楊應(yīng)松

血紅蛋白電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對地中海貧血患者的診斷價值

楊應(yīng)松

【摘要】目的 探討血紅蛋白電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對地中海貧血患者的診斷價值。方法 選取2012年2月至2014年9月在廣東省江門市婦幼保健院接受婚檢、產(chǎn)檢、基因篩查后疑似地中海貧血的386例患者為研究對象，均進行血紅蛋白電泳檢測，檢查結(jié)果異常者及不能確診者行地中海貧血基因檢測。比較患者的血紅蛋白HbA、HbA2、HbF值及單純血紅蛋白電泳檢測和電泳+基因檢測對地中海貧血的檢出率。結(jié)果 通過血紅蛋白電泳檢測，α-地中海貧血患者HbA、HbA2值明顯低于陰性患者，HbF值明顯高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；β-地中海貧血者HbA值明顯低于陰性患者，HbA2、HbF值明顯高于陰性患者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；電泳+基因檢測對α-地中海貧血的檢出率明顯高于單純血紅蛋白電泳檢測的檢出率，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。總檢出率比較，α-地中海貧血檢出率與β-地中海貧血檢出率差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 血紅蛋白電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測用于診斷地中海貧血準確率高于單純使用血紅蛋白電泳檢測技術(shù)，具有較高的臨床應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】血紅蛋白電泳；地中海貧血基因檢測；地中海貧血；診斷

廣東省江門市婦幼保健院，廣東江門 529000

地中海貧血最早發(fā)現(xiàn)于1925年，是常見的不完全顯性單基因遺傳性血紅蛋白病，多表現(xiàn)為溶血性貧血、代償性紅細胞增多、高鐵血紅蛋白血癥等，其本質(zhì)是血紅蛋白中的一種或幾種珠蛋白鏈缺失或點突變，使血紅蛋白組分改變的溶血性貧血，屬于先天遺傳性疾?。?］。目前，該病尚無根治方法，中重型地中海貧血患者預(yù)后不良，所以通過婚前、產(chǎn)前檢查等方式對地中海貧血進行篩查和診斷，對該病的防治具有非常重要的意義。目前，臨床對于地中海貧血診斷的研究集中于單項檢查之間的對比［2］，聯(lián)合檢查方面的研究較少，本研究就血紅蛋白電泳聯(lián)合地中海貧血基因檢測對地中海貧血的診斷價值進行探討，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2014年9月在我院接受婚檢、產(chǎn)檢、基因篩查后疑似地中海貧血的386例患者為研究對象，其中男231例，女155例；年齡1.5～56歲，平均（36±14）歲；其中疑似α-地中海貧血患者209例（確診82例），疑似β-地中海貧血患者177例（確診39例），確診后非地貧者納入陰性對照組（含缺鐵性貧血或其他貧血或正常者）265例，所有患者均同意參與本研究，并簽署了知情同意書，排除精神疾患或語言障礙不能配合研究、惡性腫瘤的患者。

1.2 檢驗方法 所有受試者均進行血紅蛋白電泳檢驗，對檢查結(jié)果陽性及不能確診的患者行地中海貧血基因檢測。

1.2.1 血紅蛋白電泳 采集受試者空腹血液，四乙酸二氨基乙烷絡(luò)合劑（EDTA）抗凝離心（5000 rpm，R=13.5 cm）5 min，去血漿以10倍體積0.9%氯化鈉注射液洗滌紅細胞3次，取10 μl紅細胞加入130 μl溶血液震蕩混勻10 s，室溫下培育5 min，采用法國西比亞全自動血紅蛋白電泳儀、掃描儀和分析系統(tǒng)進行電泳檢測，打印圖譜。正常參考值：血紅蛋白A （HbA）為97%～98%，血紅蛋白A2（HbA2）為2.0%～3.5%，血紅蛋白F（HbF）為0%～1.0%，且無異常血紅蛋白（HbH、HbBart，s）。

