范嬋　陳姝　龔國忠

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化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法與電化學(xué)發(fā)光法測定促甲狀腺激素的性能比較

范嬋①陳姝①龔國忠①

目的：比較化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）與電化學(xué)發(fā)光法（ECLINA）測定血清促甲狀腺激素的性能。方法：每天選取臨床樣本8份，包括門診與住院患者，排除溶血、脂血及用藥情況。分別用CMIA與ECLINA測定樣本促甲狀腺激素含量，連續(xù)測定7 d，記錄檢驗(yàn)結(jié)果。去除離群點(diǎn)，以電化學(xué)發(fā)光法為對比方法作為X軸，化學(xué)發(fā)光微粒子法為實(shí)驗(yàn)方法為Y軸，計算化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法與電化學(xué)發(fā)光法的線性方程和相關(guān)系數(shù)，進(jìn)行偏差評估。結(jié)果：CMIA與ECLINA測定促甲狀腺激素的線性回歸方程為Y=0.7863X+0.0632，相關(guān)系數(shù)r2=0.9946，兩種檢測方法的測定值之間存在著高度相關(guān)關(guān)系（P<0.01）。兩種實(shí)驗(yàn)方法均存在隨著結(jié)果增高偏差增大現(xiàn)象，但均能滿足臨床要求。結(jié)論：ARCHITEC和ECLINA具有高度相關(guān)性，可以建立相關(guān)方程，在某一方法不能滿足實(shí)驗(yàn)室而參考值又不能變換時可以用另一方法代替。

化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法；電化學(xué)發(fā)光法；性能

First-author’s address：Central Hospital of Suining City，Suining 629000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.18.018

促甲狀腺激素（Thyroid stimulating hormone，TSH）是由腺垂體嗜堿性細(xì)胞分泌的一種糖蛋白類激素，是判斷下丘腦-垂體-甲狀腺軸功能的首選指標(biāo)，是診斷甲狀腺疾病重要的第一線指標(biāo)[1-2]。隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，化學(xué)發(fā)光法測定血清TSH已成為甲狀腺功能檢查的常規(guī)手段。然而不同的化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)檢測結(jié)果是否一致，是實(shí)驗(yàn)室需要探討的重點(diǎn)。因?yàn)樵诩谞钕偌膊≡\斷中，促甲狀腺激素的水平至關(guān)重要，特別對于亞臨床患者，主要看促甲狀腺激素水平。因此，本文對血清TSH電化學(xué)發(fā)光免疫分析與化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析測定結(jié)果進(jìn)行分析，系統(tǒng)地對兩種不同方法進(jìn)行對比分析及偏移評估，從而探討不同檢測系統(tǒng)間對同種測定項(xiàng)目的檢測結(jié)果是否具有可比性，并為判斷臨床的可接受性提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1儀器與試劑電化學(xué)發(fā)光法所用儀器為羅氏CobasE602全自動電化學(xué)發(fā)光分析儀，所用試劑為德國羅氏試劑（批號：182942-01，規(guī)格：200測試/盒），質(zhì)控品為德國羅氏免疫通用質(zhì)控品（批號：177813-04），定標(biāo)液為德國羅氏TSH定標(biāo)液（批號：180413-01）；化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法所用儀器為雅培I2000SR化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，試劑為美國雅培試劑（批號：44904U100，規(guī)格：4×500測試/盒）；TSH校準(zhǔn)品為雅培試劑（批號：45240u100），質(zhì)控為美國伯樂免疫分析用質(zhì)控液（批號：40271 40273）

1.2樣本采集遂寧市中心醫(yī)院本部門診及住院患者當(dāng)日血清8份，連續(xù)采集7 d，共56份。

1.3方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)前檢測兩個檢測系統(tǒng)參加衛(wèi)生部室間質(zhì)評成績均合格且每次實(shí)驗(yàn)前各分析系統(tǒng)均進(jìn)行高低值質(zhì)控測定且均在控。保證了所有對比實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠。以電化學(xué)發(fā)光法為對比方法（X），化學(xué)發(fā)光微粒子法為實(shí)驗(yàn)方法（Y）。通過相關(guān)分析、偏差分析及可接受性評價，比較兩種方法的相關(guān)性能。

