張 燕

（新疆實驗動物研究中心，新疆烏魯木齊 830002）

不同環(huán)境設(shè)施內(nèi)BALB/C裸鼠兩種繁育方式的生產(chǎn)性能初步比較

張 燕

（新疆實驗動物研究中心，新疆烏魯木齊 830002）

BALB/C裸鼠在不同環(huán)境設(shè)施內(nèi)（SPF屏障系統(tǒng)和IVC獨立通風系統(tǒng)）分別采取1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）和2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）繁育方式，觀察記錄雌鼠交配分娩間隔、胎數(shù)、平均產(chǎn)仔數(shù)、平均純合仔鼠及純合仔鼠離乳率等數(shù)據(jù)，分析不同環(huán)境設(shè)施內(nèi)BALB/C裸鼠在2種繁育方式中的生產(chǎn)性能。結(jié)果顯示，4組裸鼠的繁殖性能差異在各胎次內(nèi)不顯著（P＞0.05），而2種環(huán)境中繁育方式為2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）組中純合仔鼠離乳率均高于1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）組。SPF屏障系統(tǒng)和IVC獨立通風系統(tǒng)均能保證BALB/C裸鼠的正常生產(chǎn)繁殖性能，2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）的繁育方式可提高純合仔鼠離乳率。

BALB/C裸鼠 SPF屏障系統(tǒng) IVC獨立通風系統(tǒng) 生產(chǎn)性能 繁育方式

由于免疫缺陷，裸鼠是應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究，特別在腫瘤學、免疫學、毒理病理學、生物制品和新型藥品的安全性評價及優(yōu)選等方面是極好的模型動物［1］。近年來，BALB/C裸鼠生產(chǎn)繁殖一般在SPF屏障系統(tǒng)、隔離包、層流柜、IVC等系統(tǒng)內(nèi)［2］。由于裸鼠易受病原體感染，裸鼠的飼養(yǎng)和繁殖要求條件比較嚴格，國內(nèi)外飼育者對提高裸鼠的存活期和繁殖性能進行了許多研究，我國早有這方面的經(jīng)驗報道［3］。作者通過統(tǒng)計分析新疆實驗動物研究中心SPF屏障系統(tǒng)內(nèi)BALB/C裸鼠種鼠繁育性能的各項指標，初步總結(jié)得出裸鼠種鼠血緣擴大群中大量生產(chǎn)裸鼠可采用的繁育方式及環(huán)境經(jīng)驗。

1 材料與方法

1.1 環(huán)境設(shè)施

1.1.1 SPF屏障系統(tǒng)

新疆實驗動物研究中心SPF屏障實驗室，本實驗室是2003年正式投入運轉(zhuǎn)使用，并在2005年通過國家食品藥品監(jiān)督管理局實驗室認證管理中心的驗收，由新疆實驗動物研究中心與新疆維吾爾醫(yī)藥研究所共同籌建的藥物非臨床安全性評價中心，溫度變化范圍18℃～22℃。

1.1.2 IVC獨立通風系統(tǒng)

IVC-Ⅱ型（智能型）獨立送風隔離籠具（蘇州市馮氏實驗動物設(shè)備有限公司），溫度變化范圍24℃～28℃。

由于IVC籠具放置于SPF屏障實驗室內(nèi)，兩種環(huán)境設(shè)施的照明控制均設(shè)定為12h明暗交替，相對濕度變化范圍均為30%～60%［4-5］。

1.2 實驗動物

本中心引自中國科學院上海動物中心國家種子庫BALB/C裸鼠種鼠，雌雄種鼠均為2～3月齡，雌種鼠40只，基因型為（nu/+），雄鼠30只，基因型（nu/nu）。

1.3 分組

BALB/C裸鼠在SPF屏障系統(tǒng)和屏障內(nèi)IVC籠具中，分別采用1♀（nu/+）：1♂（nu/nu）和2♀（nu/+）：1♂（nu/nu）兩種交配方式。SPF屏障系統(tǒng)內(nèi)裸鼠種鼠1：1方式交配的10♀10♂為實驗組一，1：2方式交配的10♀5♂為實驗組二；屏障內(nèi)IVC籠具中裸鼠種鼠1：1方式交配的10♀10♂為實驗組三，1：2方式交配的10♀5♂為實驗組四。

1.4 繁育方式

飼育鼠料來自新疆實驗動物中心提供的全價種小鼠飼料（粗蛋白22.59 %，水分7.82 %，粗脂肪4.51 %，粗纖維2.04%，粗灰分6.68 %等），經(jīng)Co60放射滅菌處理。飲用水經(jīng)實驗動物飲用水處理器（杭州永潔達凈化科技有限公司）過濾，加鹽酸酸化至pH值為3.0～3.5，適量添加多維（超能精制魚肝油VAD3E預混料，濟南迅達康生物科技有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號：10071201）。飲水和飼料采用自由攝入方式。每周適量添加雞蛋和葵花籽。每周更換1～2 次飲水瓶和籠具。所有物品和器具進入SPF屏障系統(tǒng)前都必須進行嚴格消毒，可以耐受高壓蒸汽的物品經(jīng)由真空滅菌器（山東新華醫(yī)療器械廠）121℃，30min高壓滅菌進入屏障系統(tǒng)，不能耐受高壓的物品用0.02%的過氧乙酸擦拭物品表面，再經(jīng)傳遞窗紫外燈照射30min后進入屏障系統(tǒng)。BALB/C裸鼠生產(chǎn)管理工作均按照新疆實驗動物研究中心屏障系統(tǒng)實驗動物生產(chǎn)管理標準操作規(guī)程運作［4］。

