門文卉，胡志銘，林連兵，鄧先余

(昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650500)

復(fù)合微生態(tài)制劑在黃羽烏骨仔雞中的應(yīng)用研究*

門文卉，胡志銘，林連兵，鄧先余

(昆明理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650500)

為研究益生菌、中草藥和蠅蛆粉作為飼料添加劑對黃羽烏骨仔雞生長性能、免疫功能、抗氧化水平和盲腸內(nèi)容物pH及定植益生菌數(shù)的影響，選取300只健康1日齡仔雞，隨機分為益生菌劑1組、益生菌劑2組、益生菌劑2 + 中草藥 + 蠅蛆粉組、中草藥 + 蠅蛆粉組和空白組。結(jié)果表明：① 微生態(tài)制劑對平均日采食量無顯著影響(P> 0.05)，但能顯著增加平均日增質(zhì)量和降低料質(zhì)量比(P< 0.05)。② 微生態(tài)制劑能顯著刺激胸腺、法氏囊和脾臟等免疫器官的生長并且使免疫球蛋白IgG的含量和溶菌酶的活性分別提高了46%和69%。③ 微生態(tài)制劑能通過提高血液中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性來顯著增強機體抗氧化水平并且肝臟中以上3種酶活性的提高程度更大。④ 微生態(tài)制劑可顯著降低腸道pH值并且使腸道益生菌的比例增加20.2%。

益生菌；中草藥；蠅蛆粉；仔雞

目前國內(nèi)畜牧業(yè)已具有相當(dāng)大的規(guī)模，抗生素的使用仍是普遍現(xiàn)象，關(guān)于抗生素替代品的研究主要集中在益生菌和中草藥提取物等方面，益生菌的主要功能為競爭排斥、分泌細(xì)菌素殺滅細(xì)菌，調(diào)整腸道粘膜狀態(tài)和pH，增強機體免疫功能和合成分泌營養(yǎng)物質(zhì)[1]。中草藥多為動植物提取物，具有天然和幾乎無毒副作用的特性，作為生物飼料添加劑具有提供營養(yǎng)、抗致病微生物、刺激機體免疫器官以增強免疫應(yīng)答和增強抗應(yīng)激反應(yīng)等功能[2]。蠅蛆粉為昆蟲源高蛋白飼料添加劑，具有營養(yǎng)豐富、增強機體免疫功能和抗菌等作用[3]。目前國內(nèi)關(guān)于益生菌、中草藥和蠅蛆粉三者在仔雞生產(chǎn)中的聯(lián)用報道還較少。本試驗以1日齡的黃羽烏骨雞為試驗對象，旨在研究由乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌、中草藥和蠅蛆粉組成的復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞的生長性能、免疫功能、抗氧化水平和盲腸內(nèi)容物pH值及定植益生菌數(shù)等生物學(xué)指標(biāo)的影響，為綠色、高效的復(fù)合微生態(tài)制劑的研發(fā)提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 微生態(tài)制劑 益生菌劑1：由戊糖片球菌、屎腸球菌和唾液乳桿菌組成，各菌種活菌數(shù)均≥109CFU/mL且比例為1∶1∶1。

益生菌劑2：由戊糖片球菌、屎腸球菌、唾液乳桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母組成，各菌種活菌數(shù)均≥109CFU/mL且比例為1∶1∶1∶0.5∶0.1。

營養(yǎng)粉：成分為中草藥(黃芩、黨參、陳皮和山楂等比組成)和蠅蛆粉，粉碎目數(shù)為80目，中草藥和蠅蛆粉比例為1∶4。

1.1.2 試驗動物 1日齡健康黃羽烏骨仔雞為試驗動物。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組及飼養(yǎng)管理 將1日齡健康黃羽烏骨仔雞300只，隨機分為5組，每組3個重復(fù)，每重復(fù)20只。實驗組為4個組，A組：益生菌劑1；B組：益生菌劑2；C組：益生菌劑2 + 營養(yǎng)粉；D組：營養(yǎng)粉。益生菌劑在試驗期間用量保持添加量為每只1 mL·d-1，使用方法為飲水添加，營養(yǎng)粉的使用為按照日糧的4%添加其中，試驗雞分層籠養(yǎng)，自由采食、飲水。自動控溫，適時通風(fēng)。基礎(chǔ)日糧符合美國國家研究委員會標(biāo)準(zhǔn)(NRC，1994)，疫苗接種按標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行[4]。

1.2.2 測定指標(biāo)及樣品采集 生長性能：試驗期間每天按重復(fù)記錄飼料消耗，第21、42天的早晨空腹稱量，計算各組的平均日采食量、平均日增質(zhì)量和料質(zhì)量比。

