韓 寧， 李增春， 蔡鄭東， 徐 翀

(1. 同濟(jì)大學(xué)東方醫(yī)院急診創(chuàng)傷外科，上海 200120; 2. 同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院骨科，上海 200172; 3. 上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院骨科，上海 200080)

?

·基礎(chǔ)研究·

利福平抑制地塞米松誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的機(jī)制研究

韓 寧1,2， 李增春1， 蔡鄭東2,3， 徐 翀1

(1. 同濟(jì)大學(xué)東方醫(yī)院急診創(chuàng)傷外科，上海 200120; 2. 同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院骨科，上海 200172; 3. 上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院骨科，上海 200080)

目的 明確利福平對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stroma cell, BMSC)成脂分化的作用。方法 體外培養(yǎng)Sprague-Dawley大鼠BMSC并隨機(jī)分為4組： 5μg/ml利福平+10-6mol/L地塞米松(A)，PBS+10-6mol/L地塞米松(B)，5μg/ml利福平(C)和PBS(D)。分別應(yīng)用羅丹明123結(jié)合流式細(xì)胞儀方法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測 5μg/ml 利福平對BMSC的P糖蛋白活性和胞內(nèi)地塞米松蓄積濃度影響。各組孵育14d后，分別進(jìn)行油紅O染色和堿性磷酸酶染色，定量檢測三酰甘油含量、堿性磷酸酶活力、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ) mRNA和Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runx2)mRNA表達(dá)。結(jié)果 利福平減少BMSC胞內(nèi)羅丹明123強(qiáng)度和胞內(nèi)地塞米松蓄積量(P<0.01)。B組誘導(dǎo)BMSC成脂分化、PPARγ mRNA表達(dá)增加和三酰甘油含量升高。A組、C組和D組BMSC未發(fā)生成脂分化，PPARγ mRNA表達(dá)增加和三酰甘油含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。A組BMSC堿性磷酸酶活性和Runx2 mRNA表達(dá)最強(qiáng)(P<0.01)，B組堿性磷酸酶活性和Runx2 mRNA表達(dá)下降(P<0.01)。結(jié)論 利福平上調(diào)BMSC的P糖蛋白活性，抑制糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的成脂分化。

利福平； P糖蛋白； 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞； 糖皮質(zhì)激素； 成脂分化

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow stromal cell， BMSC)是一種多能干細(xì)胞，可被誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和軟骨細(xì)胞等[1-3]。其中，糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)BMSC成脂分化，抑制成骨分化被認(rèn)為是激素性骨質(zhì)疏松和激素性股骨頭壞死的重要機(jī)制[4-5]。

高濃度糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)BMSC成脂分化，抑制BMSC成骨分化，進(jìn)而導(dǎo)致骨組織內(nèi)骨髓脂肪化加劇，骨小梁纖細(xì)，發(fā)生骨質(zhì)疏松。在股骨頭內(nèi)糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)BMSC過度成脂分化升高股骨頭內(nèi)壓，引發(fā)股骨頭內(nèi)缺血致骨壞死[4-6]。前期研究發(fā)現(xiàn)全身應(yīng)用利福平可上調(diào)股骨頭內(nèi)P糖蛋白表達(dá)，減少股骨頭內(nèi)脂肪化，骨小梁增粗[4]。P糖蛋白是一種膜蛋白，它通過消耗ATP外泵進(jìn)入胞內(nèi)的糖皮質(zhì)激素，降低胞內(nèi)激素濃度，削弱激素藥理作用[7-8]。由于隨著糖皮質(zhì)激素濃度升高，BMSC成脂分化越顯著，成骨分化逐漸減弱[9]。推測利福平可能存在增加BMSC細(xì)胞膜上P糖蛋白活性，減少了胞內(nèi)糖皮質(zhì)激素蓄積，抑制成脂分化的作用。

