)，為40 μg RNA。所以計(jì)算如下：樣品總RNA含量 （μg/μL）= OD260×稀釋倍數(shù)×40/1000；樣本RNA含量 （μg/μL）= OD260×200×40/1000=OD260×8。2）反轉(zhuǎn)錄合成DNA。在20 μL反應(yīng)體系中分別加入組織總RNA 2 μg、5XRT master mix 4 μL加水至20 μL?；靹?，離心，孵育37℃15 min，85℃5 s，-20℃保存。3）PCR擴(kuò)增。所用引物序列為：TRPV1 Forward 5′-AGTAACTGCCAGGA GCT GGA-3′，Reverse 5′-GTGTCATTCTGCCATTGTG-3′；α-CGRP Forward 5′-GCTGCATTGGTGCAGAACTA-3′，Reverse 5′-GTGGGCACAAAGTTGTCCTT-3′；β-CGRP Forward 5′-CCCAGAAGAGATCCTGCAAC-3′，Reverse 5′-GTGGGCACAAAGTTGTCCTT-3′；Gadd 45a Forward 5′-TAACTGTCGGCGTGTACGAG-3′，Reverse 5′-GCAACAGAAAGCACGAATGA-3′；Gap43 Forward 5′-GGCTCTGCTACTACCGATGC-3′，Reverse 5′-GACGGCGAGTTATCAGTGGT-3′。在20 μL反應(yīng)體系中分別加入反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2 μL、Sybrgreen 10 μL、上游引物（5 μmol/L）1 μL、下游引物（5 μmol/L）1 μL、RoxDye（Ⅱ）0.4 μL，加水至20 μL。PCR擴(kuò)增條件為：（1）95℃30 s；（2）95℃3 s，60℃30 s，40個(gè)循環(huán)；（3）擴(kuò)增產(chǎn)物分析：數(shù)據(jù)采用儀器自帶軟件ABI 7500 fast Software v2.0分析。TRPV1、α-CGRP、β-CGRP、Gadd45a 與GAP43表達(dá)水平以它們與actin的相對(duì)表達(dá)量來(lái)計(jì)算。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較，若符合方差齊性和正態(tài)分布，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；若不符合方差齊性和正態(tài)分布，則采用非參數(shù)檢驗(yàn)的Wilcoxon檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況觀察 實(shí)驗(yàn)前，兩組動(dòng)物活動(dòng)、飲食正常；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，相較正常組，熱刺激組大鼠興奮度增高，對(duì)外界刺激易激動(dòng)，反應(yīng)激烈，進(jìn)食量及飲水增加，大小便同時(shí)增多。兩組每日平均體質(zhì)量走勢(shì)如圖1所示，熱刺激組與正常組相比，體質(zhì)量較輕，且差距逐漸加大
（P＜0.05），但體質(zhì)量增速無(wú)明顯差異。

圖1 兩組體質(zhì)量變化趨勢(shì)

2.2 兩組胃病理組織體視顯微鏡觀察 見圖2。正常組大鼠胃體色淡紅，隱約可見少量脈絡(luò)，質(zhì)軟有彈性。熱刺激組大鼠胃體色鮮紅，有明顯暗紅色瘀斑，黏膜下血管清晰可見，質(zhì)略硬而有緊實(shí)感。

圖2 兩組胃體病理組織（HE染色，12倍）

2.3 兩組胃病理切片 見圖3。正常組大鼠胃黏膜絨毛柱狀上皮細(xì)胞排列整齊，腺體形態(tài)規(guī)則，肌層紋理清晰，黏膜下血管無(wú)血細(xì)胞充盈。熱刺激組大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞排列尚整齊，部分核體增大，染色加深，肌層變薄，黏膜下血管充盈，淤積大量紅細(xì)胞，并出現(xiàn)黏膜下水腫。

圖3 兩組胃黏膜病理組織（HE染色，100倍）

2.4 兩組mRNA表達(dá)比較 見表1。5種mRNA的表達(dá)，熱刺激組均高于正常組，其中TRPV1、Gadd45a與Gap43有極明顯差異 （P＜0.01），α-CGRP與β-CGRP有較明顯差異（P＜0.05）。

