何耀明

光動力療法聯(lián)合紫杉醇對結(jié)直腸癌患者淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移增殖的影響

何耀明

江門市中心醫(yī)院胃腸外科，廣東 江門 529030

[摘要]目的探討光動力療法聯(lián)合紫杉醇對結(jié)直腸癌患者淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移增殖的影響。方法連續(xù)選取我院2013年1月至2014年1月收治的結(jié)直腸癌患者40例，隨機(jī)分為對照組和試驗組，每組20例。對照組給予單純的紫杉醇化療，根據(jù)癌癥的分級、分期情況合理選擇化療療程；試驗組聯(lián)合應(yīng)用光動力療法和紫杉醇。對比分析兩組患者的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移率、淋巴細(xì)胞凋亡率、IFN-γ增殖水平以及淋巴細(xì)胞IL-2表達(dá)水平和臨床有效率的差異性，同時對兩組治療前后的E-cadherin病理表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果試驗組患者的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移率高于對照組，淋巴細(xì)胞凋亡率低于對照組，IFN-γ和IL-2的表達(dá)水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。試驗組患者的總有效率高于對照組，生存時間較對照組延長，住院時間較對照組縮短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。治療前，試驗組與對照組的E-cadherin陽性表達(dá)率分別為10.0%、15.0%，治療后分別為25.0%和60.0%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論光動力療法聯(lián)合紫杉醇治療結(jié)直腸癌能較好地抑制患者淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和增殖情況，增強(qiáng)E-cadherin表達(dá)，提高有效率。

[關(guān)鍵詞]光動力療法；紫杉醇；結(jié)直腸癌；淋巴細(xì)胞；轉(zhuǎn)移；增殖

0引言

放化療是目前臨床上用于治療晚期惡性腫瘤的主要手段，化療能很好地殺傷或者抑制結(jié)直腸癌腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移，對預(yù)防術(shù)后并發(fā)癥或者復(fù)發(fā)有很好的效果[1-3]。同時，相關(guān)研究表明，影響結(jié)直腸癌預(yù)后的主要因素是腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，發(fā)生轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者的近10年預(yù)后總生存率增加尚不足2年。在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的機(jī)制中，E-鈣粘附分子(E-cadherin)有抑制腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的功能，其黏附特性的改變也可能導(dǎo)致細(xì)胞骨架重排，從而促進(jìn)腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移[4-5]。光動力療法(Photodynamic thempy,PDT) 基本原理是光動力激光的光化學(xué)原理，通過氧化作用來攻擊結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而使結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞死亡[6-7]。本文為了探討光動力療效聯(lián)合紫杉醇對結(jié)直腸癌患者淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移增殖的影響，選取2013年1月至2014年1月于我院就診的結(jié)直腸癌患者共40例作為研究對象，并取得較好的臨床效果。現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料連續(xù)選取我院2013年1月至2014年1月收治的結(jié)直腸癌患者共40例，排除精神疾病、心腦血管疾病、合并其他嚴(yán)重消化道疾病等患者。所有患者經(jīng)過腸鏡與病理診斷為結(jié)直腸癌。將患者隨機(jī)分為對照組和試驗組，每組20例。對照組：男11例，女9例，年齡56～70歲，平均年齡(66.5±7.3)歲，病程1～12年，平均病程(8.0±2.0)年，結(jié)腸癌9例，直腸癌11例，Dukes分期C期13例、D期7例；試驗組：男10例，女10例，年齡58～71歲，平均年齡(68.0±6.4)歲，病程6個月～10年，平均病程(7.6±2.5)年，結(jié)腸癌12例，直腸癌8例，Dukes分期C期10例、D期10例。兩組患者的性別、年齡、平均病程、癌癥類型、Dukes分期比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。全部病例術(shù)前均未經(jīng)化療、放療、生物治療，無長期服用非甾體抗炎藥、皮質(zhì)激素藥物史。

1.2治療方法對照組患者給予單純紫杉醇化療，根據(jù)疾病分級分期情況，Ⅰ級患者每周化療1次，Ⅱ級每周2次，Ⅲ級每周3次。試驗組患者聯(lián)合應(yīng)用光動力療法和紫杉醇，使用Photoffin光敏劑時無需做過敏試驗，靜脈滴注Photoffin光敏劑時，按照Photoffin光敏劑2 mg/kg濃度對50 g/L葡萄糖注射液100 mL進(jìn)行配置。激光治療機(jī)內(nèi)設(shè)的各種類型癌照射劑量大小應(yīng)根據(jù)患者腔內(nèi)腫瘤長度的不同而定，每次治療照射1～3段，照射時間約12 min，能量密度為200 J/cm。行激光照射治療每段之間應(yīng)該銜接好，而且須超過腫瘤邊界至少0.5 cm，這樣才能使光照范圍充分覆蓋腫瘤區(qū)域。

