王克迪　蘇建榮

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心， 北京 100050)

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· 基礎(chǔ)研究 ·

化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法篩查梅毒的結(jié)果分析

王克迪蘇建榮*

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心， 北京 100050)

目的應(yīng)用全自動微粒子發(fā)光免疫分析儀(i2000)進(jìn)行梅毒篩查，并通過梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(Treponemapallidumparticle agglutination assay， TPPA)進(jìn)行確證，對采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法(chemiluminescent microparticle immunoassay， CLIA)法篩查梅毒的結(jié)果進(jìn)行分析。方法36 000例標(biāo)本均經(jīng)過CLIA檢測，以S/CO值大于1.0為陽性，陽性者進(jìn)行TPPA確證，計(jì)算CLIA方法的檢測敏感度、特異度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值。結(jié)果以TPPA作為參考標(biāo)準(zhǔn)，CLIA的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為100%、99.7%、68.3%和100%，當(dāng)S/CO值為1.08時(shí)，Youden指數(shù)最大，敏感度為100%，特異度94.8%。結(jié)論CLIA法是進(jìn)行梅毒螺旋體感染初篩的可靠方法。

化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法；梅毒螺旋體；敏感度；特異度

梅毒是由梅毒螺旋體(Treponemapallidum， TP)感染引起的一種性傳播疾病[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全世界每年新增病例達(dá)到1 200萬例，已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病之一[2]。梅毒在中國也呈現(xiàn)復(fù)燃的趨勢[3-4]，因此，擴(kuò)大和加強(qiáng)梅毒篩查是十分重要的。梅毒是由蒼白螺旋體感染引起，被感染者血清中可產(chǎn)生非特異性反應(yīng)素抗體和梅毒螺旋體的特異性抗體。臨床常用的梅毒抗體檢測方法為凝集法，需要手工加樣而不能自動化，這已經(jīng)不能滿足臨床日益增長的工作量的需求[5-6]。化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法(chemiluminescent microparticle immunoassay， CLIA)法是近年發(fā)展的檢測梅毒特異性抗體的方法，通過全自動微粒子發(fā)光免疫分析儀完成檢測過程，具有操作簡便、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。本文擬應(yīng)用全自動微粒子發(fā)光免疫分析儀(i2000)進(jìn)行梅毒篩查，并通過梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(Treponemapallidumparticle agglutination assay， TPPA)進(jìn)行確證，探討CLIA法作為臨床篩查梅毒常規(guī)方法的可行性。

1　材料和方法

1.1標(biāo)本來源

所有標(biāo)本來源于2013年4月至2013年12月在首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院就診的門診及住院患者，共計(jì)36 000例。其中男性15 790例，女性20 210 例，年齡15～90歲。采血要求：空腹采靜脈血3 mL，3 000 r/min離心 10 min，分離血清待檢測。

1.2儀器與試劑

全自動微粒子發(fā)光免疫分析儀(i2000)購自美國雅培公司，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析試劑由美國雅培公司提供。TPPA試劑由日本富士株式會社提供。

1.3方法

所有標(biāo)本都進(jìn)行CLIA檢測，陽性者(即S/CO值大于1.0)進(jìn)行TPPA確診檢測。所有檢測操作程序和結(jié)果判斷均按試劑說明書嚴(yán)格進(jìn)行，并在試劑有效期內(nèi)使用。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。不同科室、性別和年齡間TP陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)；最佳cutoff值根據(jù)受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)確定。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1應(yīng)用TP-CLIA法檢測梅毒結(jié)果分析

36 000例標(biāo)本經(jīng)TP-CLIA初篩檢測，252例陽性標(biāo)本，陽性率為0.7%，陽性標(biāo)本再進(jìn)行TPPA檢測，共檢出172例陽性，陽性率為0.48%。以TPPA檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，TP-CLIA檢測結(jié)果與之進(jìn)行比較，計(jì)算其檢測的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值，詳見表1。

2.2臨床資料分析

將所有TP陰性標(biāo)本和TP陽性標(biāo)本分布按照科室、性別和年齡統(tǒng)計(jì)，詳見表2。結(jié)果顯示不同科室TP陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，皮膚性病科陽性率顯著高于婦產(chǎn)科和術(shù)前篩查患者，而TP感染率與年齡和性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 假陽性結(jié)果分析

TP-CLIA檢測假陽性標(biāo)本共80例，假陽性率為0.22% [80/(35748+80)]。其中，妊娠期婦女30例，老年人群(>60歲)14例，腫瘤患者12例，透析患者10例，腎移植患者2例，自身免疫性疾病患者4例，其他8例。詳見圖1。

2.4 TP-CLIA診斷梅毒的ROC曲線結(jié)果

TP-CLIA法作為診斷TP的方法時(shí)，ROC曲線下面積為0.994，當(dāng)Youden指數(shù)(即敏感度與特異度之和)最大時(shí)，所對應(yīng)的值即為cutoff值，本文中，當(dāng)cutoff值為1.08時(shí)，Youden指數(shù)最大，此時(shí)敏感度為100%，特異度94.8%，詳見圖2。ROC曲線下面積為0.994，當(dāng)Youden指數(shù)最大時(shí)，即敏感度與特異度之和最大時(shí)，所對應(yīng)的值即為cutoff值，本文中，當(dāng)Youden指數(shù)最大時(shí)，cutoff值為1.08時(shí)，敏感度為100%，特異度為94.8%。

表1　應(yīng)用TP-CLIA和TPPA方法檢查結(jié)果比較

TP：Treponemapallidum； CLIA：chemiluminescent microparticle immunoassay； TPPA：treponemapallidum particle agglutination assay.

