滕士階，周　彥△，徐承來(lái)，劉小林，賈　嶸，夏正萍，王　琨

(連云港市第二人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.呼吸內(nèi)科，江蘇連云港 222023)

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體液細(xì)胞計(jì)數(shù)自動(dòng)化檢測(cè)影響因素的研究

滕士階1，周彥1△，徐承來(lái)1，劉小林1，賈嶸2，夏正萍1，王琨1

(連云港市第二人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.呼吸內(nèi)科，江蘇連云港 222023)

摘要:目的研究體液標(biāo)本采集后不同的因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。方法比較同一體液標(biāo)本采集后是否使用抗凝劑、抗凝劑種類(lèi)的選擇、樣本采集后的保存溫度、放置不同時(shí)間后結(jié)果的穩(wěn)定性，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，得出不同因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。結(jié)果腦脊液標(biāo)本是否選用抗凝劑對(duì)結(jié)果無(wú)明顯不同；胸腹腔積液采用EDTA-K2抗凝，所有的檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果都比較穩(wěn)定，而未使用抗凝劑和使用肝素鋰抗凝的標(biāo)本保存2 h后有核細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果降低，特別是單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)值明顯降低；體液標(biāo)本分別在室溫、4 ℃中保存1 h后，數(shù)據(jù)開(kāi)始有變動(dòng)，單個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)值有減少的趨勢(shì)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)不論在室溫還是4 ℃保存結(jié)果都很穩(wěn)定。結(jié)論排除上述影響因素的干擾，體液常規(guī)檢查自動(dòng)化可為臨床提供快速、可靠的數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞:診斷儀器和設(shè)備；體液常規(guī)檢查；抗凝劑；保存溫度；保存時(shí)間

胸腹腔積液、腦脊液等體液標(biāo)本在進(jìn)行常規(guī)檢查時(shí)存在速度慢、重復(fù)性差、缺乏生物安全保護(hù)等缺點(diǎn)，之前有過(guò)關(guān)于用尿沉渣分析儀和血細(xì)胞分析儀進(jìn)行體液細(xì)胞計(jì)數(shù)的報(bào)道[1-2]，現(xiàn)階段出現(xiàn)了具有專(zhuān)門(mén)針對(duì)體液細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類(lèi)功能的血細(xì)胞分析儀，實(shí)現(xiàn)了體液細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類(lèi)的自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化。本文將進(jìn)一步了解體液樣本采集有無(wú)使用抗凝劑、抗凝劑種類(lèi)的選擇、樣本采集后的保存溫度、放置不同時(shí)間結(jié)果的穩(wěn)定性等方面因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，從而將各影響因素降到最低，為臨床診療工作提供可靠數(shù)據(jù)[3]。

1材料與方法

1.1儀器Sysmex XT-4000i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(以下簡(jiǎn)稱(chēng)XT-4000i，日本希森美康株式會(huì)社)；真空采血管(成都普什醫(yī)藥塑料包裝有限公司)；三洋冰箱(日本原裝)。

1.2試劑XT-4000i所用試劑均由日本希森美康株式會(huì)社提供。稀釋液(EPK)批號(hào)為G0530，嗜堿細(xì)胞溶血?jiǎng)?FB)批號(hào)為R0025，白細(xì)胞分類(lèi)溶血?jiǎng)?FFD)批號(hào)為R0034，血紅蛋白溶血?jiǎng)?SLS)批號(hào)為A0036,染色液(FFS)批號(hào)為A0008，均為原裝配套試劑。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集由臨床醫(yī)師采集體液標(biāo)本，分別注入未抗凝、EDTA-K2抗凝、肝素鋰抗凝的真空管至標(biāo)定刻度，立即送檢。

