王振財(cái)

（朝陽(yáng)市中心血站，遼寧 朝陽(yáng) 122000）

?

ELISA檢測(cè)無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg設(shè)置灰區(qū)的意義

王振財(cái)

（朝陽(yáng)市中心血站，遼寧 朝陽(yáng) 122000）

【摘要】目的 研究探討ELLSA檢測(cè)無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg設(shè)置灰區(qū)的臨床意義。方法 配置出不同濃度的HBsAg血清樣本，使用ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，將檢測(cè)所獲得的S/CO、CV 值分別作為自變量和應(yīng)變量，使用相應(yīng)的軟件就可以獲得相應(yīng)方程式，即可獲得灰區(qū)范圍。結(jié)果 檢測(cè)結(jié)果顯示，濃度越高的HBsAg血清樣本，所得的CV值就會(huì)越低，而SD與S/CO則會(huì)由于血清濃度的升高升高，使用ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)HBsAg灰區(qū)的范圍為0.681～1.317。結(jié)論 在檢測(cè)無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg的時(shí)候，使用ELISA的檢測(cè)方法可以設(shè)置灰區(qū)的范圍，相對(duì)比固定值設(shè)置灰區(qū)更為科學(xué)、合理，同時(shí)還能夠降低弱陽(yáng)性標(biāo)本的漏檢率和假陽(yáng)性率，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】ELLSA檢測(cè)法；HBsAg；無(wú)償獻(xiàn)血者

臨床治療疾病的時(shí)候，如若需要輸血，最為關(guān)鍵的就是保證血液輸注的安全性［1］。全國(guó)范圍內(nèi)的血站都是根據(jù)國(guó)家衛(wèi)生部的規(guī)定來(lái)檢測(cè)采集血液進(jìn)行檢驗(yàn)。將合格的血液發(fā)放到臨床中輸注。隨著血液篩檢程序的嚴(yán)格性與病毒血清學(xué)敏感性的提高，通過(guò)血液傳播乙型肝炎病毒的危險(xiǎn)性明顯降低。目前各血站檢測(cè)HBsAg的時(shí)候，都是用酶聯(lián)免疫吸附（ELLSA）檢測(cè)法。該種檢測(cè)方法特異性較強(qiáng)、靈敏度較高。本文配置出不同濃度的HBsAg血清樣本。研究探討ELLSA檢測(cè)無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg設(shè)置灰區(qū)的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料：酶聯(lián)免疫吸附法乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒：廈門(mén)新創(chuàng)生物有限公司生產(chǎn)；HBsAg強(qiáng)陽(yáng)血清：采集自乙型肝炎患者；小牛血清：蘭州民海生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.2方法：在HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性血清中加入小牛血清，配置成濃度分別為4.1%、4.6%、24%、49%、100%血清樣品。在檢測(cè)的時(shí)候需要嚴(yán)格根據(jù)試劑盒上的操作要求進(jìn)行操作，針對(duì)不同濃度的血清，需要進(jìn)行HBsAg檢測(cè)。每種濃度都需檢測(cè)10次，均做雙孔，共50次，測(cè)定吸光度（A值），取平均值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件中的二次方程曲線、直線方程曲線、對(duì)數(shù)方程、等比級(jí)數(shù)曲線、復(fù)合曲線、指數(shù)方程曲線、S形曲線等進(jìn)行擬合，并進(jìn)行擬合優(yōu)度檢驗(yàn)。最終選出擬合度最好的曲線方程為回歸方程，將S/CO值設(shè)為1，根據(jù)回歸方程計(jì)算出CV值。然后將CV值帶入灰度范圍計(jì)算公式，計(jì)算出上下限值，獲得灰度設(shè)置范圍。

2 結(jié) 果

檢測(cè)結(jié)果顯示，濃度越高的HBsAg血清樣本，所得的CV值就會(huì)越低，而SD與S/CO則會(huì)由于血清濃度的升高升高，使用ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)HBsAg灰區(qū)的范圍為0.681～1.317，見(jiàn)表1。