表1 各組小鼠5種mRNA表達(dá)的比較（±s）

表1 各組小鼠5種mRNA表達(dá)的比較（±s）

與正常組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 n β-CGRP Gadd45a Gap43正常組 10 0.824±0.058 0.730±0.053 1.059±0.033熱刺激組 10 0.978±0.121*0.952±0.127**1.482±0.061**TRPV1 α-CGRP 0.976±0.131 0.757±0.085 1.536±0.279**0.927±0.145*

3 討 論

熱邪是中醫(yī)學(xué)外邪致病理論中十分重要的一個(gè)致病因素，同時(shí)熱證也是重要的證型之一，而關(guān)于熱邪與熱證的本質(zhì)目前尚處于探討階段。熱刺激對(duì)于機(jī)體產(chǎn)生的影響以往多集中于與刺激源接觸的刺激末端，而對(duì)于中樞的熱回饋研究較少。本實(shí)驗(yàn)從溫度感受器、神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)因子、神經(jīng)損傷修復(fù)因素的角度探討熱刺激對(duì)神經(jīng)中樞的影響機(jī)制。

TRPV1是一個(gè)典型的溫度敏感型通道，當(dāng)溫度＞43℃時(shí)即被激活［3］。通道開放，引起細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流和胞內(nèi)Ca2+庫(kù)的釋放，升高胞內(nèi)Ca2+濃度，進(jìn)而激活一系列細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，形成動(dòng)作電位，使中樞產(chǎn)生燒灼樣疼痛等不適感［4］。本實(shí)驗(yàn)中，60℃辣椒乙醇溶液的內(nèi)刺激及30℃飼養(yǎng)環(huán)境的外刺激，使得大鼠接收熱刺激的感應(yīng)器將信號(hào)傳遞至中樞，引發(fā)中樞的“熱感受”，其表現(xiàn)即為下丘腦的TRPV1含量升高。

降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）神經(jīng)信號(hào)傳遞中重要的一種生物多肽，廣泛分布于腦內(nèi)及與體表感覺有關(guān)的脊髓背角和初級(jí)傳入纖維，特別是感覺神經(jīng)元的胞體和末梢內(nèi)［5］，通常分為2類：α-CGRP和β-CGRP或者CGRP1和CGRP2。它參與多種生理活動(dòng)，如嗅覺、聽覺、學(xué)習(xí)、攝食、自主神經(jīng)功能、運(yùn)動(dòng)活動(dòng)、傷害性感覺的形成與維持及血管擴(kuò)張等。當(dāng)加載損害性刺激時(shí)，如：炎癥介質(zhì)、缺氧、甲狀腺素等皆可促進(jìn)CGRP從神經(jīng)末梢的釋放，營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)的神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）［6］和膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）［7］也可以提高神經(jīng)的CGRP表達(dá)，這種現(xiàn)象常見于神經(jīng)的損傷修復(fù)反應(yīng)中，表明CGRP表達(dá)增加是神經(jīng)細(xì)胞活性提高的表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了由外周的熱刺激，以及內(nèi)在的辣椒乙醇溶液促進(jìn)了作為溫度調(diào)節(jié)中樞的下丘腦的CGRP的釋放，提示CGRP是傳導(dǎo)外來(lái)熱刺激及傷害性刺激的神經(jīng)遞質(zhì)，同時(shí)也是機(jī)體對(duì)這類刺激的產(chǎn)生應(yīng)答的結(jié)果，即機(jī)體通過(guò)增加CGRP的分泌來(lái)傳遞信號(hào)，調(diào)控外周效應(yīng)器對(duì)刺激產(chǎn)生應(yīng)答。

Gadd45a，又名DNA損傷誘導(dǎo)基因（DDIT1），它在調(diào)控細(xì)胞凋亡中具有重要作用，能通過(guò)G1-S期的控制參與維持基因組的穩(wěn)定性［8］，也能誘導(dǎo)細(xì)胞G2-M期的阻滯。Gadd45a在多種損傷因素如：電離輻射、紫外線照射、烷化劑、二甲基苯蒽、血清饑餓、各種化療藥物等的作用下表達(dá)迅速上調(diào)［9］。因此，Gadd45a表達(dá)增加是細(xì)胞損傷和修復(fù)的信號(hào)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)熱刺激之后，Gadd45a明顯升高，表明外周的細(xì)胞損傷已經(jīng)出現(xiàn)，并進(jìn)而影響到中樞神經(jīng)產(chǎn)生修復(fù)性的應(yīng)答。