為證實(shí)上述假設(shè)，本研究應(yīng)用利福平增強(qiáng)BMSC的P糖蛋白活性，明確其對BMSC成脂分化的干預(yù)作用和機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 清潔級Sprague_Dawley(SD)大鼠，體質(zhì)量250～300g，7周齡，由同濟(jì)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料 高糖DMEM培養(yǎng)液(美國Gibco公司)，10%胎牛血清(以色列Beit Haemek有限公司)，含0.02%EDTA的0.25%胰蛋白酶(Gibco公司)，percoll分離液(Sigma)，利福平(Sigma)，地塞米松(Sigma)，羅丹明123(Sigma)，油紅O(sigma)，細(xì)胞裂解液(sigma)，培養(yǎng)瓶、24孔板(美國Corning公司)，流式細(xì)胞儀(美國Becton Drive)，地塞米松的ELISA試劑盒(美國Neogen公司)，細(xì)胞裂解液(Sigma)，三酰甘油酶法定量檢測試劑盒(上海鈺森生物技術(shù)有限公司)，堿性磷酸酶活力分析試劑盒(上海鈺森生物技術(shù)有限公司)，TrizoI 試劑(Sigma)，ChIoroform(Sigma)，SuperScript Ⅱ試劑盒(加拿大I nvitrogen 公司)，紫外光分光光度儀(德國Eppendoff公司)，U-1500 Spectrophotometer 型分光光度儀(日本HITACHI 公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 BMSC分離培養(yǎng) 密度梯度離心聯(lián)合差速貼壁法分離BMSC[10]。取SD大鼠無菌條件下去除雙側(cè)股骨遠(yuǎn)近側(cè)干骺端，以DMEM高糖完全培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)沖洗。沖洗液充分混勻后轉(zhuǎn)移至10ml percoll分離液(d=1.073g/ml)上層，900g離心20min，離心半徑12cm。PBS洗滌中間富含BMSC的單個(gè)核細(xì)胞層兩次，單細(xì)胞懸液以5×108/ml接種于25cm2培養(yǎng)瓶。置37℃、相對體積分?jǐn)?shù)為5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞孵箱培養(yǎng)48～72h后全量換液，棄去未貼壁細(xì)胞，以后每2～3d換液一次。生長至80%融合后以含0.02%EDTA的0.25%的胰蛋白酶消化傳代。

將BMSC以 1×105/ml接種于24孔板，隨機(jī)分為4組。A組和B組分別加入終濃度為5μg/ml的利福平和PBS，繼而再分別加入終濃度為10-6mol/L的地塞米松共同孵育14d。C組和D組僅分別加入終濃度為5μg/ml利福平和PBS孵育14d，作為對照組。

1.2.2 P糖蛋白活性檢測 應(yīng)用Feller[11]介紹的方法檢測利福平和維拉帕米對BMSC的P糖蛋白活性影響。1×105/ml的BMSC單細(xì)胞懸液分為2組，每組10個(gè)樣品。置37℃、相對體積分?jǐn)?shù)為5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞孵箱孵育1h后，加入終濃度為0.2μg/ml羅丹明123。37℃、5%CO2飽和濕度的孵箱中培養(yǎng)30min。PBS洗滌細(xì)胞2遍，重懸于DMEM培養(yǎng)液中(各組分別加入終濃度5μg/ml 利福平和PBS)。37℃、5%CO2飽和濕度的孵箱中培養(yǎng)60min，200g離心10min，離心半徑12cm。重懸于0.5ml PBS中，立即以流式細(xì)胞儀測定熒光強(qiáng)度。激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為488nm和525nm。不含羅丹明123染液的BMSC為對照組。

1.2.3 地塞米松胞內(nèi)蓄積 應(yīng)用地塞米松ELISA試劑盒檢測BMSC胞內(nèi)的地塞米松蓄積。1×105/ml的BMSC單細(xì)胞懸液分為2組置于24孔板，每組分別加入終濃度5μg/ml利福平和PBS后，繼而加入10-6mol/L地塞米松孵育24h，每組10個(gè)樣本。24h后以細(xì)胞裂解液裂解BMSC，900g離心10min。取上清液，根據(jù)地塞米松ELISA試劑盒說明書檢測各組的地塞米松濃度。