1.3.2標(biāo)本檢測(cè)體液標(biāo)本采集時(shí)分為未抗凝、EDTA-K2抗凝、肝素鋰抗凝3管。標(biāo)本采集后立即上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)，記錄細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類(lèi)結(jié)果，通過(guò)將3管結(jié)果的比較來(lái)發(fā)現(xiàn)標(biāo)本有無(wú)使用抗凝劑、抗凝劑種類(lèi)的選擇對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響；再將每管標(biāo)本分成2份，1份于室溫保存，1份4 ℃保存，分別在1、2、3、4 h上機(jī)檢測(cè)，記錄結(jié)果，觀察同一標(biāo)本在不同的保存溫度、放置不同的時(shí)間后結(jié)果的穩(wěn)定性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理因細(xì)胞數(shù)在正常范圍內(nèi)標(biāo)本對(duì)本研究無(wú)意義，故選擇采用直線(xiàn)相關(guān)和回歸分析。

2結(jié)果

2.1抗凝劑的選擇對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響選取的26份腦脊液標(biāo)本分為未使用抗凝劑、使用EDTA-K2抗凝、使用肝素鋰抗凝3管，采集后立即上機(jī)檢測(cè)，將測(cè)定的有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類(lèi)[單核細(xì)胞(MN)絕對(duì)值、MN百分比]及紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行比較，未發(fā)現(xiàn)結(jié)果有明顯不同，見(jiàn)表1；選取的50份胸腹腔積液標(biāo)本經(jīng)EDTA-K2抗凝保存后，所有的檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果都比較穩(wěn)定，而未使用抗凝劑和使用肝素鋰抗凝的標(biāo)本保存2 h后有核細(xì)胞計(jì)數(shù)[多核白細(xì)胞(PMN)絕對(duì)值、PMN百分比]結(jié)果降低，特別是多個(gè)核細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果明顯降低，見(jiàn)表2。

2.2不同保存溫度、不同時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響無(wú)論在室溫或4 ℃中保存1 h后，體液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞數(shù)及百分比有減少趨勢(shì)；相對(duì)的，多個(gè)核細(xì)胞數(shù)及百分比有增高趨勢(shì)。體液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)不論在室溫還是4 ℃保存結(jié)果都很穩(wěn)定,見(jiàn)表3。

表2　抗凝劑的選擇對(duì)胸腹腔積液檢測(cè)結(jié)果的影響(n=50)

表3　不同保存溫度、不同時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響

3討論

腦脊液是存在于腦室及蛛網(wǎng)膜下腔中的無(wú)色透明液體，主要功能是保護(hù)腦和脊髓免受外力震蕩損傷、調(diào)節(jié)顱內(nèi)壓、運(yùn)送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并運(yùn)出代謝產(chǎn)物等；漿膜腔積液是胸腔積液、腹腔積液、心包腔積液和關(guān)節(jié)腔積液的總稱(chēng)，一般情況下，漿膜腔內(nèi)僅含有少量的液體起潤(rùn)滑作用，病理情況下，漿膜腔內(nèi)有大量的液體潴留而形成漿膜腔積液。根據(jù)產(chǎn)生的原因及性質(zhì)不同，將漿膜腔積液分為漏出液和滲出液。

體液的細(xì)胞計(jì)數(shù)及有核細(xì)胞分類(lèi)對(duì)于相關(guān)疾病的診斷和治療有著十分重要的意義。腦脊液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)增多常見(jiàn)于穿刺損傷或出血性病變；有核細(xì)胞計(jì)數(shù)增多一般見(jiàn)于各種類(lèi)型的腦膜炎；腦脊液中發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞對(duì)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤有確診價(jià)值，其陽(yáng)性率為15%～40%，轉(zhuǎn)移性腫瘤的陽(yáng)性率高于原發(fā)性腫瘤；漿膜腔積液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于鑒別漏出液和滲出液意義不大，但惡性腫瘤引起的積液中血性積液占50%～85%，如能排除外傷因素，漿膜腔積液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)增多最常見(jiàn)的原因是惡性腫瘤；有核細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于鑒別漏出液和滲出液有一定參考價(jià)值，漏出液中有核細(xì)胞數(shù)量常在100×106/L以下，滲出液中有核細(xì)胞數(shù)量常在500×106/L以上。積液中嗜酸性粒細(xì)胞增多是指嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)超過(guò)白細(xì)胞總數(shù)10%以上。引起胸腔積液嗜酸性粒細(xì)胞增多的最常見(jiàn)原因是血胸和氣胸，以及寄生蟲(chóng)感染、過(guò)敏綜合征等，引起腹腔積液嗜酸性粒細(xì)胞增多最常見(jiàn)的原因有慢性腹膜透析、充血性心力衰竭、血管炎、淋巴瘤等。間皮細(xì)胞在人工有核細(xì)胞分類(lèi)時(shí)通常歸入“單個(gè)核細(xì)胞”中，主要出現(xiàn)在漏出液中，增多常提示漿膜受刺激或漿膜損傷。

