于淼琛，李士軍，孫國華，姜鳳全，周　業(yè)

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 檢驗科，遼寧 大連 116011)

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生化部分常規(guī)項目干濕化學(xué)檢測結(jié)果一致性分析

于淼琛，李士軍，孫國華，姜鳳全，周業(yè)

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院 檢驗科，遼寧 大連 116011)

[摘要]目的干濕化學(xué)分析儀對9項生化檢驗結(jié)果進(jìn)行比對分析和偏倚評估，了解兩檢測系統(tǒng)的一致性，以及能否共用濕化學(xué)分析法參考區(qū)間。方法依照美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI) EP9-A2 文件，以日立7600全自動生化分析儀為參比方法，美國強生VITROS 5600全自動生化免疫分析儀為實驗方法，對血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣、磷測定的結(jié)果進(jìn)行方法學(xué)比對、相關(guān)性分析和偏倚評估，并判斷偏倚是否可以接受。對臨床不可接受的項目依據(jù)兩方法的線性回歸方程進(jìn)行校正，并對校正后的結(jié)果再進(jìn)行相關(guān)性分析和臨床可接受性評價。最后對各自的參考區(qū)間進(jìn)行驗證。結(jié)果兩種方法測定血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣、磷相關(guān)系數(shù)r2≥0.95，血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣醫(yī)學(xué)決定水平的系統(tǒng)誤差均小于允許偏差EA的1/2，磷醫(yī)學(xué)決定水平的系統(tǒng)誤差大于允許偏差EA的1/2，校正干化學(xué)儀參數(shù)后，磷相關(guān)系數(shù)r2≥0.95，磷醫(yī)學(xué)決定水平的系統(tǒng)誤差小于允許偏差EA的1/2。9項生化項目的參考區(qū)間驗證均合格。結(jié)論兩檢測系統(tǒng)血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣有可比性，磷經(jīng)校正后相關(guān)性良好，有可比性，經(jīng)參考區(qū)間驗證，可共用參比方法的參考區(qū)間。

[關(guān)鍵詞]干化學(xué)；濕化學(xué)；相關(guān)性分析

[引用本文]于淼琛，李士軍，孫國華，等.生化部分常規(guī)項目干濕化學(xué)檢測結(jié)果一致性分析[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016,38(2)：172-176.

近年來，由于干化學(xué)分析法在臨床生化檢驗中試劑穩(wěn)定、保存時間長、干擾因素少、無沖洗管路、24 h待機，隨時可用，并且參數(shù)非常穩(wěn)定[1]，無需經(jīng)常定標(biāo)，很多醫(yī)院應(yīng)用于急診檢驗。濕化學(xué)分析法作為傳統(tǒng)的分析方法，可大批量檢測，一般用于平診檢測。由于方法學(xué)、儀器的原理等方面存在較大差異，而且兩種分析方法參考區(qū)間也不一致[2]，導(dǎo)致同一項目在不同系統(tǒng)上的測定結(jié)果沒有可比性。日立7600全自動生化分析儀血糖(GLU)參考范圍為3.89～6.11 mmol/L；尿素氮(BUN)為2.86～7.86 mmol/L；肌酐(CRE)為53～97 μmol/L(男)，35～71 μmol/L(女)；尿酸(UA)為208～428 μmol/L(男)，155～357 μmol/L(女)；血鉀(K)為3.5～5.3 mmol/L；鈉(Na)為137～147 mmol/L；氯(Cl)為99～110 mmol/L；血清鈣(Ca)為2.02～2.6 mmol/L；血清磷(PHOS)為0.87～1.45 mmol/L。而強生VITROS 5600全自動生化免疫分析儀血糖參考范圍為4.1～5.9 mmol/L；尿素氮為3.2～7.1 mmol/L；肌酐為58～110 μmol/L(男)，46～92 μmol/L(女)；尿酸為208～506 μmol/L(男)，149～369 μmol/L(女)；血鉀為3.5～5.1 mmol/L；鈉為137～145 mmol/L；氯為98～107 mmol/L；血清鈣為2.1～2.55 mmol/L；血清磷為0.81～1.45 mmol/L。這樣會造成同一患者在急診平診不同分析系統(tǒng)上檢測結(jié)果缺乏可比性，給臨床醫(yī)生對疾病的判斷帶來嚴(yán)重困擾，因此干、濕化學(xué)分析法檢測同一生化項目的檢驗結(jié)果與參考區(qū)間的一致性非常的重要[3]。本文參照美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會EP9-A2文件的要求[4]，用干濕生化分析法對生化常規(guī)9個項目的檢測結(jié)果進(jìn)行比對分析和偏倚評估，判斷它們在臨床的可接受性，探討每一個項目在兩臺儀器上能否共用同一個參考區(qū)間。