1.2.4 油紅O染色 各組分別孵育14d后，以4%多聚甲醛固定10min。蒸餾水洗去固定液，70%乙醇浸漬1min，加油紅O染液染色20min, 棄去染液，70%乙醇分化數(shù)秒，流水沖洗并用蒸餾水洗5min，蘇木精復(fù)染。×400光鏡下計(jì)數(shù)各組爬片上胞漿中包含紅色脂滴顆粒的脂化細(xì)胞。

1.2.5 堿性磷酸酶(AKP)染色 各組孵育14d后，以固定液固定5s。干燥后用基質(zhì)液染色15min，流水沖洗好晾干；蘇木精復(fù)染10min后水沖，晾干后鏡檢。×400光鏡下計(jì)數(shù)各組爬片上AKP表達(dá)陽性的細(xì)胞。

1.2.6 三酰甘油含量的定量檢測 各組孵育14d后，分別以50μl細(xì)胞裂解液完全裂解各組細(xì)胞，700g離心10min，離心半徑12cm。取上清液。測定管取16μl上清液，標(biāo)準(zhǔn)管取16μl R3液，空白管取16μl蒸餾水；分別與1ml R1液混勻，37℃水浴15min。各管分別加入500μl R2液混勻，37℃溫箱內(nèi)靜置5min。以空白管調(diào)零，550nm測吸光度。根據(jù)說明書提供的公式計(jì)算血清三酰甘油(TG)濃度(mmol/L)。

1.2.7 AKP含量的定量檢測 依據(jù)AKP 檢測試劑盒說明，各組細(xì)胞孵育14d后，重懸于PBS，加入60μl 蛋白上清液與100μl 緩沖液、基質(zhì)液，充分混勻。各組于37 ℃水浴反應(yīng)15min，加顯色劑150μl終止反應(yīng)并混勻。各組于酶標(biāo)儀490nm波長處測定吸光度。

1.2.8 過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ) mRNA和Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runx2)的mRNA表達(dá) 孵育14d后，各組細(xì)胞中加入1000ml TrizoI 試劑和200mI ChIoroform，混勻后離心，收集離心液的RNA 層并加入2-ProponoI 500ml繼續(xù)離心。去除上清液，以75%乙醇清洗沉淀物，離心去除乙醇，以雙蒸水溶解RNA。U-1500 Spectrophoto-meter型分光光度儀(HITACHI 公司，日本)測RNA濃度。

取各組RNA 1μg，經(jīng)DNA 酶處理后，用SuperScript Ⅱ試劑盒經(jīng)DNA Engine 反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以cDNA 為模板，用SYBR Green Ⅰ法，在95°C經(jīng)3min變性后，進(jìn)行95℃15s、60℃15s 和72℃ 30s反應(yīng)，40次循環(huán)。對各組的熒光PCR 產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測分析。每一個(gè)周期的最后一個(gè)步驟都設(shè)置了熒光產(chǎn)物的檢測。為確定擴(kuò)增的特異性，應(yīng)用循環(huán)方案對所有最終聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行了熔融曲線分析。此外，沒有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的樣品也進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)，以排除基因組的核酸污染。從一系列的GAPDH質(zhì)?；蚪McDNA稀釋制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。PPARγ和Runx2表達(dá)均分別以GAPDH進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。引物在表1中列出。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)引物

1.2.9 統(tǒng)計(jì)分析 所得的數(shù)據(jù)均采用Stata 7.0軟件進(jìn)行兩兩比較t檢驗(yàn)。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 BMSC分離培養(yǎng)

BMSC細(xì)胞為長梭形，貼附于培養(yǎng)瓶底部， 每7～10d生長達(dá)到融合。以0. 25%胰蛋白酶消化傳代，細(xì)胞于24h內(nèi)完全貼壁，形態(tài)與原代細(xì)胞相似，7～10 d達(dá)到融合。取第4～6代細(xì)胞用于試驗(yàn)。

2.2 BMSC的P糖蛋白活性檢測

5μg/ml利福平處理細(xì)胞內(nèi)平均熒光強(qiáng)度低于PBS處理組(P<0.01)(圖1A)。5μg/ml利福平處理后，BMSC胞內(nèi)地塞米松濃度低于PBS處理組(P<0.01)(圖1B)。