對(duì)于胸腹腔積液、腦脊液等體液標(biāo)本來(lái)說(shuō)，一直以來(lái)都是沿用人工方法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類(lèi)，檢測(cè)結(jié)果易受主觀因素的影響，結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性是不容易保證的，而且存在速度慢、重復(fù)性差、操作人員缺乏生物安全保護(hù)等缺點(diǎn)。多功能血液體液分析一體機(jī)實(shí)現(xiàn)了體液細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類(lèi)的自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化，但是儀器必須在使用前，對(duì)由儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品共同組成的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行充分和正確的應(yīng)用評(píng)價(jià)[4-5]。對(duì)于XT-4000i所報(bào)告的“高熒光強(qiáng)度細(xì)胞”(HF-BF,即可疑幼稚細(xì)胞)不可輕易報(bào)告，應(yīng)人工在顯微鏡下進(jìn)行確認(rèn)[6]。本文通過(guò)人為地設(shè)置一些影響因素來(lái)對(duì)XT-4000i在體液自動(dòng)化檢測(cè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，得出“體液標(biāo)本采集后必須用EDTA-K2抗凝(腦脊液標(biāo)本可不使用抗凝劑)并立即進(jìn)行檢驗(yàn)”的結(jié)論。將可能影響分析前質(zhì)量保證的因素(如體液樣本采集有無(wú)使用抗凝劑、抗凝劑種類(lèi)的選擇、樣本采集后的保存溫度、不同時(shí)間結(jié)果的穩(wěn)定性等)降到最低[7]，XT-4000i可以準(zhǔn)確、快速地進(jìn)行體液細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)，為臨床診療工作提供快速、真實(shí)、可靠的數(shù)據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]章文.UF-100尿沉渣分析儀在小兒腦脊液及漿膜腔積液檢查中的應(yīng)用[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè),2004，25(3)：281.

[2]胡曉衛(wèi)，白雯.自動(dòng)化分析儀在胸腹水細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)中的應(yīng)用[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2009,20(7)：928-929.

[3]陳德東，陳燕，陳忠明.影響血液、體液常見(jiàn)臨床標(biāo)本分析前質(zhì)量的因素及控制措施[J].福建醫(yī)藥雜志,2006,28(4)：99-101.

[4]魏昊，叢玉隆.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理與認(rèn)可指南[M].北京：中國(guó)計(jì)量出版社，2004：59-63.

[5]徐承來(lái)，張麗.CD-3500型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀性能評(píng)價(jià)[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,36(11)：1257-1259.

[6]中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)全國(guó)血液學(xué)復(fù)檢專(zhuān)家小組，中國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志編輯委員會(huì).全國(guó)血液學(xué)復(fù)檢專(zhuān)家小組工作會(huì)議紀(jì)要暨血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)釋疑[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2008，31(4)：380-382.

[7]榮愛(ài)紅，余文波.影響臨床檢驗(yàn)結(jié)果的常見(jiàn)因素及控制方法[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2005,9(3)：469.

(收稿日期：2016-01-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.064

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)09-1290-03

△通訊作者,E-mail：xclzlxch@163.com。

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