免疫器官指數(shù)：免疫器官指數(shù)為免疫器官質(zhì)量和活雞體質(zhì)量之比。試驗結(jié)束時從每重復(fù)中選取10只接近平均體質(zhì)量的健康仔雞，頸部放血處死，摘取胸腺、脾臟和法氏囊，濾紙吸取表面血液，并剝離表面脂肪和結(jié)締組織然后稱量。

抗氧化及免疫水平：收集血液，放置1 h后，3 500 r/min離心10 min，吸取血清置于-20 ℃?zhèn)溆?。取少許肝臟于冰冷的生理鹽水中漂洗以除去血液，濾紙拭干，然后準(zhǔn)確稱取2 g肝臟于已盛有10 mL生理鹽水的小燒杯中，用剪刀剪碎，然后倒入勻漿管中，并用8 mL生理鹽水沖洗燒杯，制備成勻漿液，2 500 r/min離心10 min，取上清于-20 ℃保存。用試劑盒測定血液和肝臟中的谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和溶菌酶(LZM)活性，并測定血液中的免疫球蛋白IgG含量，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

腸道檢測：盲腸內(nèi)容物pH的檢測，用便攜式pH計測定。定植益生菌數(shù)：量取相同長度的盲腸，用剪刀縱向剪開，無菌生理鹽水沖去附在腸內(nèi)壁上的食糜，然后刮取盲腸內(nèi)壁于定量無菌水中，梯度稀釋平板涂布。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用 Microsoft Excel 2003 整理實驗數(shù)據(jù)，采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件中的ANOVA進(jìn)行單因素方差分析，組間的顯著性差異采用Duncan's 法進(jìn)行多重比較。所有數(shù)據(jù)均以Mean ± SD表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞生長性能的影響

平均日采食量、日增質(zhì)量和料質(zhì)量比等生長性能方面的指標(biāo)是飼料利用率、經(jīng)濟(jì)性和生物添加劑效果顯著與否的最直觀的表現(xiàn)。由表1可知，對于平均日采食量，和對照組相比微生態(tài)制劑的添加并沒有顯著的差異(P> 0.05)。對于平均日增質(zhì)量，試驗周期各階段試驗組相較于空白組均有所增加，1～3周齡，B組顯著高于空白組(P< 0.05)，其余各組之間差異不顯著(P> 0.05)，4～6周齡，B、C、D組顯著高于空白組(P< 0.05)，且C組效果最佳，1～6周齡，相較于空白組，只有C組的水平達(dá)到顯著(P< 0.05)。對于料質(zhì)量比，1～3周齡，各組差異不顯著(P> 0.05)，4～6周齡，B、C兩組顯著高于空白組，據(jù)于整個試驗周期1～6周分析，B、C、D各組均顯著高于空白組(P< 0.05)，C組與其余各組之間差異均顯著(P< 0.05)，這說明益生菌劑或營養(yǎng)粉的使用在黃羽烏骨雞的育雛上均有顯著效果。

2.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞免疫器官指數(shù)的影響

免疫器官指數(shù)是從免疫器官質(zhì)量方面反應(yīng)生物制劑在仔雞上的應(yīng)用效果。由表2可知，復(fù)合微生態(tài)制劑的添加使仔雞的各種免疫器官指數(shù)均有增加。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)情況相同，只有C組和空白組有顯著差異(P< 0.05)，除C組之外其余各組之間均無顯著差異(P> 0.05)。分析法氏囊指數(shù)，A、B、C、D四個試驗組均和空白E組有顯著差異(P< 0.05)。

2.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞抗氧化及免疫水平的影響

由表3可知，在使用了復(fù)合微生態(tài)制劑之后，血液和肝臟中的各種酶的酶活以及血液中的免疫球蛋白含量均有增加，部分指標(biāo)的差異達(dá)到極顯著水平。血液酶活分析：GSH-PX活性，B、C、D三個組相較于空白組有顯著差異(P< 0.05)，且C組和空白組之間能達(dá)到極顯著水平(P< 0.01)。CAT和SOD活性情況相似，B、C兩組活性顯著高于空白組(P< 0.05)，A、D兩組和空白組之間差異不顯著(P> 0.05)。溶菌酶活性，4個試驗組的活性均顯著高于空白組(P< 0.05)且能達(dá)到極顯著水平(P< 0.01)，試驗組之間兩兩比較也均有顯著差異(P< 0.05)。IgG含量，A、B、C三組之間差異不顯著，但卻顯著高于空白組(P< 0.05)。肝臟酶活分析：B、C、D三組的GSH-PX活性均顯著高于空白組(P< 0.05)，而對于SOD活性其差異則為極顯著水平(P< 0.01)。對于CAT和溶菌酶活性，各試驗組均極顯著高于空白組(P< 0.01)。