圖1 BMSC胞內(nèi)rhodamine123熒光值和地塞米松蓄積Fig.1 Mean fluorescent value of rhodamine123 and dexamethasone accumulation in BMSCs(A) 5μg/ml利福平減少BMSC胞內(nèi)rhodamine123熒光值(B) 5μg/ml利福平減少BMSC胞內(nèi)地塞米松蓄積*PBS處理BMSC與5μg/ml利福平處理BMSC相比較，aP<0.01

2.3 油紅O染色

B組中BMSC胞漿中出現(xiàn)逐漸增多的脂滴，被油紅O染為紅色。A組BMSC未出現(xiàn)脂肪化(圖2A)。B組脂化細(xì)胞數(shù)高于A組。A組脂化細(xì)胞數(shù)和C組、D組無顯著差異(表2)。

2.4 AKP染色

AKP染色陽性細(xì)胞呈現(xiàn)紫紅色胞漿。A組AKP染色最顯著，B組AKP染色減弱。C組和D組BMSC的AKP染色呈陰性(圖2B)。

圖2 油紅O和堿性磷酸酶染色Fig.2 Oil red O staining and AKP staining of BMSCs(A) 油紅O染色： B組中10-6mol/L地塞米松導(dǎo)致BMSC成脂分化，胞內(nèi)出現(xiàn)紅色脂滴，應(yīng)用利福平后，抑制地塞米松誘導(dǎo)的成脂分化： A組、C組和D組油紅O染色呈陰性；(B) 堿性磷酸酶染色： A組堿性磷酸酶染色強(qiáng)陽性，陽性細(xì)胞胞漿為紅色，B組堿性磷酸酶染色減弱，C組和D組染色為陰性

2.5 TG定量檢測

B組TG含量高于A組。A組三酰甘油含量和C組、D組無顯著差異，表2。

表2 成脂分化細(xì)胞數(shù)量，三酰甘油和堿性磷酸酶活性定量

分組成脂分化細(xì)胞數(shù)量/cm2甘油三酯含量/mmol·L-1堿性磷酸酶活性/U·L-1A組10.8±5.1712.50±0.70199.80±68.75aB組90.4±9.02b14.03±0.66b60.00±26.24bC組12.60±5.5012.08±1.1029.00±14.05D組10.6±3.3612.24±0.7529.80±10.33

注： A組與B組、C組和D組相比較，aP<0.01；B組與A組、C組和D組相比較，bP<0.01

2.6 AKP定量檢測

A組AKP含量高于B組。B組AKP含量高于C組和D組。C組和D組AKP表達(dá)呈陰性(表2)。

2.7 PPARγ mRNA和Runx2 mRNA表達(dá)

B組PPARγ mRNA表達(dá)高于A組。A組PPARγ mRNA表達(dá)和C組、D組無顯著差異(圖3)。A組Runx2 mRNA表達(dá)高于B組。B組Runx2 mRNA表達(dá)高于C組和D組。

圖3 PPARγ mRNA和Runx2 mRNA定量Fig.3 Quantitative analysis of PPARγ mRNA and Runx2 mRNA(A) PPARγ2 mRNA半定量： B組PPARγ2 mRNA表達(dá)最高，A組、C組和D組表達(dá)較低，無顯著差異(B) Runx2 mRNA半定量： A組Runx2 mRNA表達(dá)最高，B組Runx2 mRNA表達(dá)降低，C組和D組表達(dá)最低，無顯著差異*A組與B組相比較， aP<0.01； B組與A組、C組和D組相比較，bP<0.01；A組與B組、C組和D組相比較，cP<0.01