1.2.2 基因檢測 采集受試者外周血3～5 ml并提取DNA，采用多重聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)檢測3種α缺失型α-地中海貧血和17種β-地中海貧血基因突變位點（按照α-地中海貧血和β-地中海貧血基因診斷試劑盒對應(yīng)說明書操作）。

1.3 觀察指標 記錄血紅蛋白電泳檢測HbA、HbA2、HbF值；同時記錄所有受試者血紅蛋白電泳檢測結(jié)果和兩種檢測方式聯(lián)合檢測的結(jié)果，計算比較地中海貧血檢出率。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，三組比較采用F檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 血紅蛋白HbA、HbA2、HbF值比較 通過血紅蛋白電泳檢測，α-地中海貧血患者HbA、HbA2值明顯低于陰性患者，HbF值明顯高于陰性者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；β-地中海貧血者HbA值明顯低于陰性患者，HbA2、HbF值明顯高于陰性者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 血紅蛋白HbA、HbA2、HbF值比較（%，±s）

表1 血紅蛋白HbA、HbA2、HbF值比較（%，±s）

注：①與②比較，t（HbA）=19.593、t（HbA2）=17.876、t （HbF）=14.928，P＜0.05；①與③比較，t（HbA）=30.219、t （HbA2）=21.674、t（HbF）=19.778，P＜0.05

類別 　HbA 　HbA2　HbF α-地中海貧血（82）　95.3±1.6②　1.5±0.4②　1.3±0.4②β-地中海貧血（39）　93.2±2.1③　4.6±1.0③　5.7±4.3③陰性者（265） 　97.4±0.4①　2.6±0.4①　0.9±0.1①

2.2 血紅蛋白電泳與電泳+基因檢測的檢出率比較 電泳+基因檢測對α-地中海貧血的檢出率明顯高于血紅蛋白電泳檢測的檢出率，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；血紅蛋白電泳檢測β-地中海貧血檢出率與電泳+基因檢測檢出率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；總檢出率比較，電泳+基因檢測檢出率高于血紅蛋白電泳檢測，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 血紅蛋白電泳檢測與電泳+基因檢測的檢出率比較［例（%）］

3 討論

地中海貧血是血紅蛋白的珠蛋白肽鏈基因突變、缺失導致某種珠蛋白肽鏈合成障礙的遺傳性慢性溶血性貧血病，易使患者體內(nèi)攜帶和輸送氧氣的血紅蛋白和紅細胞減少。通過珠蛋白肽鏈基因缺陷、缺失程度的差異，可將地中海貧血分為α、β、δα、δβ四種類型，世界范圍內(nèi)比較常見為前兩種。在我國，以南方發(fā)病率較高，α型地中海貧血及β型地中海貧血攜帶率分別為10.3%及2.8%。根據(jù)病情程度可將地中海貧血分為三級，輕度患者無明顯不良反應(yīng)，中度及重度患者可見乏力、肝脾腫大等癥狀。地中海貧血是具有嚴重致死、致殘性的遺傳性血液?。?］，與患者年齡相關(guān)，年齡越大的患者病情加重的危險程度就越高，新生兒重度α地中海貧血通常在出生后2 d內(nèi)死亡，產(chǎn)婦發(fā)生胎兒水腫以及大胎盤等不良事件的概率明顯增加，甚至導致死亡［4］。由于目前尚無地中海貧血的根治性治療方法，所以進行必要的篩查對地中海貧血的診斷、治療及預(yù)后有重要的指導意義。

