徐新民　李　敏　李瑞紅　張　燕　陸　瑤　王慧珠

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100015)

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· 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 ·

399株醫(yī)院真菌感染的分布特點(diǎn)及耐藥性分析

徐新民李敏李瑞紅張燕陸瑤王慧珠*

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100015)

目的了解本院臨床常見(jiàn)真菌的種類(lèi)及常用抗真菌藥物的耐藥情況，為臨床合理使用抗真菌藥物提供依據(jù)。方法對(duì)2014年1月至2015年12月臨床采集的標(biāo)本進(jìn)行真菌分離培養(yǎng)，采用科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基及API 20C AUX酵母菌鑒定試劑盒進(jìn)行真菌鑒定，ATB Fungus 3藥敏試劑盒進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析菌種的構(gòu)成及其對(duì)5種抗真菌藥物的敏感率。結(jié)果共收集培養(yǎng)得到399株真菌，標(biāo)本類(lèi)型以尿液為主，念珠菌中以白色假絲酵母菌為主，共188株，占47.1%；絲狀真菌中以煙曲霉菌為主，共25株，占6.3%。白色念珠菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性較好，大部分在95%以上，但光滑念珠菌對(duì)唑類(lèi)藥物敏感性相對(duì)較低，對(duì)氟康唑的敏感性只有65.1%。曲霉菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑均有著較高的敏感性。結(jié)論醫(yī)院真菌感染以白色念珠菌為主，兩性霉素B和5-氟胞嘧啶對(duì)其有較高的抗菌活性；光滑念珠菌對(duì)唑類(lèi)藥物有較高的耐藥性，臨床應(yīng)根據(jù)藥敏結(jié)果合理使用抗真菌藥物。

醫(yī)院真菌；藥物敏感試驗(yàn)；菌群分布

近幾年，醫(yī)院內(nèi)真菌感染的發(fā)病率逐年增高[1]，尤其針對(duì)免疫力低下患者。隨著大量廣譜抗菌藥物以及免疫抑制劑的使用，條件致病性真菌感染已成為醫(yī)院感染的重要因素[2]?，F(xiàn)對(duì)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京地壇醫(yī)院近兩年真菌感染的分布特點(diǎn)以及藥敏結(jié)果進(jìn)行分析，為臨床早期診斷及合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源

2014年1月至2015年12月住院及門(mén)診患者送檢的痰、尿液、咽拭子、血液、腦脊液、膽汁、胸腹水、肺泡灌洗液及各種分泌物等不同類(lèi)型標(biāo)本中分離出的399株酵母樣真菌及絲狀真菌。

1.2儀器和試劑

法國(guó)生物梅里埃公司的血瓊脂平板、沙保羅瓊脂培養(yǎng)基、API 20 C AUX酵母菌鑒定試劑盒、ATB Fungus 3藥敏試劑條和E-Test試劑條。科瑪嘉顯色培養(yǎng)基和棉蘭染色液為自制。

1.3分離和鑒定

將臨床送檢標(biāo)本嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[3]進(jìn)行，培養(yǎng)后挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，鏡檢見(jiàn)到酵母樣真菌孢子后，挑取單個(gè)菌落接種于科瑪嘉顯色培養(yǎng)基，通過(guò)呈現(xiàn)出的不同顏色確定菌種類(lèi)型。對(duì)于顯色不明顯的菌種用API 20 C AUX酵母菌鑒定試劑條進(jìn)一步鑒定。絲狀真菌的鑒定主要根據(jù)菌體形態(tài)特征，主要包括菌落形態(tài)和鏡下形態(tài)。

1.4藥敏試驗(yàn)

將分離出的酵母樣真菌制備成2.0麥?zhǔn)蠁挝坏木鷳乙?，取?0 μL加入到ATB F2培養(yǎng)液中，混勻后取135 μL加入 ATB Fungus 3藥敏試劑條中每個(gè)凹狀的藥敏孔中，置于35 ℃溫箱中，24 h或48 h判讀結(jié)果，判讀標(biāo)準(zhǔn)按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。絲狀真菌采用E-Test藥敏試紙條法。所有藥敏結(jié)果根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI) M27-A3和ATB Fungus 3建立的折點(diǎn)判讀，將受試菌分為敏感、中介或者耐藥。

1.5質(zhì)量控制

質(zhì)控菌株為白色念珠菌 ATCC 64500，由國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心提供。