1.3觀察指標(biāo)淋巴細(xì)胞檢測：在患者接受上述治療后的第3天，采集患者淋巴細(xì)胞作為研究樣本，用PBS液洗滌2次，再加入PBS液制成單細(xì)胞懸濁液，調(diào)整細(xì)胞濃度105～106/mL。取樣品懸液500 μL，在低溫條件下加入試劑FITC，均勻攪拌，再加入PI 5 μL，低溫條件下反應(yīng)0.5 h。應(yīng)用活淋巴細(xì)胞為陰性對照，調(diào)整0坐標(biāo)點(diǎn)，將誤差控制在2%以內(nèi)，上機(jī)檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)移增殖情況。記錄兩組T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移率、淋巴細(xì)胞凋亡率、IFN-γ增殖水平及淋巴細(xì)胞IL-2表達(dá)水平。

療效判定：結(jié)腸癌分級采用世界通用的標(biāo)準(zhǔn)[4]，即完全效應(yīng)(CR)：結(jié)腸癌腫瘤患者檢查時腫瘤應(yīng)完全消失，在對組織進(jìn)行病理活檢應(yīng)為陰性，持續(xù)至少1個月；明顯效應(yīng)(PR)：結(jié)腸癌腫瘤患者檢查時，腫瘤最大徑和其垂直徑或腫瘤高度的乘積至少縮小1/2，且持續(xù)1個月；稍有效應(yīng)(MR)：結(jié)腸癌腫瘤患者檢查時腫瘤縮小不足1/2，并持續(xù)1個月；無效(NR)：結(jié)腸癌腫瘤患者檢查時腫瘤無變化或增大。

E-cadherin表達(dá)檢測：選擇福州邁新公司的鼠抗人E-cadherin單克隆抗體，治療前后采集所有患者結(jié)直腸癌組織，標(biāo)本離體后置于4%福爾馬林中固定后進(jìn)行石蠟包埋備用，采用MaxVision法免疫組織化學(xué)染色，以已知陽性切片作為陽性對照，陰性對照以PBS替代一抗。病理染色后由2位病理醫(yī)師分別雙盲閱片，每張切片按正常染色的百分率進(jìn)行評定：0～50%為陰性(-)，51%～80%為陽性(+)，81%～100%為強(qiáng)陽性(++)，同時觀察E-cadherin蛋白的定位與分布情況。

2結(jié)果

2.1兩組患者淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移和增殖情況比較試驗組患者的T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移率高于對照組，淋巴細(xì)胞凋亡率低于對照組，IFN-γ、IL-2的表達(dá)水平高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2E-cadherin表達(dá)情況E-cadherin主要表達(dá)于正常黏膜上皮的細(xì)胞膜上，多呈強(qiáng)陽性表達(dá)；在結(jié)直腸癌組織中，其表達(dá)明顯下降。經(jīng)過免疫組織化學(xué)染色分析，治療前，試驗組與對照組的E-cadherin陽性表達(dá)率分別為10.0%、15.0%，治療后分別為25.0%、60.0%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1　兩組患者淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移和增殖情況

表2　兩組患者E-cadherin陽性表達(dá)情況(例,%)

2.3兩組患者的療效比較試驗組的總有效率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。試驗組患者的生存時間較對照組延長，住院時間較對照組縮短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3　兩組患者臨床效果比較(例)

3討論

結(jié)直腸癌是胃腸道中常見的惡性腫瘤之一。近年來我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率及死亡率呈明顯上升趨勢。惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是其主要癥狀和致死原因。腫瘤浸潤包括粘附、溶解、移動3個步驟[8]，并且，其進(jìn)展、侵襲與癌細(xì)胞運(yùn)動性增加及肌動蛋白細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變密不可分[9]。

紫杉醇是一種新型化療藥物，廣泛應(yīng)用于結(jié)直腸癌、乳腺癌、卵巢癌及非小細(xì)胞肺癌等疾病的治療中，其對免疫細(xì)胞的影響是重要的研究方向。體外實驗發(fā)現(xiàn)，紫杉醇治療可明顯降低患者T淋巴細(xì)胞及體內(nèi)IFN-γ的表達(dá)量，并且可以明顯降低正常人和腫瘤患者T細(xì)胞的殺傷活性，抑制患者淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、增殖，促進(jìn)其成熟、分化，其活化之后釋放出的大量細(xì)胞因子能促進(jìn)患者體內(nèi)CD8細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的活化成長，增強(qiáng)癌癥患者體內(nèi)CD8 T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的抗腫瘤活性[10]。CD16是NK細(xì)胞的表面標(biāo)志物，是一種淋巴細(xì)胞表面具有低親和力的IgG Fe受體，當(dāng)這種受體導(dǎo)入患者淋巴細(xì)胞的ADCC中產(chǎn)生作用時，可以直接殺死癌細(xì)胞。郭志琴等[11]報道，紫杉醇作為一種淋巴細(xì)胞抑制劑，對癌細(xì)胞患者化療后細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖的控制效果更明顯。該研究表明，紫杉醇作用72 h的淋巴細(xì)胞、CD3、CD4、CD8等的相對含量沒有明顯變化，但NK細(xì)胞非常敏感，其中CD16的表達(dá)率明顯降低。相關(guān)實驗表明，紫杉醇作用淋巴細(xì)胞的微管系統(tǒng)和微管系統(tǒng)聚集成微管束，能降低淋巴細(xì)胞溶解靶細(xì)胞的動力學(xué)和淋巴細(xì)胞的再生能力[12]。