表1　不同濃度HBsAg血清標(biāo)本的ELISA檢測(cè)結(jié)果比較

3 討 論

酶聯(lián)免疫吸附（ELLSA）檢測(cè)法通過(guò)檢測(cè)樣本的吸光度值與臨界閾值之間的關(guān)系來(lái)判定標(biāo)本的陰陽(yáng)性［2］。如果吸光值超過(guò)臨界閾值，就判斷為陽(yáng)性；如果小于閾值，則為陰性。如果兩種相等，就需要進(jìn)行多次檢驗(yàn)。受到檢驗(yàn)結(jié)果的變異性特點(diǎn)，S/CO（吸光度值/臨界閾值）主要是分布在1的兩側(cè)區(qū)域。曾經(jīng)有報(bào)道就指出，使用ELLSA檢測(cè)法對(duì)HBsAg檢測(cè)的時(shí)候，檢測(cè)值在灰區(qū)內(nèi)的標(biāo)本需要進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，結(jié)果就發(fā)現(xiàn)超過(guò)20%的樣本值高于閾值。具體而言，該種方法是對(duì)灰區(qū)內(nèi)標(biāo)本檢測(cè)HBsAg進(jìn)行復(fù)檢。部分學(xué)者認(rèn)為0.9～1.1屬于比較高陽(yáng)性傾向，需要以陽(yáng)性標(biāo)本的S/CO值始終保持在灰區(qū)范圍內(nèi)，從而達(dá)到控制臨界陽(yáng)性標(biāo)本的目的。在本次研究活動(dòng)開(kāi)展的過(guò)程中擬在S/CO=1（即吸光度等于臨界閾值）的理想狀態(tài)下，對(duì)標(biāo)本做無(wú)限次ELISA實(shí)驗(yàn)，將（均數(shù)±2×標(biāo)準(zhǔn)差）作為質(zhì)量控制限時(shí)，均數(shù)+2×標(biāo)準(zhǔn)差為S/CO值上限，均數(shù)－2×標(biāo)準(zhǔn)差為S/CO值下限。其中標(biāo)準(zhǔn)差為變異系數(shù)與均數(shù)的乘積，而均數(shù)值又設(shè)為 1，所以可將上述公式轉(zhuǎn)換為（1±2×CV），這樣就可以將灰區(qū)的范圍計(jì)算出來(lái)。但是，事實(shí)上，S/CO為1來(lái)作為臨界陽(yáng)性標(biāo)本是難以實(shí)現(xiàn)的，并且無(wú)限次的ELISA的試驗(yàn)也是不會(huì)實(shí)現(xiàn)的，造成在實(shí)際工作中可以直接設(shè)定ELISA灰區(qū)。通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果顯示ELISA法檢測(cè)HBsAg獲得的S/CO值與CV值存在一定相關(guān)性，在對(duì)5種濃度的HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，獲得了多個(gè)CV和S/CO數(shù)據(jù)，分別將其作為應(yīng)變量和自變量，應(yīng)用SPSS軟件擬合曲線獲得回歸方程，再將S/CO值設(shè)為1，通過(guò)回歸方程算出擬合CV值，最終帶入灰區(qū)計(jì)算公式獲得灰區(qū)范圍［3］。

綜上所述，在檢測(cè)無(wú)償獻(xiàn)血者HBsAg的時(shí)候，使用ELISA的檢測(cè)方法可以設(shè)置灰區(qū)的范圍，相對(duì)比固定值設(shè)置灰區(qū)更為科學(xué)、合理，同時(shí)還能夠降低弱陽(yáng)性標(biāo)本的漏檢率和假陽(yáng)性率，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)

［1］ 宋美蘭，任芙蓉，龔曉燕，等.獻(xiàn)血者HBsAg及抗-HCV ELISA篩查不合格標(biāo)本的假陽(yáng)性分析［J］.北京醫(yī)學(xué)，2013，35（5）:391-395.

［2］ 容瑩，孫秀雙，鄭望春，等.乙型肝炎表面抗原檢測(cè)結(jié)果分析及灰區(qū)設(shè)置探討［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（15）:1593-1595.

［3］ 徐錦霞 .ELISA 檢測(cè)獻(xiàn)血者HBsAg設(shè)定灰區(qū)的必要性［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7（21）:2361-2362.

中圖分類(lèi)號(hào)：R446.62

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1671-8194（2016）05-0150-01