2　結(jié)果

2.1真菌在臨床科室的分布及構(gòu)成比

真菌檢出率占前5位的臨床科室分別為重癥監(jiān)護(hù)室(intensive care unit， ICU) (107株，26.82%)、感染一科(87株，21.80%)、呼吸科(37株，9.27%)、感染二科(24株，6.02%)和內(nèi)五科(18株，4.51%)。

2.2真菌菌株的標(biāo)本來(lái)源及構(gòu)成

標(biāo)本類(lèi)型以尿液和痰液為主，共檢出399株真菌，包括酵母樣真菌371株(92.3%)和絲狀真菌28株(7.0%)，其中白色念珠菌檢出最多，共188株，占47.1%。各菌株的標(biāo)本來(lái)源及構(gòu)成詳見(jiàn)表1。

2.3藥敏試驗(yàn)結(jié)果

對(duì)399株真菌中主要的5種真菌進(jìn)行藥敏分析，結(jié)果顯示，白色念珠菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性大部分在95%以上，光滑念珠菌對(duì)唑類(lèi)藥物敏感性相對(duì)較低，尤其對(duì)氟康唑，敏感性只有65.1%， 對(duì)5-氟胞嘧啶和兩性霉素B敏感性較好，分別為94.1%和98.2%。5-氟胞嘧啶對(duì)新型隱球菌和熱帶念珠菌的敏感性均為100%。曲霉菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑的敏感性約為90%,詳見(jiàn)表2。

表1　399株真菌感染的標(biāo)本來(lái)源及真菌構(gòu)成

CSF： cerebrospinal fluid； BALF： bronchoalveolar lavage fluid.

表2　主要真菌對(duì)5種抗真菌藥物的敏感率

ND:no definition.

3　討論

真菌廣泛存在于人體皮膚黏膜、呼吸道、腸道等處，屬于條件致病菌，當(dāng)機(jī)體免疫力下降或者抗生素過(guò)度使用導(dǎo)致菌群失調(diào)時(shí)就會(huì)致病。研究[4-5]顯示呼吸道真菌感染在各種深部真菌感染中居于首位，并且以酵母樣真菌為主。

本院真菌送檢科室最多的是ICU、感染科和呼吸科，占57%左右。另外，399株真菌中以念珠菌(371株，93.0%)為主，最主要的是白色念珠菌(188株，47.1%)，與國(guó)內(nèi)研究[4-6]基本一致，其次為光滑念珠菌(56株，15.0%)和新型隱球菌(50株，12.5%)，新型隱球菌檢出率高于其他醫(yī)院[5]，這可能與本院艾滋病患者較多有關(guān)。從病原菌的來(lái)源來(lái)看，以尿液最多，共149株，占37.3%，其次為痰液和腦脊液。值得注意的是，除了腦脊液標(biāo)本中以新型隱球菌為主外，其他所有標(biāo)本類(lèi)型中，均以白色念珠菌為主。這可能與該菌對(duì)宿主細(xì)胞黏附性較強(qiáng)有關(guān)，并且白色念珠菌廣泛分布于自然界，通常不致病，但當(dāng)機(jī)體免疫力下降或長(zhǎng)期使用廣譜抗菌藥物、激素、免疫抑制劑、化學(xué)藥物治療等時(shí)，易引起白色念珠菌的繼發(fā)感染。光滑念珠菌為人體的一種腐生菌，可致泌尿生殖道感染，本研究從尿液中分離的也最多[7]。有報(bào)道[8]顯示其會(huì)引起心臟、肺的深部感染，偶可致敗血癥、骨髓炎，是新生兒的條件致病菌。但近年來(lái)光滑念珠菌的耐藥性有遞增的趨勢(shì)，Pfaller等[9]曾對(duì)念珠菌進(jìn)行了全球最大規(guī)模的藥敏實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，光滑念珠菌對(duì)不同的抗真菌藥物均存在不同程度的廣泛耐藥情況，對(duì)氟康唑耐藥最為嚴(yán)重，總體來(lái)看，光滑念珠菌對(duì)藥物的耐藥性與年齡呈負(fù)相關(guān)。新型隱球菌通常經(jīng)呼吸道侵入體內(nèi)，再經(jīng)血液傳播至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也經(jīng)常侵犯肺、皮膚、骨骼等，機(jī)體免疫力低下者，如實(shí)體器官移植者、艾滋病患者都存在高風(fēng)險(xiǎn)的隱球菌感染[10-11]，并且有著較高的感染病死率。除了酵母樣真菌外， 筆者還分離出了28株絲狀真菌，包括煙曲霉菌25株(6.3%)， 黃曲霉菌2株(0.51%)和黑曲菌1株(0.25%)。

