孫 濤，翁國斌，朱偉智，高文波，劉曉明，杜洲舸，周克文，周 永，鄭 斌，吳齊全

女性壓力性尿失禁動物模型的建立

孫 濤，翁國斌，朱偉智，高文波，劉曉明，杜洲舸，周克文，周 永，鄭 斌，吳齊全

目的 通過手術(shù)切除恥骨聯(lián)合的方法，建立女性壓力性尿失禁新西蘭兔動物模型。方法 健康清潔級雌性純種新西蘭兔40只，隨機(jī)分組分為實(shí)驗(yàn)組與對照組，各20只。實(shí)驗(yàn)組切開皮膚進(jìn)入腹腔，膀胱內(nèi)注入0.9%氯化鈉溶液，充盈膀胱，辨認(rèn)膀胱位置，游離膀胱及其周圍組織游離尿道周圍組織由尿道近端至尿道外口水平，沿著恥骨聯(lián)合兩側(cè)恥骨支及坐骨支起始部剪除恥骨聯(lián)合；對照組同實(shí)驗(yàn)組切開皮膚進(jìn)入腹腔，膀胱內(nèi)注入0.9%氯化鈉溶液，充盈膀胱，辨認(rèn)膀胱位置，即縫合手術(shù)切口。分別于手術(shù)前、手術(shù)后、術(shù)后3個月及術(shù)后6月測量腹壓漏尿點(diǎn)壓（ALPP）。結(jié)果 兩組手術(shù)前ALPP無差異（＞0.05）；對照組ALPP在術(shù)前、術(shù)后、術(shù)后3個月及6個月差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均＞0.05）；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后、術(shù)后3個月及6個月ALPP與術(shù)前相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均＜0.05）；術(shù)后3個月、6個月ALPP與術(shù)后相比呈先升高后降低的趨勢，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均＜0.05）。結(jié)論 去除恥骨聯(lián)合建立女性壓力性尿失禁動物模型具有可復(fù)制性強(qiáng)、操作簡單、成功率高及作用時間持久等特點(diǎn)，對進(jìn)一步研究女性壓力性尿失禁產(chǎn)生機(jī)理和治療具有一定的意義。

壓力性尿失禁；尿動力學(xué)檢查；動物模型

女性壓力性尿失禁(SUI)是泌尿外科十分常見的癥狀，影響著患者生活質(zhì)量。隨著我國老齡化程度的發(fā)展和衛(wèi)生保健強(qiáng)調(diào)生活質(zhì)量的提高，此病成為越來越引人注目的公共健康問題。為了更好地研究壓力性尿失禁的病理生理學(xué)發(fā)展進(jìn)程，評價干預(yù)措施對實(shí)驗(yàn)的影響，需要建立操作簡便、穩(wěn)定可靠、重復(fù)性強(qiáng)的理想動物模型，為女性壓力性尿失禁動物模型的基礎(chǔ)、臨床等各項研究提供一個支持平臺。本文采用新西蘭兔建立女性壓力性尿失禁動物模型，擬深入探討SUI發(fā)生機(jī)制及其應(yīng)對措施，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 健康清潔級雌性純種新西蘭兔 (寧波大學(xué)動物中心提供)40只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組及對照組，各20只。分籠飼養(yǎng)于室溫20～25℃，光線適中，清潔安靜的環(huán)境。實(shí)驗(yàn)操作過程符合中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動物的指導(dǎo)性意見》要求。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)寧波大學(xué)附屬泌尿腎病醫(yī)院倫理委員會論證、批準(zhǔn)實(shí)施。喂飼標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水。對照組平均月齡（5.81±0.15）個月，體質(zhì)量（2.83±0.35）kg；實(shí)驗(yàn)組平均月齡（5.77±0.48）個月，體質(zhì)量（2.88±0.27）kg。采用加拿大LABORIE尿動力檢測系統(tǒng)(型號UDS-E-130)尿動力學(xué)分析儀檢查膀胱壓力容積測定。兩組一般資料差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（＞0.05）具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 動物模型制備 實(shí)驗(yàn)組：將兔仰臥于兔臺加以固定，下腹部脫毛備皮，沿腹白線打開腹腔在尿道近恥骨聯(lián)合處剪開一個6 cm的縱行切口，膀胱內(nèi)注入0.9%氯化鈉溶液，充盈膀胱便于辨認(rèn)；充分暴露膀胱及恥骨周圍，由尿道近端向尿道口方向游離尿道周圍組織，將恥骨充分游離后，沿著恥骨聯(lián)合兩側(cè)恥骨支及坐骨支起始部剪除恥骨聯(lián)合。保護(hù)尿道周圍組織盡量不予破壞，縫合手術(shù)切口。對照組同實(shí)驗(yàn)組切開皮膚進(jìn)入腹腔，膀胱內(nèi)注入0.9%氯化鈉溶液，充盈膀胱，辨認(rèn)膀胱位置，即縫合手術(shù)切口，不游離膀胱及其周圍組織。