1.3.2樣本測定每日選取適合的患者樣本，包括正常值和異常值，排除高血脂、溶血等情況，保證檢測系統(tǒng)不受干擾。在選取的對象中，有部分是結(jié)果異常也就是甲狀腺功能異?；颊?，他們的治療前和治療后的檢測各算一次單獨(dú)的個體。因?yàn)樵谥委熐盁o藥物對檢測的影響，而治療后藥物是否影響檢測和對哪種檢測系統(tǒng)有影響暫不清楚。因此，測定時分別用兩種檢測系統(tǒng)按順序標(biāo)號進(jìn)行隨機(jī)測定，再按反向編號重復(fù)測定，且在2 h內(nèi)兩種檢測系統(tǒng)對同批標(biāo)本分別實(shí)驗(yàn)，這樣重復(fù)記錄7 d，供56份樣本，計算每個樣本的測定結(jié)果的均值。

1.4觀察指標(biāo)離群點(diǎn)的檢查：記錄檢測結(jié)果，計算每個樣本測定結(jié)果的均值樣本重復(fù)測定值間差值的絕對值及兩種方法測定結(jié)果均值間的差值計算樣本重復(fù)測定值間差值的平均數(shù)。計算兩種方法測定結(jié)果的均值間差值的平均數(shù)。判斷：超出上述平均數(shù)4倍時，檢驗(yàn)結(jié)果視為無效，查明原因剔除數(shù)據(jù)并作偏差分析。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理使用Office Excel 2003軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以（±s）表示，作t’檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

圖2?。ǎΓǎ┢顖D

2.3TSH的臨床可接受性評價計算在給定醫(yī)學(xué)決定水平的相對偏差，根據(jù)不同醫(yī)學(xué)決定水平與相對偏差判斷各項(xiàng)目的預(yù)期偏差是否可以接受：由表1中可以看出兩種方法間對于不同水平的測定出現(xiàn)的相對偏差較小，均在1/2CLIA’88允許的范圍內(nèi)，因此同一實(shí)驗(yàn)室里兩臺檢測系統(tǒng)均可作為單獨(dú)的檢測系統(tǒng)，并且對于結(jié)果的解釋相同，臨床評價為可接受，見表1。

表1　不同檢測系統(tǒng)TSH測定結(jié)果的臨床可接受性評價

3　討論

促甲狀腺激素（TSH）是一種糖蛋白由垂體前葉合成、釋放激素，是機(jī)體甲狀腺素發(fā)揮作用的中樞調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)，同時也有刺激甲狀腺素細(xì)胞增殖以及激素的生成和分泌效應(yīng)[3-5]。促甲狀腺激素由兩種亞單位α、β組成，其中α亞單位與促黃體生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）和人絨毛膜促性腺激素（hCG）的α鏈上的某些氨基酸組成的肽段有一致性檢測時易受此類激素的影響；而β亞單位攜帶TSH特異的免疫學(xué)和生物學(xué)信息。TSH檢測是甲狀腺功能的初篩實(shí)驗(yàn)。游離甲狀腺濃度微小變化就會帶來與生理功能相反方向的顯著調(diào)整。特別在臨床上，無典型臨床癥狀時，如亞臨床甲亢、亞臨床甲減、診斷甲狀腺功能異常主要依靠TSH水平。因此TSH是判斷甲狀腺功能非常敏感的特異性參數(shù)，特別適合于甲狀腺功能混亂的早期診斷及排除下丘腦-垂體-甲狀腺中樞調(diào)節(jié)環(huán)路的功能紊亂的檢查[6-9]。因此對于TSH的檢測系統(tǒng)要求比較高，實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確檢測TSH的水平將為臨床診斷和治療甲狀腺疾病提供可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。但檢測TSH的方法多種多樣，有免疫法、電化學(xué)發(fā)光法、放射免疫法等，目前被公認(rèn)較為靈敏可靠的是電化學(xué)發(fā)光免疫測定法，具有較高的靈敏度和特異性[10]。然而，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室具備兩套或多套監(jiān)測的系統(tǒng)時。往往不可能用兩套系統(tǒng)同時檢測，此時，患者的結(jié)果或復(fù)查時怎樣才能真實(shí)反映患者的水平呢？因此，本文以電化學(xué)發(fā)光技術(shù)作為參考方法，比較化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法和電化學(xué)發(fā)光法的檢測性能，以方便實(shí)驗(yàn)室具備兩套檢測系統(tǒng)時做結(jié)果均一性利用于臨床。