Gap43是一種分子量為43 kDa的膜相關(guān)蛋白，主要分布于軸突生長(zhǎng)錐以及突觸前膜。它是一種軸突出芽和突觸再生的標(biāo)志性蛋白［10］，又是一種能與鈣調(diào)蛋白（CaM）結(jié)合的磷酸化蛋白，具有調(diào)節(jié)鈣緩沖和鈣調(diào)蛋白效力的功能［11］。一般在神經(jīng)元內(nèi)Ca2+濃度較低，GAP-43與CaM緊密結(jié)合，并將CaM隔離于膜區(qū)域［12］，當(dāng)神經(jīng)元受到外界刺激時(shí)引起Ca2+內(nèi)流。雖然Ca2+內(nèi)流可以促進(jìn)神經(jīng)元的興奮和遞質(zhì)的釋放，但Ca2+過(guò)度內(nèi)流可誘導(dǎo)GAP-43與CaM解離，隨即GAP-43磷酸化［13］?；罨腉AP-43與細(xì)胞骨架成分相互作用，為神經(jīng)元軸突的修復(fù)和再生提供了營(yíng)養(yǎng)支持，軸突內(nèi)的GAP-43含量增加，待建立起完整的突觸聯(lián)系后，GAP-43去磷酸化并與CaM重新結(jié)合，GAP-43水平才急劇下降，從而形成一個(gè)反饋環(huán)［14］，因此在發(fā)育成熟的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，GAP-43的表達(dá)可作為評(píng)估軸突損傷和再生反應(yīng)的一個(gè)可靠指標(biāo)［15］。本實(shí)驗(yàn)中GAP43含量明顯升高，表明熱刺激已經(jīng)引發(fā)神經(jīng)中樞的損傷，且這種修復(fù)活動(dòng)正進(jìn)入活躍狀態(tài)。

本實(shí)驗(yàn)熱刺激動(dòng)物模型給予內(nèi)外雙重?zé)岽碳?，符合中醫(yī)學(xué)嗜食辛辣或感受溫?zé)嵬庑暗臒嶙C成因。熱刺激1周，再消除外界刺激，恢復(fù)正常喂養(yǎng)，以檢測(cè)前期熱刺激對(duì)大鼠體質(zhì)形成較穩(wěn)定的影響。該模型依據(jù)病因造模，符合熱因素致病的機(jī)理。實(shí)驗(yàn)中，大鼠予熱刺激之后，情緒活躍，代謝加速，出現(xiàn)易激好動(dòng)，飲食增加，大小便增加的現(xiàn)象，同時(shí)體視顯微鏡觀察和病理切片顯示大鼠胃受到物理和化學(xué)的熱刺激，黏膜下血管明顯充血水腫。因此證明，通過(guò)60℃辣椒乙醇溶液的熱刺激，大鼠體溫調(diào)控系統(tǒng)的外周感應(yīng)器環(huán)節(jié)出現(xiàn)了組織損傷。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持以下結(jié)論，內(nèi)外熱刺激損傷觸及外周末梢組織，而且通過(guò)分布于外周的溫度感應(yīng)器將熱信號(hào)傳遞到神經(jīng)中樞，引發(fā)中樞神經(jīng)細(xì)胞的TRP通道打開，胞外Ca2+內(nèi)流，胞內(nèi)Ca2+在CGRP作用下進(jìn)入胞質(zhì)內(nèi)，引發(fā)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，造成神經(jīng)中樞的損傷，并進(jìn)而引發(fā)GAP43與CaM解離，GAP43磷酸化之后，與細(xì)胞骨架成分相互作用，為神經(jīng)元細(xì)胞的修復(fù)再生提供營(yíng)養(yǎng)支持，引發(fā)相應(yīng)的損傷修復(fù)行為。同時(shí)CGRP進(jìn)入神經(jīng)元細(xì)胞的突出末端，將神經(jīng)中樞對(duì)熱刺激的應(yīng)答信號(hào)傳遞到外周效應(yīng)器，引發(fā)相應(yīng)的溫度調(diào)控和適應(yīng)過(guò)程。