1資料與方法

1.1標(biāo)本來源

收集2015年3月到5月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院門診及住院患者共360例新鮮無溶血、無乳糜血清。濃度盡量覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平，不使用控制品或標(biāo)準(zhǔn)品[5]。對這些標(biāo)本進(jìn)行血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣、磷的檢測。

1.2實驗儀器

日立7600全自動生化分析儀；美國強生VITROS 5600全自動生化免疫分析儀(簡稱VITROS 5600)。

1.3實驗試劑

日立7600全自動生化分析儀血糖、肌酐使用日本和光試劑；尿素氮、尿酸使用日本世諾試劑；鉀、鈉、氯使用日立配套試劑；鈣使用英國朗道試劑；磷使用和光試劑。血糖、肌酐、尿酸、鈣、磷使用羅氏c.f.a.s校準(zhǔn)品；尿素氮使用日本世諾配套校準(zhǔn)品，鉀、鈉、氯使用日立校準(zhǔn)品；血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鈣、磷使用英國朗道LEVEL2， LEVEL3，鉀、鈉、氯使用日立質(zhì)控品。美國強生VITROS 5600全自動生化免疫分析儀使用原裝配套血糖、尿素氮、肌酐、尿酸、鉀、鈉、氯、鈣、磷干片試劑、強生配套校準(zhǔn)品、強生配套質(zhì)控品。

1.4實驗方法

每臺儀器實驗前按儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程保養(yǎng)，每日兩次兩水平質(zhì)控均合格前提下嚴(yán)格按照廠商試劑盒的說明書進(jìn)行每個項目的檢測。樣本分5批，每批樣本分別用干濕化學(xué)分析法按1,2,3,4,5,6,7,8,8,7,6,5,4,3,2,1的順序測定，在2 h內(nèi)完成實驗。在進(jìn)行方法學(xué)間的比對實驗時，因日立7600全自動生化分析儀量值溯源性好，在多年的衛(wèi)生部室間質(zhì)評中成績優(yōu)秀，并且已通過15189實驗室認(rèn)可，因此作為本實驗的參比方法(X)，強生VITROS 5600作為本實驗的實驗方法(Y)。

1.5數(shù)據(jù)處理

不使用具有明確人為誤差的檢測結(jié)果；按EP9-A2文件的要求對方法間離群值進(jìn)行檢查；用相關(guān)系數(shù)(r)對相關(guān)性作粗略評估，若r≥0.975或r2≥0.95，則認(rèn)為X范圍合適，兩方法的相關(guān)性好，直線回歸統(tǒng)計的斜率和截距可靠。計算線性回歸方程：實驗方法Y=aX+b。計算方法間的系統(tǒng)誤差：依據(jù)臨床的要求，把每個項目高中低相應(yīng)的醫(yī)學(xué)決定水平濃度Xc代入已知的線性回歸方程，進(jìn)而計算出實驗方法(Y)與參比方法(X)之間的SE和相對偏差(SE%)，SE=[Yc-Xc]，SE%=SE/Xc×100%。根據(jù)美國臨床實驗室修正法規(guī) CLIA′88[6]對室間評估的允許偏差(EA)，若兩儀器間比較評估的相對偏差(SE%)不大于1/2EA(即SE%≤1/2 CLIA′88)，則視為臨床上的可接受，即視為比對的兩臺儀器間對同一生化項目的測定結(jié)果具有可比性，臨床上是可以接受的。

1.6實驗儀器的參數(shù)調(diào)整

測定結(jié)果不可接受的項目，根據(jù)回歸方程的斜率和截距修改實驗儀器上不可接受項目的參數(shù)。對該項目按1.4、1.5方法再次比對。

1.7參考區(qū)間驗證

制定詳細(xì)、明確的標(biāo)準(zhǔn)，將非健康者排除在參考樣品組之外。注意年齡段分布，不要集中于青年人，盡可能選擇與使用該項目的臨床病人分布組成相近。參考區(qū)間有性別區(qū)分的，還應(yīng)按性別分組。抽取健康個體20例進(jìn)行參考區(qū)間驗證。