目前，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法（CMIA）檢測TSH項(xiàng)目采用兩步法免疫檢測，運(yùn)用Chemiflex技術(shù)，即化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測（CMIA）技術(shù)與靈活的檢測模式的結(jié)合，測定人血清中是否含有TSH[11]。本研究采用全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是以鏈霉和素為固相載體，用lumi-hos503為發(fā)光底物，在堿性磷酸酶（apase）作用下磷酸酯基發(fā)生水解，脫去一個磷酸基面而得到一個中等穩(wěn)定的中間體AMPD，在中間體分子內(nèi)電子轉(zhuǎn)移裂解為一個分子的金剛烷酮和一分子處于激發(fā)態(tài)的間期苯甲酸甲酯陰離子，當(dāng)回到基態(tài)時產(chǎn)生470 nm的光子，并可持續(xù)數(shù)十分鐘的發(fā)光反應(yīng)[12]。而電化學(xué)發(fā)光法（ECLINA）采用了釕標(biāo)記抗原或抗體，再引入鏈霉親和素、生物素放大系統(tǒng)，產(chǎn)生的抗原抗體復(fù)合物，經(jīng)電場作用，發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕[Ru（bpy）3]2+標(biāo)記Ab，通過Ag-Ab反應(yīng)和磁珠分離技術(shù)，根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強(qiáng)度對待測的Ag或Ab進(jìn)行定量測定，此方法具有快速、準(zhǔn)確的優(yōu)勢。從本文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，實(shí)驗(yàn)方法與對比方法均有較好的檢測性能，以電化學(xué)發(fā)光法為參照方法，化學(xué)發(fā)光微粒子法為實(shí)驗(yàn)方法時，結(jié)果表現(xiàn)為實(shí)驗(yàn)方法與對比方法有很好的相關(guān)性，r=0.7863，符合實(shí)驗(yàn)室結(jié)果均一性要求，可根據(jù)參照方法判斷實(shí)驗(yàn)方法的性能，降低同一系統(tǒng)不同時間檢測數(shù)值不同現(xiàn)象的發(fā)生，符合臨床對TSH異常的甲狀腺疾病診療的的要求；另一方面，評價兩儀器的穩(wěn)定性，從偏差分析來看，在低水平時實(shí)驗(yàn)法偏差較小，這與低水平狀態(tài)下，由于標(biāo)本本身水平的低值，儀器沒法反映出來有關(guān)，隨著結(jié)果增高實(shí)驗(yàn)方法偏差也跟著增大。但對于電化學(xué)發(fā)光法也即參照方法來說不管測定水平如何，其偏差較化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法的小。因此可以理解為，電化學(xué)發(fā)光技術(shù)稍優(yōu)于化學(xué)發(fā)光微粒子免疫法，分析其原因，可能與電化學(xué)發(fā)光免疫法試劑性能較穩(wěn)定有關(guān)，但兩種方法測定效果均能滿足臨床要求[13-14]。從表1結(jié)果來看，在評價TSH臨床可接受性時，計算給定醫(yī)學(xué)決定水平的相對偏差時，根據(jù)不同醫(yī)學(xué)決定水平與相對偏差判斷項(xiàng)目的預(yù)期偏差是否可以接受，發(fā)現(xiàn)電化學(xué)發(fā)光法和化學(xué)發(fā)光微粒子法同時檢測TSH時，兩種檢測系統(tǒng)相對偏差在低水平時較小，但是，當(dāng)水平升高時，也是隨著結(jié)果的增高，相對偏差也跟著增大，這可能與檢測系統(tǒng)或試劑性能有關(guān)，此觀點(diǎn)與雷荔荔等[14]的電化學(xué)方法報道較一致，雖然兩種檢測方法檢測TSH水平時，化學(xué)發(fā)光微粒子法表現(xiàn)出隨著水平增高，其結(jié)果偏差變大，但均在1/2CLIA’88允許的范圍內(nèi)，故其檢測結(jié)果均能被臨床所接受。因此，從實(shí)驗(yàn)比較來看，兩種方法無明顯的差異。在同一實(shí)驗(yàn)室具備兩種檢測系統(tǒng)時，不用擔(dān)心患者復(fù)查時不是同一檢測系統(tǒng)所導(dǎo)致結(jié)果不一致而誤導(dǎo)臨床的現(xiàn)象。另外，鑒于TSH作為甲狀腺功能的敏感指標(biāo)，臨床診療對檢測要求高。在選取的檢測標(biāo)本中，有意的選取了部分患者治療前治療后的標(biāo)本來檢測，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，兩種檢測系統(tǒng)并沒有因?yàn)榛颊哂昧怂幹蟪霈F(xiàn)結(jié)果明顯的偏差，這與趙靜峰等[15]的報道基本一致。