3 討 論

糖皮質(zhì)激素是誘導(dǎo)BMSC成脂分化的關(guān)鍵因子[12]。當(dāng)BMSC成脂分化增強(qiáng)，成骨分化抑制[13]。其中，糖皮質(zhì)激素濃度是調(diào)控BMSC的分化的重要因素。隨糖皮質(zhì)激素濃度升高，BMSC成脂分化增強(qiáng)，成骨分化被抑制。近年來,發(fā)現(xiàn)人多藥耐藥基因1編碼的P糖蛋白活性增強(qiáng)能降低糖皮質(zhì)激素的胞內(nèi)蓄積[7-8]。前期研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用維拉帕米抑制P糖蛋白活性后，相同濃度糖皮質(zhì)激素環(huán)境中BMSC成脂分化增強(qiáng)[14]。但增強(qiáng)P糖蛋白活性對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)BMSC成脂分化的干預(yù)尚缺乏研究。

利福平是常用的P糖蛋白活性增強(qiáng)劑[10]。本研究采用Feller N介紹的熒光染料羅丹明123結(jié)合流式細(xì)胞儀的方法對P糖蛋白活性進(jìn)行檢測[11]。羅丹明123是特異性的P糖蛋白底物，可被P糖蛋白逆濃度梯度泵至細(xì)胞外。利用流式細(xì)胞儀檢測胞內(nèi)熒光殘留量能夠準(zhǔn)確反映P糖蛋白活性；胞內(nèi)羅丹明123蓄積越多，P糖蛋白活性越弱[15]。因此，胞內(nèi)羅丹明123熒光強(qiáng)度和P糖蛋白活性成反比。本研究中應(yīng)用5μg/ml利福平對BMSC進(jìn)行預(yù)處理后，顯著降低了BMSC胞內(nèi)羅丹明123熒光染料的蓄積，即上調(diào)了P糖蛋白活性。糖皮質(zhì)激素也是P糖蛋白底物[7-8]。本研究發(fā)現(xiàn)利福平升高BMSC的P糖蛋白活性后，BMSC胞內(nèi)蓄積的地塞米松濃度下降。

高濃度地塞米松誘導(dǎo)BMSC成脂分化[9]。本研究中，10-6mol/L地塞米松誘導(dǎo)BMSC胞內(nèi)PPARγ表達(dá)增加，發(fā)生成脂分化。地塞米松濃度是影響B(tài)MSC成脂分化的關(guān)鍵調(diào)控因素[9]。有研究發(fā)現(xiàn)10-6mol/L地塞米松相比10-10mol/L地塞米松誘導(dǎo)的成脂分化更為顯著[16]。地塞米松濃度下降，PPARγ表達(dá)減少，BMSC成脂分化被抑制[9]。本研究中利福平上調(diào)了BMSC的P糖蛋白活性，胞內(nèi)地塞米松濃度下降，PPARγ表達(dá)減少，成脂分化明顯受到抑制。由于PPARγ是BMSC成脂分化的關(guān)鍵調(diào)控因子，而單純應(yīng)用利福平不改變BMSC胞內(nèi)PPARγ mRNA水平和成脂分化。因此，推測利福平抑制了BMSC的成脂分化是通過上調(diào)P糖蛋白活性減少地塞米松在胞內(nèi)的蓄積，進(jìn)而降低地塞米松與胞內(nèi)糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合，從而抑制PPARγ介導(dǎo)的BMSC成脂分化。

Runx2和AKP是BMSC早期成骨分化的重要標(biāo)志[17-18]。本研究中利福平導(dǎo)致地塞米松誘導(dǎo)條件下BMSC的Runx2和AKP表達(dá)增加，促進(jìn)了BMSC的成骨分化。但單獨(dú)應(yīng)用利福平并不能增加BMSC的Runx2和AKP表達(dá)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)單獨(dú)應(yīng)用10-6mol/L地塞米松在誘導(dǎo)BMSC成脂分化的同時(shí)，BMSC也表達(dá)較弱的成骨標(biāo)志物AKP和Runx2。因此，推測利福平增強(qiáng)BMSC的成骨分化是通過調(diào)控地塞米松對BMSC的誘導(dǎo)作用而呈現(xiàn)。Wang等[13]發(fā)現(xiàn)PPARγ會抑制Runx2表達(dá)，進(jìn)而抑制BMSC的成骨分化。應(yīng)用microRNA下調(diào)PPARγ表達(dá)后，Runx2表達(dá)增加[19]。因此，推測利福平是通過上調(diào)BMSC的P糖蛋白表達(dá)，降低胞內(nèi)地塞米松濃度，從而減少了PPARγ表達(dá)，削弱了PPARγ對Runx2的抑制作用，促進(jìn)BMSC成骨分化。