2結(jié)果

2.1兩儀器室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果

兩儀器室內(nèi)質(zhì)控變異系數(shù)見表1。兩臺生化分析儀器的性能良好，檢測結(jié)果可信。

表1　兩儀器室內(nèi)質(zhì)控變異系數(shù)

室內(nèi)質(zhì)控的CV值應(yīng)小于或等于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，兩臺儀器各個項目最近一次室間質(zhì)評均合格

2.2方法間離群點的判斷

參照EP9-A2文件進(jìn)行方法間離群點檢驗，此次所驗證的9項生化指標(biāo)中肌酐發(fā)現(xiàn)兩個離群點。

2.3兩種檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的相關(guān)性分析

以日立7600測定值的平均值為X，以VITROS 5600測定值平均值為Y，回歸方程和相關(guān)系數(shù)見表2。9個項目r2≥0.95，認(rèn)為X范圍合適，直線回歸統(tǒng)計的斜率和截距可靠，可用于評估兩種方法之間的偏移。

表2　兩種檢測系統(tǒng)9種項目回歸方程和相關(guān)系數(shù)

2.4兩種系統(tǒng)偏移評估和可接受性評價

兩種檢測系統(tǒng)間血糖、尿素氮、肌酐、尿素、鉀、鈉、氯、鈣的測定結(jié)果具有可比性。磷在多水平的預(yù)期中不具有可比性，臨床不可以接受。結(jié)果見表3。

2.5PHOS的臨床接受性能評價

根據(jù)2.3得出PHOS回歸方程為Y=1.0678X+0.1465，校正儀器后重新檢測兩種系統(tǒng)，得出PHOS回歸方程為Y=0.9707X+0.0009，r2=0.995。校正儀器后重新檢測兩種系統(tǒng)，PHOS的再次臨床可接受性評估見表4。

表3　兩種檢測系統(tǒng)9種項目的臨床可接受性評估

表4　兩種檢測系統(tǒng)PHOS的臨床可接受性評估

2.6參考區(qū)間驗證

20例參考個體中不超過1例(或5%的結(jié)果)的觀察值在驗證參考區(qū)間之外，參考區(qū)間的實驗室報告的95%參考區(qū)間可以接受。血糖、尿素氮、鉀、鈉、氯、鈣、磷參考區(qū)間驗證見表5。肌酐、尿酸參考區(qū)間驗證見表6。

表5　糖、尿素氮、鉀、鈉、氯、鈣、磷參考區(qū)間驗證

參考基準(zhǔn)GLU為3.89～6.11mmol/L；BUN為2.86～7.86 mmol/L； K為3.5～5.3 mmol/L；Na為137～147 mmol/L；Cl為99～110 mmol/L；Ca為2.02～2.6 mmol/L；PHOS為0.87～1.45 mmol/L。驗證顯示GLU、BUN、K、Na、Ca均100%在參考范圍內(nèi)，Cl和PHOS為95%在參考范圍內(nèi)，結(jié)果判定均為合格

表6　肌酐、尿酸參考區(qū)間驗證

參考基準(zhǔn)CRE為53～97 μmol/L(男)，35～71 μmol/L(女)；UA為208～428 μmol/L(男)，155～357 μmol/L(女)。驗證顯示CRE和UA均100%在參考范圍內(nèi)，結(jié)果判定均為合格

3討論

全自動生化分析儀為目前最有發(fā)展前景的生化分析儀，在國際上，部分發(fā)達(dá)國家都已普遍使用。隨著中國醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的進(jìn)步，當(dāng)前，同一醫(yī)院的同一檢測項目有多個不同的檢測系統(tǒng)，而每個檢測系統(tǒng)有各自不同的檢測原理、方法，不同的校準(zhǔn)溯源、不一樣的試劑及質(zhì)控品，導(dǎo)致同一醫(yī)院、同一項目檢測結(jié)果的參考范圍不同，檢測出的結(jié)果沒有可比性，給臨床疾病的診斷帶來一定的困難。因此，使不同檢測系統(tǒng)對同一項目的檢測具有可比性非常重要[7-9]。