表2　研究人群來源科室、性別和年齡的分布

TP：Treponemapallidum； STD：sexually transmited disease.

圖1　TP-CLIA檢測假陽性標(biāo)本分析

圖2　TP-CLIA診斷梅毒的ROC曲線

TP：Treponemapallidum； CLIA：chemiluminescent microparticle immunoassay; ROC：receiver operating characteristic curve.

3　討論

梅毒螺旋體屬于密螺旋體屬蒼白螺旋體的蒼白亞種，感染人體后誘導(dǎo)產(chǎn)生梅毒非特異性抗體和梅毒特異性抗體。特異性抗體有IgM和IgG，分別在感染后2周和4周產(chǎn)生，早期梅毒治療后3～9個(gè)月IgM可消失，晚期梅毒治療后2年IgM可消失，而IgG終生存在。非特異性梅毒螺旋體抗體在感染后5～7周產(chǎn)生[7-8]，較特異性抗體晚，隨疾病治愈轉(zhuǎn)陰。因此，非特異性抗體檢測可以監(jiān)測患者是否為現(xiàn)癥感染及其治療效果，但在早期梅毒篩查中容易出現(xiàn)假陰性，且不能反映既往感染，需要手工操作和人工主觀判讀，不適合臨床批量檢測[9-10]。

雅培i2000以CLIA為檢測原理，采用兩步法進(jìn)行TPsAb定性檢測。TPsAb較nTsAb出現(xiàn)早、消失遲，即使患者治愈后仍可檢測出特異性抗體，甚至可終身檢出。CLIA法操作簡便，檢測時(shí)間短，自動化程度高，可批量檢測，并且結(jié)果客觀，適合標(biāo)本量日益增多的臨床工作需求。本研究中以TPPA為參照標(biāo)準(zhǔn)，CLIA方法的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值分別為100%、99.7%、68.3%和100%，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

本研究中，CLIA初篩陽性標(biāo)本存在0.22%的假陽性率，假陽性標(biāo)本主要出現(xiàn)在早孕者、老年患者、惡性腫瘤患者、透析患者和自身免疫性疾病患者，其原因可能是這些患者體內(nèi)存在抗脂類抗體或梅毒螺旋體交叉抗原，老年患者免疫功能減弱，出現(xiàn)一些異種蛋白的干擾。初篩結(jié)果為假陽性或與復(fù)檢結(jié)果不符時(shí)，往往會給醫(yī)生和患者造成困擾。因此本課題組推薦對所有標(biāo)本首先進(jìn)行CLIA初篩，篩查陽性的標(biāo)本進(jìn)行TPPA復(fù)檢，對于TPPA復(fù)查陽性的標(biāo)本再補(bǔ)做快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)檢測，這樣既提高了檢出率和檢測效率，也能避免CLIA假陽性的干擾。此外，根據(jù)ROC曲線，Youden指數(shù)最大時(shí)，cutoff值為1.08，此時(shí)敏感度為100%，特異度為94.8%，各臨床實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)最佳cutoff值調(diào)整臨床診斷臨界值，獲得較滿意的敏感度和特異度。

綜上所述，CLIA可以作為臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行大樣本量梅毒篩查的檢測方法，但對于陽性標(biāo)本，尤其是S/CO值介于1～3的標(biāo)本，尚需要行TPPA、RPR檢測，排除假陽性標(biāo)本，并結(jié)合臨床進(jìn)一步明確診斷。

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編輯孫超淵

Analysis of automated chemiluminescent microparticle immunoassay for the screening of syphilis

Wang Kedi， Su Jianrong*

(ClinicalLaboratory，BeijingFriendshipHospital，CapitalMedicalUniversity，Beijing100050，China)

ObjectiveCompared automated chemiluminescent microparticle immunoassay (CLIA) with conventional methods to analyze the results of CLIA for the screening of syhilis.Methods36 000 serum samples were tested by CLIA for screening of syphilis, and the positive samples would be subjected to TPPA for furhter confirmation. Then the sensibility, specificity, positive prediction value and negative prediction value were calculated. ResultsThe sensitivity and specificity of CLIA were 100% and 99.7%, respectively. When the value of S/CO value was 1.08, the Youden index reached maximum, the sensitivity and specificity of CLIA were 100% and 94.8%,respectively. ConclusionCLIA is suggested as a screening test for the diagnosis of syphilis.

automated chemiluminescent microparticle immunoassay;Treponemapallidum; sensitivity; specificity

10.3969/j.issn.1006-7795.2016.04.021]

R 446

2016-08-03)

*Corresponding author， E-mail：kedi-v@163.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-07-2021∶16網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160714.2116.042.html