2.4 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞腸道pH和益生菌數(shù)目的影響

由表4可知，A、B、C三組的腸道pH極顯著低于空白組(P< 0.01)，A組腸道pH為各組之最低。分析腸道定植益生菌數(shù)，各試驗組均顯著多于空白組(P< 0.05)，B、C兩組和空白組之間的差異為極顯著(P< 0.01)。其中，C組中的腸道益生菌數(shù)目比對照組高出20.2%，達(dá)到7.85×108CFU/g。

表1 微生態(tài)制劑對仔雞生長性能的影響1)

1)數(shù)字右側(cè)不同小寫字母為差異顯著(P< 0.05),不同大寫字母為差異極顯著(P< 0.01),相同字母或無字母為差異不顯著(P> 0.05)

表2 微生態(tài)制劑對仔雞免疫器官指數(shù)的影響1)

1)數(shù)字右側(cè)不同小寫字母為差異顯著(P< 0.05),不同大寫字母為差異極顯著(P< 0.01),相同字母或無字母為差異不顯著(P> 0.05)

表3 微生態(tài)制劑對仔雞抗氧化及免疫水平的影響1)

1)數(shù)字右側(cè)不同小寫字母為差異顯著(P< 0.05),不同大寫字母為差異極顯著(P< 0.01),相同字母或無字母為差異不顯著(P> 0.05)

表4 微生態(tài)制劑對仔雞腸道pH和益生菌數(shù)目的影響1)

1)數(shù)字右側(cè)不同小寫字母為差異顯著(P< 0.05),不同大寫字母為差異極顯著(P< 0.01),相同字母或無字母為差異不顯著(P> 0.05)；益生菌數(shù)單位為108CFU/g

3 討 論

3.1 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞生長性能的影響

試驗添加的益生菌包括多種乳酸菌、枯草芽孢桿菌和酵母菌，乳酸菌能分泌乳酸對飼料進(jìn)行酸化處理、枯草芽孢桿菌和酵母菌能分泌多種酶類幫助消化進(jìn)而提高飼料轉(zhuǎn)化利用效率，各種益生菌還能夠分泌維生素、有機酸等營養(yǎng)物質(zhì)從而促進(jìn)仔雞的生長。中草藥中含有多種活性物質(zhì)和營養(yǎng)成分比如氨基酸、蛋白質(zhì)和維生素等動物機體所需成分，這和飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的不足形成互補[5]。蠅蛆粉為昆蟲源性飼料添加劑，其營養(yǎng)結(jié)構(gòu)合理、含量豐富，蛋白質(zhì)、甲殼素和脂肪酸是其含有的三大類營養(yǎng)物質(zhì)，蛋白質(zhì)含量可以達(dá)到54%，此外，維生素和微量元素等物質(zhì)含量也較豐富[3]。本試驗中，無論是不同階段還是整個試驗周期，各組之間的平均日采食量均無顯著差異，但是1～3周齡、4～6周齡和1～6周齡階段中平均日增質(zhì)量均有顯著差異，既在幾乎相同的飼料消耗量下，仔雞每天增加的體質(zhì)量卻不同，這說明在使用了復(fù)合微生物添加劑之后，提高了飼料利用率、降低了生產(chǎn)成本。在實驗初期，使用液體菌劑2的B組在日增質(zhì)量上顯著高于其余各組，而試驗后期，空白組的日增質(zhì)量明顯低于使用液體菌劑或營養(yǎng)粉的試驗組，這表明在試驗初期發(fā)揮促生長作用的為各種益生菌，而在試驗后期，益生菌和營養(yǎng)粉均能顯著的增加仔雞的質(zhì)量。對于效益來說，使用了益生菌和營養(yǎng)粉即復(fù)合微生態(tài)制劑的C組相較于各組顯著降低了料質(zhì)量比，和空白組相比料質(zhì)量比降低了11.85%。張日俊等[6]將多種益生菌飼喂仔雞，結(jié)果飼料利用率、增質(zhì)量和成活率均有極顯著的提高。朱寧等[7]在仔雞的基礎(chǔ)日糧中添加不同比例的中草藥，結(jié)果試驗組的平均體質(zhì)量和平均日增質(zhì)量有了不同程度的提高，料肉比有了顯著地降低。Md.Elias等[8]將多種益生菌、窄葉澤瀉和麥麩等一起發(fā)酵之后進(jìn)行仔雞飼喂，結(jié)果為仔雞質(zhì)量和日增質(zhì)量均有顯著提高。