1.2.2 尿動力檢查方法 耳緣靜脈注射20%烏拉坦溶液，7 ml/kg。麻醉時通常給80%的劑量，觀察動物的反應(yīng)。如果實(shí)驗(yàn)兔意識消失，即可開始實(shí)驗(yàn)。如果實(shí)驗(yàn)時仍清醒，再將余下的藥物推入腹腔。兔仰臥位將測壓用導(dǎo)尿管（LABORIE，CAT208）由尿道插入膀胱后，尿道外口旁2cm處縫1結(jié)扎線固定導(dǎo)尿管[1]，肛管（LABORIE，CAT-411）作為腹壓測定管導(dǎo)入兔直腸，縫1結(jié)扎線固定肛管。改變兔體位為俯臥位，排空兔膀胱，測壓管與壓力傳感器相連，注水管連接微量注射泵，速度為1ml/s。體內(nèi)置零后開啟微量注射泵向膀胱內(nèi)灌注0.9%氯化鈉溶液，此過程中注意觀察尿道外口有無液體溢出。以注射器抽出膀胱內(nèi)尿量，即膀胱最大容量[2]。排空膀胱后，重新灌注至膀胱最大容量一半時，水銀血壓計袖帶綁住兔上腹部，緩緩充氣可見膀胱壓逐漸升高直到尿道外口見到尿液漏出，若有尿液溢出，此時記錄的膀胱壓即為腹壓漏尿點(diǎn)壓（ALPP）。重復(fù)測壓3次，取其平均值。分別于手術(shù)前、手術(shù)后、術(shù)后3個月及術(shù)后6個月重復(fù)測量ALPP。

1.3 統(tǒng)計方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組比較采用 檢驗(yàn)，多組比較采用方差分析。＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

表1 兩組各時段ALPP水平比較 cmH2O

3 討論

國際控尿?qū)W會(ICS)對壓力性尿失禁的定義是指膀胱壓大于最大尿道壓時，在無膀胱逼尿肌收縮的狀態(tài)下，尿液不自主地由尿道外口溢出。多在咳嗽、運(yùn)動、打噴嚏、直立等腹壓增大時發(fā)生，其發(fā)病原因較為復(fù)雜。壓力性尿失禁是嚴(yán)重影響中老年婦女生活質(zhì)量的常見病，是值得重視的社會學(xué)和衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)問題。嚴(yán)重影響著廣大婦女的健康及生活，主要有年齡因素、婚育因素、既往婦科手術(shù)史及長期的腹壓增高史等原因。

盆底支持組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，盆底支持組織雌激素水平和雌激素受體改變等與SUI關(guān)系密切，由于病因復(fù)雜性，涉及結(jié)構(gòu)和功能改變，建立SUI動物模型能更深一步研究其發(fā)生機(jī)制。根據(jù)排尿期原理，膀胱的收縮力大于尿道阻力時產(chǎn)生尿流。而影響尿流力的主要因素為：尿道括約肌、尿道直徑和長度、尿道摩擦系數(shù)、尿流軌跡以及尿道內(nèi)口形態(tài)。目前壓力性尿失禁動物模型多采用鼠、大鼠、兔等動物。大鼠、小鼠等小型實(shí)驗(yàn)動物膀胱尿道等解剖結(jié)構(gòu)容量小，壁薄，操作困難性大，另外存在逼尿肌不穩(wěn)定收縮的現(xiàn)象，對測量儀器的精度要求也越高。犬、羊及豬等大型動物適用于壓力性尿失禁動物模型的建立，但經(jīng)濟(jì)成本較高。新西蘭白兔是尿道研究的良好實(shí)驗(yàn)對象[3]，是理想的研究尿道損傷愈合的動物模型。