光動力療法的基本原理是光動力激光的光化學(xué)原理，采用特定波長的激光來激活腫瘤組織內(nèi)滯留的光敏劑，使其與腫瘤組織內(nèi)的氧發(fā)生作用，產(chǎn)生單態(tài)氧及一些活潑的自由基。通過氧化作用攻擊結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)而使其死亡。如今光動力療法在治療結(jié)直腸癌方面已取得較好的效果，已逐漸成為治療結(jié)直腸癌的常規(guī)手段之一。腫瘤光動力療法的體內(nèi)外試驗、新型光敏劑的合成及其光動力療法治療腫瘤的作用機(jī)制等方面的研究快速進(jìn)展，使得腫瘤光動力療法取得了較大的進(jìn)步[13-14]。

E-cadherin是鈣依賴粘附素家族中的重要成員之一，廣泛分布于上皮細(xì)胞相連接的細(xì)胞膜上，是Wnt傳導(dǎo)通路上重要的組成部分，可以介導(dǎo)并維持上皮細(xì)胞之間的緊密連接及正常的細(xì)胞形態(tài)[15]。E-cadherin主要表達(dá)于正常黏膜上皮的細(xì)胞膜上，多呈強(qiáng)陽性表達(dá)；在結(jié)直腸癌組織中，其表達(dá)明顯下降。當(dāng)腫瘤細(xì)胞E-cadherin發(fā)生基因突變、轉(zhuǎn)錄抑制時，其功能發(fā)生障礙，致腫瘤細(xì)胞浸潤性生長[16]。本研究中，治療前試驗組與對照組的E-cadherin陽性表達(dá)率分別為10.0%、15.0% (P>0.05)，治療后分別為25.0%、60.0% (P<0.05)，提示E-cadherin可能在腫瘤進(jìn)展、轉(zhuǎn)移的發(fā)生中共同起作用，能有效反映疾病的預(yù)后狀況。

本研究觀察光動力療法和紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用對結(jié)直腸癌患者淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖的影響，結(jié)果顯示，與單用紫杉醇組比較，聯(lián)合應(yīng)用光動力療法和紫杉醇的患者，其T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移率較高，淋巴細(xì)胞凋亡率較低；IFN-γ、IL-2表達(dá)水平較高；總有效率較高；生存時間顯著延長，住院時間縮短。表明聯(lián)合應(yīng)用光動力療法和紫杉醇可以更好地增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的抗腫瘤特性，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的生長，促進(jìn)其凋亡。

綜上所述，光動力化療和紫杉醇聯(lián)合應(yīng)用于結(jié)直腸癌的治療，能抑制淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、增殖，增強(qiáng)E-cadherin表達(dá)，值得在臨床推廣。

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Effect of photodynamic therapy combined with paclitaxel on the metastasis and proliferation of lymphocytes in patients with colorectal cancer

HE Yao-ming

(Department of Gastrointestinal Surgery,Jiangmen Central Hospital,Jiangmen 529030,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect of photodynamic therapy combined with paclitaxel on the metastasis and proliferation of lymphocytes in patients with colorectal cancer.MethodsConsecutive 40 cases diagnosed as colorectal cancer from January 2013 to January 2014 in our hospital were enrolled and divided randomly into control group and experiment group,20 cases in each group.All the patients received standard chemotherapy according to grading and staging of the cancer,and control group was given paclitaxel treatment,while experiment group was given photodynamic combined with paclitaxel.The transferation rate and apoptosis rate of T lymphocyte,proliferation level of IFN-γ,expression level of IL-2 and clinical efficiency of the two groups were compared.The expression of E-cadherin pathology was analyzed before and after treatment.ResultsCompared with control group,the transferation rate of T lymphocyte in experiment group was significantly higher with lower apoptosis rate (P<0.05);the expression levels of IFN-γ and IL-2 in experiment group were higher (P<0.05);the total effective rate in experiment group was higher with longer survival time and shorter in-hospital time (P<0.05).No significant difference was found in the E-cadherin positive expression between experimental group and control group (10.0% vs.15.0%,P>0.05) before treatment,while there was significant difference after treatment (25.0% vs.60.0%,P<0.05).ConclusionPhotodynamic therapy combined with paclitaxel can greatly inhibit the metastasis and proliferation rate of lymphocytes,enhance E-cadherin positive expression,and improve the clinical efficacy in patients with colorectal cancer.

Key words：Photodynamic therapy;Paclitaxel;Colorectal cancer;Lymphocyte;Metastasis;Proliferation

收稿日期：2015-09-07

基金項目：江門市科技計劃項目(2014020)

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201605009