鞠健勝,顧亞萍,霍小兵

(江蘇省泰興市中醫(yī)院,江蘇泰興 225400)

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·臨床研究·

乙肝病毒外膜大蛋白檢測的臨床應(yīng)用

鞠健勝,顧亞萍,霍小兵

(江蘇省泰興市中醫(yī)院,江蘇泰興 225400)

摘要:目的通過對乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)和HBV-DNA 以及乙肝血清免疫標(biāo)志物的檢測，研究HBV-LP在判斷HBV感染時的臨床意義。方法對138份乙肝患者血清HBV-DNA 采用熒光定量PCR法進行檢測，同時采用酶聯(lián)免疫吸附法對以上標(biāo)本進行HBV-LP和HBV血清免疫標(biāo)志物(HBV-M)檢測。結(jié)果HBV-LP與HBV-DNA 的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，不同HBV-M模式的HBV-LP與HBV-DNA的檢出結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論HBV-LP可作為乙肝患者病毒復(fù)制的指標(biāo)，具有與HBV-DNA類似的應(yīng)用價值，較E抗原具有更高的靈敏度。

關(guān)鍵詞:乙肝病毒外膜大蛋白；乙肝血清免疫標(biāo)志物；臨床應(yīng)用

乙型病毒性肝炎是我國常見的消化道傳染病，中華人民共和國傳染病防治法將其列為二類傳染病。其有較高的傳染性，與多種疾病密切相關(guān)，嚴重影響著人類的健康和壽命。長期以來，臨床上以檢測乙肝病毒血清免疫標(biāo)志物來判斷乙肝患者病毒復(fù)制的狀況。但隨著抗病毒藥物的大量使用，乙肝病毒發(fā)生變異的情況經(jīng)常出現(xiàn)。乙肝血清免疫標(biāo)志物檢測已不能真實反映患者體內(nèi)病毒的復(fù)制情況，是否具有傳染性更不能以此為依據(jù)。而熒光定量PCR法檢測HBV-DNA是測定患者病毒復(fù)制狀況的最精確的指標(biāo)，對判斷乙肝患者是否具有傳染性有直接指導(dǎo)意義，抗病毒治療的臨床療效觀察亦以此為依據(jù)。核酸檢測的資質(zhì)和設(shè)備許多基層醫(yī)院尚不具備，限制著HBV-DNA檢測的廣泛開展。乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP) 是HBV的包膜蛋白,包括PreS1 蛋白與PreS2 蛋白以及表面抗原。乙肝病毒的感染、復(fù)制及預(yù)后均與HBV-LP的前S 蛋白密切相關(guān)[1]。本文檢測了138例乙肝患者HBV-LP和HBV-DNA水平以及血清免疫標(biāo)志物，探討三者的相互關(guān)系，以發(fā)現(xiàn)HBV-LP與乙肝病毒復(fù)制的關(guān)系和臨床意義。

1材料與方法

1.1材料本院門診138例乙型病毒性肝炎患者，時間為2015年1～7月。其中女63 例，男75例，年齡16～57歲。均符合中華醫(yī)學(xué)會肝病分會，感染病學(xué)分會共同修訂的 “慢性乙型肝炎防治指南”中的病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。采集所有患者空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清并置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2方法乙肝血清標(biāo)志物檢測試劑盒由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供，方法采用酶聯(lián)免疫吸附法。HBV-DNA定量檢測試劑盒由浙江伊利康生物技術(shù)有限公司提供，方法采用實時熒光定量PCR法，檢測下限為500 IU/mL。HBV-LP檢測試劑盒由北京熱景生物技術(shù)有限公司提供，方法采用酶聯(lián)免疫吸附法。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HBV-LP與HBV-DNA陽性率的比較138例乙肝患者血清HBV-LP的陽性率為73.9%(102/138)，HBV-DNA的陽性率為68.8%(95/138)，兩者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.96，P>0.05)。兩者檢出一致率為70.3%。