本研究中兩臺檢測儀器的檢測原理雖然不同，濕化學(xué)法是透射光度法，干化學(xué)法是反射光度法，但是兩儀器對同一生化項目的化學(xué)反應(yīng)原理都相同，例如電解質(zhì)都是離子選擇電極法，葡萄糖都是己糖激酶法，所以具有可比性。從表2可以看出，兩儀器比對的9個項目的相關(guān)系數(shù)r2≥0.95，說明兩方法相關(guān)性良好，表3中，糖、尿素氮、尿酸、肌酐、鉀、鈉、氯、鈣在臨床均可接受，具有可比性。但磷在醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差不可接受。完整的比對實驗除了單純的系統(tǒng)比對，還要包括對不可接受項目參數(shù)的整改，一方面可以通過都測定新鮮血清來校正對應(yīng)儀器，另一方面可通過回歸方程中的斜率和截距作為校正因子來校正對應(yīng)儀器[10]，不同實驗室可以根據(jù)自己的情況來決定使用何種方法[11]。本實驗采用初次比對中磷的回歸方程中的斜率和截距作為校正因子來校正VITROS 5600，最后達(dá)到了結(jié)果的一致性。調(diào)整參數(shù)后，重新對磷對比，在醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差均可接受[12-13]。本研究最后進(jìn)行的參考區(qū)間驗證均合格，表明實驗儀器共用的參考區(qū)間可以接受。但值得注意的是在測定肌酐時，出現(xiàn)了兩個離群點。通過對臨床回訪，發(fā)現(xiàn)這兩位患者均來自腎內(nèi)科，均服用了多貝斯進(jìn)行藥物治療，多貝斯對濕化學(xué)方法的負(fù)項干擾大，對干化學(xué)干擾小，因此對于腎內(nèi)科患者使用多貝斯時，建議對于肌酐的動態(tài)監(jiān)測以干化學(xué)方法為準(zhǔn)[14]。本次比對試驗均采用生化血清標(biāo)本，但實際上檢驗科急診室干化學(xué)采用的是血漿標(biāo)本，而關(guān)于標(biāo)本類型不同對干濕化學(xué)可比性的影響并未評估，有待進(jìn)一步研究。

干濕生化分析儀在統(tǒng)一參考區(qū)間后，解決了患者在平診急診檢測同一項目時檢測結(jié)果無可比性的障礙，給臨床提供方便，在疾病的診斷和治療方面意義重大。

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基金課題：國家自然科學(xué)基金項目(81473504)

Consistency analysis on results of some routine biochemical items by dry and wet chemical methods

YU Miao-chen, LI Shi-jun, SUN Guo-hua, JIANG Feng-quan, ZHOU Ye

(ClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116011,China)

[Abstract]Objective According to the analysis comparison and the bias estimation of nine biochemical item results by Wet and dry chemistry analyzer，we want to understand the consistency of the two detection systems and if they can share the same reference interval. Methods According to CLSI EP9-A2 document, Hitachi 7600 automatic biochemical analyzer (as the reference method) and Johnson & Johnson Vitros 5600 automatic biochemical analyzer (as the laboratory method) were used respectively to determine blood glucose, blood urea nitrogen, creatinine, uric acid, potassium, sodium, chloride, calcium, phosphorus and evaluate the bias within methodological linear limitation. The bias of the biochemical item exceeding medical decision standard were adjusted based on the linear equation of the results determined by the two methods and then used for correlation analysis and acceptable evaluation. Finally, the respective reference intervals were verified. Results The correlation coefficient of Blood glucose, blood urea nitrogen, creatinine, uric acid, potassium, sodium, chloride, calcium by wet and dry chemistry analyzer were fine (r2≥0.95) and the systematic error at the medical decision were clinically accepted (SE<1/2 CLIA′88). By correcting dry chemistry analyzer parameters, the correlation coefficient of phosphorus was fine (r2≥0.95) and the systematic error at the medical decision was clinically accepted (SE<1/2 CLIA′88). The verification of nine Biochemical items were all qualified. Conclusion The results of blood glucose, blood urea nitrogen, creatinine, uric acid, potassium, sodium, chloride, calcium and corrected phosphorus are all comparable; they can share the reference interval of the reference method.

[Key words]dry chemical method; wet chemical method; correlation analysis

作者簡介：于淼琛(1982-)，女，遼寧大連人，主管技師。E-mail：ymc7788999@163.com 通信作者：姜鳳全，副主任技師。E-mail：jiangfengquan@126.com 解 龍(1987-)，男，安徽阜陽人，碩士研究生。E-mail：doctorxielong@163.com

doi:論著10.11724/jdmu.2016.02.18 論著10.11724/jdmu.2016.02.19

[中圖分類號]R446.11

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

文章編號：1671-7295(2016)02-0172-05

(收稿日期：2015-09-14；修回日期：2016-03-16)

通信作者：鞏 鵬，教授。E-mail：gongpengdalian@163.com