3.2 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞免疫器官和免疫水平的影響

胸腺、脾臟和法氏囊為禽類主要的免疫器官，胸腺負(fù)責(zé)禽類的細(xì)胞免疫，脾臟為外周免疫器官，法氏囊則是體液免疫器官[9]。免疫器官的質(zhì)量能在一定程度上反應(yīng)機體的免疫水平，免疫器官指數(shù)是機體免疫水平大小最為直觀的指標(biāo)。溶菌酶活性和免疫球蛋白IgG含量則是從微觀方面反應(yīng)機體免疫水平。益生菌、中草藥和蠅蛆粉均能不同程度的提高機體免疫水平[1-3]。Akhil Gupta等[10]在魚類上進(jìn)行益生菌飼喂試驗，結(jié)果使用不同益生菌的試驗組其溶菌酶活性均高于空白組。本實驗結(jié)果表明，和空白組相比使用復(fù)合微生態(tài)制劑的C組能夠顯著提高胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，這說明益生菌、中草藥和蠅蛆粉通過共同作用才能夠顯著增加胸腺和脾臟的質(zhì)量。對于法氏囊指數(shù)，各試驗組均顯著高于空白組，這表明益生菌或者營養(yǎng)粉均能在提高法氏囊指數(shù)上發(fā)揮作用。微生態(tài)制劑的使用使得血液和肝臟中的溶菌酶活性均顯著高于空白組，而且達(dá)到極顯著水平，表明微生態(tài)制劑在機體溶菌酶活性的增加上能發(fā)揮重要的作用。使用液體菌劑的試驗組其免疫球蛋白IgG含量顯著高于空白組，這表明益生菌能夠有效刺激機體使其產(chǎn)生大量免疫球蛋白IgG，而中草藥和蠅蛆粉的使用并未有顯著效果。張超范等[11]將多種益生菌分為不同組別進(jìn)行肉仔雞飼喂試驗，結(jié)果實驗組的體液免疫水平均得到提高。

3.3 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞抗氧化水平的影響

過氧化氫酶(CAT)能催化過氧化氫分解成氧和水，保護(hù)細(xì)胞免受過氧化損害，存在于細(xì)胞的過氧化物體內(nèi)。谷胱甘肽過氧化物酶是機體內(nèi)大量存在的一種能特異催化分解過氧化氫的酶，它能夠催化還原型谷胱甘肽(GSH)對過氧化氫的還原反應(yīng)，從而保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整。超氧化物歧化酶(SOD)能夠清除機體內(nèi)的自由基，阻斷因氧自由基對細(xì)胞造成的傷害，并及時修復(fù)受損細(xì)胞[12]。本研究結(jié)果表明，在血液中只有通過益生菌、中草藥和蠅蛆粉的共同作用才能使GSH-PX活性顯著提高，但在肝臟中各試驗組的活性均高于空白組，這表明對于GSH-PX活性微生態(tài)制劑的使用在肝臟中效果比較顯著。對于CAT活性，在血液中只有B、C兩組和空白組差異顯著，而在肝臟中和對照組相比使用了微生態(tài)制劑的各組均能極顯著的提高CAT活性。微生態(tài)制劑的使用在增加SOD活性上的情況幾乎等同于CAT活性的改變。綜合分析，微生態(tài)制劑在增加抗氧化水平上均有顯著效果，且肝臟中抗氧化水平的增加程度大于血液。

