田　笑，李明亮

(中國(guó)人民解放軍第二〇二醫(yī)院,沈陽(yáng) 110000)

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·臨床研究·

血小板相關(guān)免疫球蛋白的檢測(cè)在妊娠合并免疫性血小板減少性紫癜患者中的應(yīng)用

田笑，李明亮

(中國(guó)人民解放軍第二〇二醫(yī)院,沈陽(yáng) 110000)

摘要:目的探討應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)在妊娠合并免疫性血小板減少性紫癜(ITP)患者中的應(yīng)用價(jià)值。方法選取100例妊娠合并ITP的患者作為試驗(yàn)組，同時(shí)選取100例健康妊娠婦女作為對(duì)照組，依據(jù)血小板計(jì)數(shù)(PLT)結(jié)果，將試驗(yàn)組分為4組(1～4組)，再用FCM檢測(cè)各組PAIg水平。結(jié)果試驗(yàn)組患者PLT<70×109/L時(shí),PAIgA、PAIgG和PAIgM顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PLT與PAIgA、PAIgG和PAIgM的陽(yáng)性率呈負(fù)相關(guān)性(r<0,P<0.05)。結(jié)論FCM檢測(cè)PAIg具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、可靠等特點(diǎn)，可用于妊娠合并ITP的輔助診斷。

關(guān)鍵詞:妊娠；血小板；免疫球蛋白；紫癜；流式細(xì)胞術(shù)

產(chǎn)后出血是產(chǎn)科的嚴(yán)重并發(fā)癥，引起產(chǎn)后出血的原因很多而且很復(fù)雜，其中凝血功能障礙是重要原因之一，而妊娠合并免疫性血小板減少性紫癜(ITP)又是造成孕產(chǎn)婦凝血功能障礙的原因之一。雖然妊娠和ITP的發(fā)生沒有絕對(duì)的聯(lián)系，但有過ITP病史的女性一般認(rèn)為妊娠合并ITP發(fā)生率較健康人群高[1]，提示雌激素可能參與ITP的發(fā)病。ITP是一種免疫性血小板破壞過多造成的疾病[2]。其中一部分抗體針對(duì)血小板表面多種抗原抑制血小板功能,使出血嚴(yán)重；一部分能活化血小板,加劇血小板的減少[3]。由于患者機(jī)體免疫系統(tǒng)異常，體內(nèi)產(chǎn)生血小板相關(guān)免疫球蛋白(PAIg)增多導(dǎo)致血小板破壞增加，血小板生存時(shí)間縮短，其特點(diǎn)是廣泛的皮膚、黏膜、內(nèi)臟出血；骨髓中巨核細(xì)胞幼稚化；出血時(shí)間延長(zhǎng)，血塊收縮不良，束臂試驗(yàn)陽(yáng)性等。PAIg是由機(jī)體免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)紊亂而產(chǎn)生的一種自身免疫性抗體，它可以引起多種臨床疾病或者癥狀，比如血小板減少癥、ITP,輸血后紫癜等[4]，PAIg的檢測(cè)是ITP診斷的重要指標(biāo)。目前臨床多采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)來(lái)檢測(cè)患者血液中的PAIg，包括PAIgA、PAIgG 和PAIgM[5]。本試驗(yàn)通過檢測(cè)妊娠合并ITP患者血小板計(jì)數(shù)(PLT)和PAIg水平，以探討在妊娠合并ITP患者預(yù)防產(chǎn)后出血中的作用及臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料試驗(yàn)組100例，來(lái)自2015年3～9月在本院住院、門診和優(yōu)生優(yōu)育中心就診的妊娠合并血小板減少的婦女，入選標(biāo)準(zhǔn)：初產(chǎn)婦，無(wú)其他合并癥，排除其他病史及繼發(fā)性血小板減少性因素，且未服用過影響PLT功能及凝血功能的藥物，所有患者均符合妊娠合并ITP的診斷標(biāo)準(zhǔn)。年齡24～35歲，平均27歲。對(duì)照組100例均來(lái)自健康產(chǎn)檢的健康妊娠婦女，年齡24～32歲，平均28歲。

1.2儀器與試劑主要儀器是美國(guó)BD公司生產(chǎn)的BD Calibur流式細(xì)胞儀，采用其原裝數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，試劑采用的是BD Pharmingen IgM-APC、BD Pharmingen IgG-PE和BD Pharmingen IgA-FITC、PBS緩沖液。輔助儀器是德國(guó)西門子ADVIA2120全自動(dòng)細(xì)胞分析儀。所有儀器原裝質(zhì)控品測(cè)試結(jié)果均在控。

1.3方法

1.3.1采血用真空采血管采集受試者肘靜脈血2管，每管各3 mL,一管用EDTA-K2抗凝，用于全血細(xì)胞分析；另一管用枸櫞酸鈉按1∶9抗凝，用作PAIg的檢測(cè)。

1.3.2全血細(xì)胞分析檢測(cè)應(yīng)用德國(guó)西門子ADVIA2120全自動(dòng)細(xì)胞分析儀檢測(cè)PLT，并依據(jù)PLT結(jié)果進(jìn)行分組。

1.3.3PAIg的測(cè)定應(yīng)用BD Calibur流式細(xì)胞分析儀進(jìn)行測(cè)定。取受試者富血小板血漿，用PBS緩沖液洗滌后，免疫熒光染色，同時(shí)設(shè)同型對(duì)照管，以下步驟均按流式細(xì)胞儀操作規(guī)程操作。將處理好的樣本蓋好，避光保存于2～8 ℃，以待上機(jī)檢測(cè)。儀器自帶軟件分析結(jié)果以百分率表示，比例超過5.0%為陽(yáng)性。