本研究的藥敏結(jié)果顯示，除了光滑念珠菌對(duì)唑類(lèi)藥物敏感性相對(duì)較低外，大部分念珠菌對(duì)抗真菌藥物敏感性較好，均在90%以上。由于試劑盒中兩性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑?qū)π滦碗[球菌無(wú)判讀標(biāo)準(zhǔn)，因此，筆者也未統(tǒng)計(jì)這3種藥物對(duì)新型隱球菌的敏感性。筆者采用E-TEST的方法對(duì)絲狀真菌(主要是曲霉菌)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示，曲霉菌對(duì)兩性霉素B、伊曲康唑和伏立康唑的敏感性約為90%。兩性霉素B是治療深部真菌感染的首選藥物, 但因其不良反應(yīng)大而受到限制[12]。5-氟胞嘧啶和唑類(lèi)藥物不良反應(yīng)輕, 對(duì)多種深部真菌感染有明顯抑制作用, 但5-氟胞嘧啶很少單獨(dú)用藥, 一般與兩性霉素B 聯(lián)合應(yīng)用。對(duì)于抗真菌治療藥物的選擇，還應(yīng)該考慮感染部位，同樣的抗真菌藥物在不同的感染部位可能有效的抗菌濃度也不同，如氟康唑在尿液穿透率大約90%，而在眼組織穿透率只有大約28%～75%[13-14]，因此，應(yīng)根據(jù)患者的生理、病理、免疫等狀態(tài)合理用藥。

總之，真菌感染已成為院內(nèi)感染的重要因素[15]，雖然藥物敏感現(xiàn)狀仍算良好，但為得到及時(shí)有效的治療和避免資源的浪費(fèi)，仍應(yīng)重視真菌病原學(xué)檢查及藥物敏感性的監(jiān)測(cè)，以指導(dǎo)臨床合理使用抗真菌藥物。

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編輯陳瑞芳

Fungal pathogens distribution and drug resistance of 399 stains fungi isolated in a hospital

Xu Xinmin， Li Min， Li Ruihong， Zhang Yan， Lu Yao， Wang Huizhu*

(DepartmentofClinicalLaboratory，BeijingDitanHospital，CapitalMedicalUniversity，Beijing100015，China)

ObjectiveTo understand common fungal species and antifungal drug resistance in our hospital and to provide important evidences for rational use of antifungal agents in clinical practice. MethodsWe performed fungal culture for clinically collected specimens from January 2014 to December 2015, and used CHROMagar Candida chromogenic medium and API 20C AUX yeast identification kit to identify fungal species. ATB Fungus 3 susceptibility kits were used to test drug susceptibility. At last, we counted the composition of fungal species and sensitive rates of 5 kinds of antifungal drugs. ResultsWe obtained a total of 399 strains of fungi. Urine was the main sample of clinical specimen and Candida albicans were the main strain (188 strains, accounting for 47.1%) in Candida. In filamentous fungi, Aspergillus fumigatus were the main strain (25 stains, accounting for 6.3%). The sensitivity of Candida albicans to antifungal drugs was more than 95%, but the sensitivity of Candida glabrata to azole was relatively low and only 65.1% for fluconazole. Aspergillus had a high sensitivity to amphotericin B, itraconazole and voriconazole. ConclusionCandida albicans was the main hospital fungal infection and amphotericin B and 5-flucytosine had high antifungal activity against this fungus. Candida glabrata had a higher resistance to azoles and clinically reasonable use of antifungal drugs according to the results of drug susceptibility is very important.

hospital fungi； drug susceptibility test； pathogens distribution

北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助(2014000021469G235)。This study was supported by Beijing Municipal Foundation for the Excellent Talents(2014000021469G235).

10.3969/j.issn.1006-7795.2016.04.017]

R 379

2016-04-30)

*Corresponding author， E-mail：whz660527@sina.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-07-2021∶12網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160714.2112.016.html