女性壓力性尿失禁動物模型主要有氣囊壓迫陰道壁、氣囊壓迫陰道壁合并雙側(cè)卵巢切除、離斷雙側(cè)坐骨神經(jīng)、離斷雙側(cè)陰部神經(jīng)、游離或切除部分尿道及離斷恥骨尿道韌帶等方法。但是上述方法均在手術(shù)后一段時間后出現(xiàn)尿道壓力上升，尿道關(guān)閉壓力恢復(fù)，影響動物模型的穩(wěn)定性，動物模型持久性差[4]。尿道周圍游離可以形成壓力性尿失禁的動物模型[5]。本研究在尿道周圍松解游離的基礎(chǔ)上切除恥骨聯(lián)合，破壞骨盆環(huán)的完整性，減少骨盆肌肉的附著點(diǎn)，加重盆底肌肉的松弛。本研究中對照組ALPP在術(shù)前、術(shù)后、術(shù)后3個月及6個月差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均＞0.05），因?yàn)閷φ战M手術(shù)僅切開皮膚進(jìn)入腹腔，充盈辨認(rèn)膀胱位置，即刻縫合手術(shù)切口，不游離膀胱及其周圍組織。并未影響骨盆肌肉及韌帶、神經(jīng)等結(jié)構(gòu)，所以ALPP均未發(fā)生明顯改變；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后3個月較術(shù)后ALPP增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.05），考慮為術(shù)后盆底肌肉、神經(jīng)等組織自我修復(fù)，以及手術(shù)后瘢痕增生牽拉尿道引起尿道壓迫，扭曲等情況使尿道阻力增加；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后6個月ALPP水平低于術(shù)后3個月，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.05），考慮為術(shù)后3至6個月手術(shù)瘢痕逐漸軟化，尿道受到瘢痕牽拉扭曲的力量減弱，ALPP因此有所下降。

綜上所述，本研究在尿道松解術(shù)的基礎(chǔ)上，徹底去除恥骨聯(lián)合，游離尿道及尿道與膀胱頸交界處，改變尿道膀胱角度，削弱尿道關(guān)閉需要的支撐媒介，減少盆底肌與骨盆壁的附著點(diǎn)，使盆底肌較手術(shù)前相對松弛，改變膀胱尿道前角，膀胱尿道后角，減少術(shù)后尿道周圍疤痕粘連固定引起尿失禁自然愈合的可能，模擬女性尿道括約肌損傷，建立動物模型，具有可復(fù)制性強(qiáng)、操作簡單、成功率高及作用時間持久等特點(diǎn)。

[1]Zhang NZ,Ma L,ZhangJB,et al.Improv-eed model for the establishment and evaluation of detrusor overactivity in female wistar rats[J]. Int Braz J Urol, 2014,40(3): 414-421.

[2]鄺兆進(jìn),操紅纓,黃萍,等.兩種不同膀胱測壓方法對不同年齡大鼠尿動力測定的影響[J].中國藥理學(xué)通報,2012,28(4):581.

[3]Minki Baek, Sung Hyun Paick, Seong jin Jeong, et al. Urodynamic and histological changes in a sterile rabbit vesicoureteral reflux model[J]. J Korean Med Sci, 2010, 25(9):1352-1358.

[4]M Skaff, ERS Pinto, Katia Leite, et al. Development of a rabbit's urethral sphincter deficiency animal model for anatomicalfunctional evaluation[J]. Int Braz J urol, 2012,38(1):17-24.

[5]Fu Qiang, Liao GL. Comparative study of three rat models of stress urinary incontinence[J]. Bosn J Basic Med Sci, 2011,11 (2):87-90.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.06.013

R695.1

A

1671-0800(2016)06-0726-03

2016-01-16

（本文編輯：吳迪漢）

315100寧波，寧波市泌尿腎病醫(yī)院

翁國斌，Email：suntao319@ gmail.com