2結(jié)果

2.1PLT結(jié)果及分組情況本研究共計(jì)數(shù)了試驗(yàn)組100例妊娠合并ITP患者的PLT，根據(jù)PLT結(jié)果，將試驗(yàn)組分為1～4組，結(jié)果顯示其中PLT在(50～70)×109/L者居多，占納入研究對(duì)象的39.00%，對(duì)照組PLT為(150～220)×109/L，見表1。

表1　　PLT計(jì)數(shù)及分組結(jié)果

2.2PAIg檢測(cè)結(jié)果試驗(yàn)組與對(duì)照組PAIg檢測(cè)結(jié)果見表2。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，1、2和3組的PAIgA、PAIgG、PAIgM的測(cè)定值與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而4組與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。妊娠合并ITP患者與妊娠健康者PAIg陽(yáng)性率結(jié)果，見表3。試驗(yàn)組中1、2、3組的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中1組的陽(yáng)性率為最高，且PLT與PAIg的陽(yáng)性率呈負(fù)相關(guān)性(r<0,P<0.05)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)健康妊娠者和妊娠合并ITP患者PAIg結(jié)果見圖1、2。

表2　　各組PAIg測(cè)定結(jié)果

表3　　各組PAIg陽(yáng)性率比較[n(%)]

圖1　　健康妊娠者PAIg結(jié)果圖

圖2　　妊娠合并ITP患者PAIg結(jié)果圖

3討論

產(chǎn)后出血是指胎兒娩出后，經(jīng)陰道生產(chǎn)的產(chǎn)婦出血量超過500 mL或經(jīng)剖腹生產(chǎn)的產(chǎn)婦出血超過1 000 mL，它不僅是分娩期內(nèi)一種常見的嚴(yán)重產(chǎn)科并發(fā)癥，更是導(dǎo)致產(chǎn)婦死亡的主要原因之一[6]。產(chǎn)后出血的主要病因包括子宮收縮乏力、凝血功能障礙、軟產(chǎn)道裂傷及胎盤因素等，其臨床表現(xiàn)為產(chǎn)道出血急而量多，或持續(xù)性小量出血，多發(fā)生在產(chǎn)后2 h內(nèi)，一般發(fā)病較突然，如果短時(shí)間內(nèi)不能采取及時(shí)有效的措施進(jìn)行控制，則很可能發(fā)生失血性休克，從而導(dǎo)致產(chǎn)婦死亡。產(chǎn)后出血一旦發(fā)生，就很難控制，后果不堪設(shè)想，因此，防患于未然，如何預(yù)防產(chǎn)后出血就十分重要。

ITP是因免疫機(jī)制使血小板破壞增多的一種臨床綜合征，是最常見的一種血小板減少性紫癜，由于本病不影響生育，因此合并妊娠者常見，是產(chǎn)科嚴(yán)重并發(fā)癥之一。此外，有過ITP病史的女性，妊娠期容易復(fù)發(fā)，提示雌激素可能參與ITP的發(fā)病。目前認(rèn)為ITP是一種器官特異性自身免疫性出血性疾病，是由于人體產(chǎn)生了抗自身血小板的抗體導(dǎo)致單核巨噬系統(tǒng)破壞血小板過多造成血小板減少，其發(fā)病原因尚不完全清楚，發(fā)病機(jī)制也未完全闡明。臨床診斷主要基于PLT的減少、骨髓中巨核細(xì)胞數(shù)正常或增多，患者血液中存在PAIg。這種由病理性免疫所產(chǎn)生的抗體特異地結(jié)合于血小板膜上，引起血小板的破壞加速[7]。目前認(rèn)為主要是針對(duì)血小板膜糖蛋白(GPⅠb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)的抗體,這些自身抗體稱為PAIg，由于血小板與巨核細(xì)胞有共同抗原，因此這類抗體可同樣作用于巨核細(xì)胞，導(dǎo)致其成熟障礙，使血小板進(jìn)一步減少。在FCM測(cè)定方法出現(xiàn)之前，PAIg檢測(cè)的常用方法是ELISA法[8-9]，但是這種方法耗時(shí)長(zhǎng)，假陽(yáng)性高，步驟繁瑣，而FCM法卻能很好地克服這些缺點(diǎn)，特異性地針對(duì)細(xì)胞膜表面抗體進(jìn)行檢測(cè)[9-10]，且便于操作。FCM法所需標(biāo)本量少，即使PLT<10×109/L仍可精準(zhǔn)分析，方法簡(jiǎn)便、省時(shí)、可隨時(shí)測(cè)定單個(gè)標(biāo)本，而且能夠精確地了解血小板上3種不同抗體的分布情況，可以作為一個(gè)常規(guī)的臨床輔助診療檢測(cè)項(xiàng)目給臨床診斷提供更多的幫助[11]。

本試驗(yàn)通過對(duì)100例妊娠合并ITP患者進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，PLT結(jié)果與PAIg陽(yáng)性率呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，因此建議臨床對(duì)ITP患者可動(dòng)態(tài)觀察其PLT，作為判斷、監(jiān)測(cè)ITP病情的一個(gè)輔助指標(biāo)[12]；當(dāng)PLT<70×109/L時(shí)，PAIgA、PAIgG、PAIgM的陽(yáng)性檢出率均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。尤其當(dāng)PLT<30×109/L時(shí)，3種抗體的陽(yáng)性檢出率達(dá)均可以達(dá)到100.00%。妊娠合并ITP患者相對(duì)于健康妊娠者的PAIg明顯升高，由此可見PAIg升高在妊娠合并ITP發(fā)病機(jī)制中的作用不容忽視，并可將其作為監(jiān)測(cè)妊娠合并ITP患者病情進(jìn)展的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.14.036

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)14-1990-03

(收稿日期：2016-02-11修回日期：2016-04-29)