對于中重型地中海貧血而言，通過患者的臨床表現(xiàn)、血紅蛋白電泳檢測及血流動力學等，可實現(xiàn)準確的診斷，但輕度地中海貧血患者無特異性癥狀，所以往往容易被忽視，此時需進行基因檢測才能避免誤診及漏診的發(fā)生?；驒z測是診斷地中海貧血的金標準，隨著聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)的成熟，我國最為常見的三種缺失型α-地中海貧血可被準確檢出。但是，基因檢測相對復(fù)雜、成本高，在大樣本篩查中推廣難度大，因此還需一定的輔助篩選手段。本研究采取血紅蛋白電泳檢測，不僅能夠?qū)Φ刂泻Ｘ氀M行篩查，還能進行分型［5］。羅儉權(quán)等［6］研究顯示，血紅蛋白電泳檢測對α-地中海貧血確診符合率為73.81%，對β-地中海貧血確診符合率為80.58%，能有效篩查出地中海貧血的攜帶者，為基因檢測和遺傳咨詢提供診斷依據(jù)。楊生宙等［7］報道稱，血紅蛋白電泳檢測操作簡單、快捷，且價格便宜，臨床應(yīng)用價值高。但多項研究［8-10］顯示，血紅蛋白電泳檢測僅可作為地中海貧血的初步篩查手段?；驒z測可同時檢測--SEA、-α3.7、-α4等23種缺失型、αCS、αQS、αWS點突變及β地中海貧血17個突變位點，檢出無臨床癥狀的靜止型α-地中海貧血（αα/-α3.7、αα/-α4.2）、確定具體的基因突變類型，簡便快捷，結(jié)果直觀，多用于婚前、產(chǎn)前檢查和診斷［11-12］。諸多學者［13-14］采用基因檢測對各地區(qū)地中海貧血的基因型及突變類型進行調(diào)查分析，為地中海貧血胎兒產(chǎn)檢、遺傳咨詢和基因檢測提供參考。李莉等［15］研究顯示，基因診斷能準確檢出α-地中海貧血、β-地中海貧血和αβ復(fù)合型地中海貧血，確診地中海貧血缺失或突變；蘇珊珊等［16］報道稱，對孕婦進行地中海貧血基因篩查能有效預(yù)防重型地中海貧血胎兒出生。本研究聯(lián)合上述兩種檢測方式對疑似患者進行檢查，結(jié)果顯示，單純血紅蛋白電泳與電泳+基因檢測對β-地中海貧血的檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義，血紅蛋白電泳檢測α-地中海貧血的檢出率顯著低于電泳+基因檢測，表示血紅蛋白電泳檢測可作為α-地中海貧血患者的初步篩查手段，與基因檢測聯(lián)合檢測可提高地中海貧血的檢出率。

綜上所述，血紅蛋白電泳檢測聯(lián)合地中海貧血基因檢測用于診斷地中海貧血準確率高于單純使用血紅蛋白電泳檢測技術(shù)，具有較高的臨床應(yīng)用價值。

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The diagnostic Value of Hemoglobin Electrophoresis Combined with Thalassemia Gene Detection in Thalassemia

Yang Yingsong

【Abstract】Objective To study the diagnostic value of hemoglobin electrophoresis combined with thalassemia gene detection in thalassemia.Methods Selected in February 2012 to September 2014 after MCH Hospital of Jiangmen City of Guangdong Province accepted antemarital examination， examination，gene screening suspected thalassemia 386 patients as the object of study，hemoglobin electrophoresis detection and examination results abnormal and could not be confirmed， Mediterranean anemia gene detection.Compare the hemoglobin HbA，HbA2，HbF value of the patients and the detection rate of pure hemoglobin electrophoresis and electrophoresis + gene detection in the detection of the Mediterranean anemia.Results HbA and HBA2 values of patients with α-thalassemia diagnosed by hemoglobin electrophoresis were lower than those of negative ones while HbF values was higher than that of the negative ones （P＜0.05）.HbA values of patients with β-thalassemia were lower than thoae of the negative ones while HbA2 and HbF values were higher than those of the negative ones （P＜0.05）.The detection rates of simple hemoglobin electrophoresis inα-thalassemia （23.44%） and the total detection rate （20.47%） were significantly lowerthan those of electrophoresis combined with gene detection （39.23%，31.35%） （P＜0.05）.Conclusion The accuracy of emoglobin electrophoresis combined with gene detection for diagnosis of thalassemia is higher than that of simple hemoglobin electrophoresis.

【Key words】Hemoglobin electrophoresis；Thalassemia gene detection；Thalassemia；Diagnosis

【中圖分類號】R556.6

【文獻標志碼】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.06.073

作者簡介：楊應(yīng)松（1985.7-），本科學歷，檢驗師