因此，CMIA法和ECLINA法準(zhǔn)確度精密度靈敏度均符合臨床要求，且自動化程度高，減少了人為操作誤差，兩種方法呈高度相關(guān)，結(jié)果沒有太大偏差，可以建立相關(guān)方程，在某一方法不能滿足實(shí)驗(yàn)室，而參考值又不能變換時可以用另一方法代替。特別對于復(fù)查患者，第一次和第二次檢測時，雖然檢測系統(tǒng)不相同，但亦不會因?yàn)闄z測系統(tǒng)的性能差和使用藥物后影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)而對患者自身的病情反映出現(xiàn)差異。

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Performance of Thyroid Stimulating Hormone by Chemiluminescence Particles Immune Method and Electrochemical Luminescence

/FAN Chan，CHEN Shu，GONG Guo-zhong.//Medical Innovation of China，2016，13（18）：061-064

Objective：To compare the performance of serum thyroid stimulating hormone by chemiluminescence particles immune method （CMIA） and electrochemical luminescence （ECLINA）.Method：Eight clinical samples was selected every day，including outpatient and inpatient，exclusion of hemolysis，blood lipid and medication situation，continuous determination of 7 d and the test results was recorded.The outliers was removed，the ECLINA was used as the contrast method for X axis and the CMIA was used as the experimental method for Y axis，the linear equation and correlation coefficient of CMIA and ECLINA were calculated for evaluation bias.Result：CMIA and ECLINA to determine the linear regression equation for thyroid stimulating hormone was Y=0.7863X+0.0632，correlation coefficient was r2=0.9946，There was a high correlation with the measured values of two methods.Thetwo kinds of detection method of measured value were highly correlated （P<0.01）.Two kinds of experimental methods all existed along with the increase of the results，but could meet the clinical requirements.Conclusion：CMIA and ECLINA is highly correlated，correlation equation can be established，in a certain way can not meet the laboratory and the reference value can not be replaced by another way.

Chemiluminescence particles immune method；Electrochemical luminescence；Performance

①四川省遂寧市中心醫(yī)院四川遂寧629000

陳姝

（2015-07-28）（本文編輯：李穎）