2.2不同血清標(biāo)志物模式組HBV-DNA與HBV-LP陽性率的比較138例乙肝患者血清標(biāo)志物模式分為3組：第1組(俗稱大三陽組)，表面抗原陽性，E抗原陽性，E抗體陰性，核心抗體陽性或陰性組；第2組，表面抗原陽性，E抗原陰性，E抗體陰性，核心抗體陽性組；第3組(俗稱小三陽組)，表面抗原陽性，E抗原陰性，E抗體陽性，核心抗體陽性組。第1組，HBV-DNA陽性率為89.2%(58/65)，HBV-LP陽性率為92.3%(60/65)。第2組，HBV-DNA陽性率為70.0%(21/30)，HBV-LP陽性率為76.7%(23/30)。第3組， HBV-DNA陽性率為34.1%(16/47)，HBV-LP陽性率為40.4%(19/47)。

表1　不同血清標(biāo)志物模式組HBV-LP與HBV-DNA

*：P<0.05，與第1組比較。

3討論

乙肝病毒血清標(biāo)志物檢測作為經(jīng)典的診斷乙型肝炎指標(biāo)，是人體對乙肝病毒免疫狀態(tài)的直接反映。臨床通過乙肝病毒E抗原的轉(zhuǎn)換判斷體內(nèi)乙肝病毒的復(fù)制情況，觀察患者是否具有傳染性。但隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)乙肝病毒血清標(biāo)志物檢測有許多臨床問題無法解決[3]。而熒光定量PCR法檢測HBV-DNA水平是衡量患者體內(nèi)病毒復(fù)制狀況的最精確的指標(biāo)，對判斷患者是否具有傳染性有直接指導(dǎo)意義，為臨床抗病毒治療療效評估的最重要指標(biāo)[4]。但由于核酸檢測的資質(zhì)和設(shè)備許多基層醫(yī)院尚不具備，極大限制著HBV-DNA檢測的廣泛開展。

HBV-LP是乙肝病毒的包膜蛋白,空間上具有2種不同跨膜結(jié)構(gòu)，其外側(cè)能夠與易感細胞受體結(jié)合，而內(nèi)側(cè)能夠與HBV核殼體膜結(jié)合。包括表面抗原和前S蛋白(PreS1 蛋白和PreS2 蛋白)，是HBV Dane氏顆粒和亞病毒顆粒的主要包膜成分[5]。該蛋白在病毒組裝時，是基質(zhì)類似蛋白；在病毒進入時作為受體蛋白起作用；同時還行使調(diào)節(jié)功能。HBV-LP的前S區(qū)具有獨特的立體構(gòu)象拓撲結(jié)構(gòu)，在組裝病毒外殼時，分泌出組裝完整的病毒外殼。HBV-LP還具有反式激活作用，能夠激活多種啟動子，具有轉(zhuǎn)錄激活功能。HBV-LP與肝細胞的毒性，病毒的復(fù)制，反式激活病毒，上調(diào)cccDNA拷貝數(shù)，致癌性等都有著密切的聯(lián)系[6]。

本研究顯示，138例乙肝患者HBV-LP和HBV-DNA陽性率無顯著性差異。檢出一致率為70.3%。在138例乙肝患者中，65例E抗原陽性者HBV-LP和HBV-DNA陽性率均較高，但E抗原陰性者中亦有50%左右的患者HBV-LP和HBV-DNA呈陽性。這表明HBV-LP在判斷乙肝患者體內(nèi)病毒復(fù)制水平，是否具有傳染性等方面優(yōu)于E抗原，與乙肝病毒指數(shù)具有較相似的臨床價值。HBV-LP陽性率各組均高于HBV-DNA陽性率，原因可能是由于HBV-DNA的檢測限為500 IU/mL，一些低濃度的患者被誤判為陰性[7]?？共《舅幬锊⒉荒芤种埔研纬傻牟《颈磉_蛋白，只能抑制HBV-DNA的復(fù)制。故HBV-LP轉(zhuǎn)陰時間較HBV-DNA要晚一些[8]。

綜上所述，HBV-LP可作為判斷乙肝患者是否具有傳染性，監(jiān)測病毒復(fù)制的指標(biāo)，具有與HBV-DNA類似的應(yīng)用價值，較E抗原具有更高的靈敏度。 酶聯(lián)免疫吸附法檢測簡便，快速，無需特殊的儀器和資質(zhì)，可以在基層醫(yī)院推廣應(yīng)用。

參考文獻

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(收稿日期：2015-11-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.059

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1281-02