3.4 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞腸道酸化和益生菌群的影響

乳酸菌能通過產(chǎn)酸對仔雞腸道進(jìn)行酸化并分泌細(xì)菌素等物質(zhì)殺滅一些有害微生物，且益生菌能通過生物拮抗、競爭排斥減少致病微生物的數(shù)量。中草藥中含有的多糖、皂甙、生物堿、蒽類和有機酸等活性物質(zhì)一方面可以通過增強機體的免疫水平來殺滅致病微生物，另一方面還可以直接作用于病原微生物，干擾破壞其生長繁殖進(jìn)而將其殺滅[13]。蠅蛆粉中含有的甲殼素具有抗菌、抗病毒和促進(jìn)腸道益生菌生長的作用，抗菌肽也具有抑制致病菌和病毒的效果[3]。三者共同作用調(diào)整腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)，使益生菌占有數(shù)量上的絕對優(yōu)勢。試驗結(jié)果表明，使用益生菌劑的A、B、C三組效果顯著，能明顯的降低仔雞腸道的pH并且達(dá)到極顯著水平。使用微生態(tài)制劑的各試驗組中益生菌數(shù)均顯著多于空白組，表明微生態(tài)制劑在調(diào)整盲腸定植益生菌數(shù)方面具有很好的效果。徐剛等[14]將益生素、酶制劑和酸化劑等作為飼料添加在仔雞上進(jìn)行應(yīng)用研究，結(jié)果益生素組盲腸中的乳酸桿菌顯著多于其余各組。張日俊等[6]的試驗表明益生菌能不同程度的降低仔雞直腸、十二指腸和回腸等不同腸段的pH。Hoang等[15]將乳酸菌和枯草芽孢桿菌等益生菌分組進(jìn)行飼喂仔豬，結(jié)果顯示益生菌能顯著增加胃、回腸、結(jié)腸和直腸中的乳酸菌和減少大腸桿菌的數(shù)量。

3.5 復(fù)合微生態(tài)制劑對仔雞養(yǎng)殖的整體效用

益生菌因其具有的營養(yǎng)、促進(jìn)消化、增強免疫的益生效果而被廣泛應(yīng)用到畜牧和水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，并取得了較好的應(yīng)用效果。中草藥和蠅蛆粉在養(yǎng)殖方面的應(yīng)用并沒有益生菌應(yīng)用的那么廣泛。中草藥具有多種生物學(xué)方面的功能，比如促進(jìn)消化和吸收，提高畜禽生長及生產(chǎn)性能、增加免疫球蛋白含量，刺激畜禽免疫系統(tǒng)提高其免疫力、抗病毒抗菌和抑菌等。中草藥在畜禽養(yǎng)殖和水產(chǎn)等方面也得到了部分應(yīng)用，并取得了一定的效果。蠅蛆粉含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)其中蛋白質(zhì)含量最為豐富，脂肪酸和殼聚糖含量也較為可觀，蠅蛆粉含有的抗菌肽和殼聚糖等物質(zhì)能夠提高機體的免疫活性，除此之外蠅蛆粉中的酚氧化酶等活性物質(zhì)還能夠提高動物機體的抗氧化酶活性，從而提高動物機體的抗應(yīng)激能力。

4 結(jié) 論

1)微生態(tài)制劑能顯著提高仔雞育雛階段的平均日增質(zhì)量、降低料質(zhì)量比，作用發(fā)生在第4-6周。

2)微生態(tài)制劑能通過增加免疫器官質(zhì)量和免疫酶活來顯著提高機體免疫水平，且使用復(fù)合微生態(tài)制劑的效果最為明顯。

3)微生態(tài)制劑能增強仔雞體內(nèi)有關(guān)抗氧化方面的酶的活性。

4)微生態(tài)制劑能改善仔雞盲腸PH值和其內(nèi)容物益生菌數(shù)。

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Application of compound microecological preparation in yellow-feathers black-bones chickens

MENWenhui,HUZhiming,LINLianbing,DENGXianyu

(College of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology,Kunming 650500, China)

This experiment was conducted on study the effects of compound microecological preparation (CMP) on growth performance, immune function, antioxidation level and intestinal microflora of yellow-feathers black-bones chickens. Three hundred healthy 1-day-old chickens were randomly assigned to 5 dietary treatments (probiotics 1, probiotics 2, probiotics 2 + Chinese herbal medicine + maggot powder, Chinese herbal medicine + maggot powder and control group). The results were shown as follows： ① CMP increased ADG and F/G significantly, but had no significant effects on ADFI. ② Compared with the control group, CMP stimulated the development of organs like thymus, spleen and bursa of fabricius significantly and increased the content of IgG by 46%, the activity of LZM by 69%. ③ CMP enhanced the levels of antioxidation by increasing the activity of GSH-PX, CAT and SOD, the effect is more pronounced in the liver. ④ CMP reduced the intestinal pH distinctly and improved the probiotics proportion of intestinal microflora by 20.2%.

Probiotics; Chinese herbal medicine; maggot powder; chickens

10.13471/j.cnki.acta.snus.2016.03.024

2015-06-03

國家自然科學(xué)基金資助項目(20110024)；云南省科技創(chuàng)新強省計劃資助項目(2014AB015)

門文卉(1990年生)，女；研究方向：中草藥及微生物在綠色循環(huán)農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用；通訊作者：鄧先余；E-mail:dengxy1008@126.com

S831.5

A

0529-6579(2016)03-0139-06