因此，可以初步認(rèn)為，過(guò)量的熱刺激不但引發(fā)末梢組織細(xì)胞的損傷，同樣也會(huì)通過(guò)體溫調(diào)控軸，造成下丘腦神經(jīng)中樞的損傷修復(fù)反應(yīng)。至于不同量熱刺激引發(fā)的機(jī)體反應(yīng)以及下丘腦的具體反應(yīng)部位及機(jī)制則需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。同時(shí)，以上指標(biāo)也可以為熱本質(zhì)研究提供參考。

［1］ 朱大年，王庭槐.生理學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：235-237.

［2］ 楊萬(wàn)斌，文彬，張凌杭，等.大鼠胃熱證模型造模方法研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2015，40（18）：3644-3649.

［3］ Caterina MJ，Schumacher MA，Tominaga M，et al.The capsaicin receptor：a heat-activated ion channel in the pain pathway［J］.Nature，1997，389（6653）：816-824.

［4］ Tiruppathic，Ahmmed GU，Vogel SM，et al.Ca2+signaling，TRP channels，and endothelial permeability［J］.Microcirculation，2006，13（8）：693-708.

［5］ Ma W，Chabot JG，Powell KJ，et al.Localization and modulation of calcitonin gene-related peptide-receptor component protein-immunoreactive cells in the rat central and peripheral nervous systems［J］.Neuroscience，2003，120（3）：677-694.

［6］ Hannila SS，Kawaja MD.Distribution of central sensory axons in transgenic mice overexpressing nerve growth factor and lacking functional p75 neurotroph in receptor expression［J］.Eur J Neurosci，2003，18（2）：312-322.

［7］ Ramer MS，Bradbury EJ，Michael GJ，et al.Glial cell linederived neurotrophic factor in creases calciton in gene-related peptide immunoreactivity in sensory and motoneurons in vivo［J］.Eur J Neurosci，2003，18（10）：2713-2721.

［8］ Hollander MC，Philburnrt，Pattersonad，et al.Genomic instability in Gadd45a-/-cells is coupled with S-phase checkpoint defects［J］.Cell Cycle，2005，4（5）：704-709.

［9］ 李云峰，錢海利，林晨.Gadd45a的表達(dá)調(diào)控與功能［J］.醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志，2007，4（5）：434-438.

［10］CarmichaelST.Plasticityofcorticalprojectionsafter stroke［J］.Neuroscientist，2003，9：64-75.

［11］Gerendasy D.Homeostatic tuning of Ca2+signal transduction by members of the calpacitin protein family［J］.J Neurosci Res，1999，58：107.

［12］劉玲，陳燕惠，陳達(dá)光.神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白在腦損傷修復(fù)中的作用［J］.中國(guó)病理生理雜志，2004，20（9）：1739-1742.

［13］Trejo O，Reed JA，Prieto VG.Atypical cells in human cutaneous reexcision scars for melanoma express p75NGFR，C56/ N-CAM and GAP-43：evidence of early Schwann cell differentiation［J］.Cutan Pathol，2002，29：397.

［14］Mosevitsky MI.Nerve Ending “Signal”proteins GAP-43，MARCKS，and BASP1［J］.Int Rev Cytol，2005，24：245.

［15］Dijk F，Bergen AA，Kamphuis W.GAP-43 expression is upregulated in retinal ganglion cells after ischemia/reperfusioninduced damage［J］.Exp Eye Res，2007，84：858-867.

Study on the Effect of Thermal Stimulation on the Related Factors of Hypothalamic Nerve Injury in Rats

KANG Xinxin，TANG Zhipeng，WANG Lijuan，et al.Institute of Traditional Chinese Medicine Literature，Gastroenterology department in Longhua Hospital Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 201203，China.

·實(shí)驗(yàn)報(bào)告·

R338.2+7 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

1004-745X（2016）08-1543-05

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.08.027

上海中醫(yī)藥大學(xué)橫向課題“溫胃方、清胃方防治胃寒證和胃熱證的實(shí)驗(yàn)研究”支持（編號(hào)：778）

（電子郵箱：zhipengtang@sohu.com）

2016-03-14）