飼養(yǎng)于IVC獨立通風系統(tǒng)的裸鼠種鼠，在超凈工作臺上用0.5 %過氧乙酸擦拭消毒籠具表面，更換無菌墊料，添加飲水、飼料、雞蛋和葵花籽［6］。

實驗組種鼠生仔后為確保純合子（nu/nu）幼鼠充分哺乳和健康成長，一般在仔鼠出生后第3 d左右保留部分健壯雌性雜合子（nu/+），根據(jù)仔鼠觸須的多少和性別剔除其余雜合子［7］，雜合子21d離乳，純合子28d離乳。在此期間，記錄裸鼠種鼠的生仔日期、胎次、生仔數(shù)、離乳日期、離乳純合子仔數(shù)。

1.5 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理

根據(jù)BALB/C裸鼠種鼠繁殖記錄卡的詳細數(shù)據(jù)資料，用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計學處理。

2 結(jié)果

各實驗組種鼠平均胎間隔、平均胎產(chǎn)仔數(shù)、平均胎產(chǎn)純合子數(shù)、純合子仔鼠離乳率等繁育性能相關(guān)數(shù)據(jù)見表1。各胎次內(nèi)四組實驗裸鼠種鼠繁殖性能均無明顯差異（P＞0.05）。

BALB/C裸鼠種鼠由國家種子庫引進后，在SPF屏障系統(tǒng)中，有兩只雄性種裸鼠（nu/nu）死亡；IVC獨立通風系統(tǒng)中的裸鼠種鼠交配繁殖正常，無死亡現(xiàn)象。引進的40只雌性裸鼠種鼠，實驗觀察期間有1只始終未見懷孕，第1胎種鼠懷孕率達到97.5%，第2胎和第3胎的生產(chǎn)繁殖中種鼠懷孕率為87.5%。

3 討論

（1）由于BALB/C純合子裸鼠對飼養(yǎng)室內(nèi)溫濕度要求較高［5］，裸鼠種鼠自中國科學院上海動物中心國家種子庫到新疆運輸過程漫長，新疆獨特的地理環(huán)境造成新疆秋冬季相對溫濕度較低，SPF屏障系統(tǒng)內(nèi)穩(wěn)定的通風換氣系統(tǒng)也影響使用，加濕設(shè)備對屏障實驗室大面積相對濕度的調(diào)控困難，可能是造成雄性純合子裸鼠種鼠死亡的一個原因。

（2）新疆實驗動物研究中心SPF屏障實驗室溫度變化范圍18℃～22℃，IVC獨立通風系統(tǒng)溫度變化范圍24℃～28℃，兩環(huán)境設(shè)施的照明控制均為12h明暗交替，相對濕度變化范圍為20%～30%，其中相對濕度與文獻相比較低［3，5，8］，各胎次的BALB/C裸鼠種鼠的繁育指標與文獻相比并未發(fā)現(xiàn)明顯差異。但是較高溫度的IVC獨立通風系統(tǒng)組（24℃～28℃）純合子裸仔鼠離乳率并未明顯高于SPF屏障組（18℃～22℃），可能是溫度較高而相對濕度較低的環(huán)境特點影響到純合子無被毛裸仔鼠的生長。因此，調(diào)節(jié)合適的相對濕度與溫度，可能會增加BALB/C裸鼠純合仔鼠離乳率。

（3）純合子雌性裸鼠（nu/nu）的乳腺發(fā)育不良，因此裸鼠的繁育方式通常采用♂（nu/+）：♀（nu/+）和♂（nu/nu）：♀（nu/+）。♂（nu/+）：♀（nu/+）的繁育方式從遺傳上來說只能得到約25%的純合子裸鼠，通常不采用此方式進行裸鼠生產(chǎn)群的建立。本次實驗中選定的是裸種鼠血緣擴大群中常用的♂（nu/ nu）：♀（nu/+）繁育法［3］。繁育方式為2♀：1♂的實驗組，在SPF屏障系統(tǒng)和IVC獨立通風系統(tǒng)內(nèi)飼育，其剔除部分雜合仔鼠后純合仔鼠離乳率均高于1♀：1♂組，初步證明兩雌性裸鼠同步妊娠分娩，共同哺育仔鼠的繁育方式可能提高裸鼠仔數(shù)及其離乳率，其可行性還需進一步通過實驗確認。雜合子裸鼠仔鼠（nu/+）天生強壯，具備極強的搶乳能力，嚴重影響同窩純合仔鼠的生長發(fā)育，根據(jù)吳芳潔等［7］報道，在仔鼠出生3d內(nèi)保留部分健壯雌性雜合子，剔除剩余雜合子仔鼠能夠提高純合子仔數(shù)裸鼠的離乳率，本實驗采用此經(jīng)驗，純合子裸鼠仔數(shù)離乳率均達到85%以上。

（4）根據(jù)文獻報道［3，5，8］和作者多年飼養(yǎng)實驗動物的經(jīng)驗，裸鼠等小鼠的種鼠繁殖性能在第2、3 胎各項指標表現(xiàn)為最好，可能是由于第1胎體成熟不夠完全、雌鼠種鼠母性經(jīng)驗不足和第4、5胎種鼠老齡化導致生殖機能下降。另外，裸鼠比近交系小鼠抵抗力差，繁殖周期稍長，為保證實驗動物的正常供應(yīng)，繁殖到第4胎要更換種鼠。本文為給生產(chǎn)實踐者提供更清晰的實驗數(shù)據(jù)，只對繁殖性能最佳的第2、3胎數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

表1　兩種環(huán)境BALB/C 系裸鼠不同繁育方式的生產(chǎn)性能

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