近年來，糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)BMSC成脂分化被認(rèn)為是激素性股骨頭壞死的重要機(jī)制[4-6]。Cui等[20]利用示蹤技術(shù)發(fā)現(xiàn)植入股骨頭內(nèi)的BMSC，全身應(yīng)用糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)其在股骨頭內(nèi)轉(zhuǎn)化為脂肪細(xì)胞。前期研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用利福平可以減少糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的股骨頭內(nèi)脂肪化，改善股骨頭內(nèi)骨形成，降低股骨頭壞死率。但有學(xué)者認(rèn)為利福平是通過誘導(dǎo)肝臟細(xì)胞色素P450表達(dá)和活性，促進(jìn)激素在肝臟的代謝，削弱激素的藥理作用，降低激素性股骨頭壞死[21]。本研究有力支持了利福平可直接通過上調(diào)股骨頭內(nèi)BMSC的P糖蛋白活性，抑制糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的BMSC成脂分化，促進(jìn)成骨分化。

總之，利福平通過上調(diào)BMSC的P糖蛋白活性，降低地塞米松在BMSC胞內(nèi)蓄積，抑制糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的BMSC成脂分化。這為利福平靶向應(yīng)用于股骨頭預(yù)防激素性股骨頭壞死提供了理論依據(jù)。

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Rifampicin inhibits dexamethasone-induced adipogenesis of bone marrow stem cells and its mechanism

HANNing1,2，LIZeng-chun1，CAIZheng-dong2,3，XUChong1

(1. Dept.of Traumatic Surgery, East Hospital, Tongji University, Shanghai 200120, China; 2. Dept.of Orthopaedics, Tenth People’s Hospital, Tongji University, Shanghai 200072, China; 3. Dept. of Orthopaedics, First People’s Hospital, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200080, China)

Objective To investigate the effect of rifampicin on dexamethasone-induced adipogenesis of bone marrow stem cells (BNSCs) and its mechanism. Methods BMSCs were isolated from Sprague-Dawley rats and randomly divided into 4 groups. Group A was treated with 5μg/ml rifampicin and 10-6mol/L dexamethasone; group B was treated with PBS and 10-6mol/L dexamethasone; group C and group D were treated with 5μg/ml rifampicin and PBS, respectively. P-glycoprotein activity and intracellular dexamethasone accumulation with the pretreatment of 5μg/ml rifampicin were determined by flow cytometry and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)，respectively. After 14 days, BMSCs in all groups were observed under light microscope after Oil red O and alkaline phosphatase staining; triglyceride and alkaline phosphatase (AKP) activity levels were measured, peroxisome proliferator activated receptor γ (PPARγ) mRNA and runt-related transcription factor 2 (Runx2) mRNA level were detected by RT-fqPCR. Results Intracellular rhodamine123 fluorescence and dexamethasone level significantly decreased after 5μg/ml rifampicin treatment. Adipogenesis was showed in group B with increased PPARγ mRNA and triglyceride level. There were not adipogensis in group A, group C and group D. AKP staining and levels in group A were higher than those in group B. Conclusion Rifampicin can enhance P-gp activity and inhibit glucocorticoid-induced adipogenesis in BMSCs.

Rifampicin; P-glycoprotein; glucocorticoid; bone marrow stromal cells; adipogenesis

10.16118/j.1008-0392.2016.03.004

2016-01-21

浦東新區(qū)優(yōu)秀青年醫(yī)學(xué)人才資助基金(PWRq2012-13)

韓 寧(1980—)，男，主治醫(yī)師，博士.E-mail: smztmp@126.com

李增春.E-mail: smztmp@126.com

R 521

A

1008-0392(2016)03-0021-07