夏婷婷+徐洪雨

【摘要】 目的 通過檢測大鼠血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的濃度， 觀察沙利度胺治療由2， 4， 6-三硝基苯磺酸（TNBS）誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎（UC）的療效。方法 21只TNBS結(jié)腸炎動物模型， 隨機分為模型組、柳氮磺吡啶組及沙利度胺組， 每組7只。模型組不給予干預(yù)、沙利度胺組給予沙利度胺200 mg/（kg·d）、柳氮磺吡啶組給予柳氮磺吡啶100 mg/（kg·d）， 測定大鼠血清中TNF-a的濃度， 探討沙利度胺對UC的療效。結(jié)果 沙利度胺組大鼠腹瀉次數(shù)減少， 部分有隱血陽性， 一直未出現(xiàn)肉眼血便。沙利度胺組、柳氮磺吡啶組、模型組大鼠TNF-a的濃度分別為（19.51±8.06）、（40.88±14.24）、（115.32±9.60）pg/ml， 沙利度胺組降低血清TNF-α濃度的幅度高于柳氮磺吡啶組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論 沙利度胺治療UC有效， 能顯著減輕結(jié)腸炎癥， 降低TNF-α濃度強于柳氮磺吡啶。

【關(guān)鍵詞】 沙利度胺；柳氮磺吡啶；2， 4， 6-三硝基苯磺酸；潰瘍性結(jié)腸炎

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.14.211

Experimental research of curative effect by thalidomide for ulcerative colitis XIA Ting-ting， XU Hong-yu. Department of Gastroenterology， Hulun Buir City Peoples Hospital， Hulun Buir 021000， China

【Abstract】 Objective To observe curative effect by thalidomide for 2，4，6-trinitro-benzene-sulfonic acid （TNBS）-induced ulcerative colitis （UC） by detecting serum tumor necrosis factor-α （TNF-α） concentration in rats. Methods TNBS colitis animal model was made， and 21 rats were randomly divided into model group， sulfasalazine group and thalidomide group， with 7 rats in each group. No intervention was taken in model group. Thalidomide group received thalidomide by 200 mg/（kg·d）， and sulfasalazine group received sulfasalazine by 100 mg/（kg·d）. Detection was made on serum TNF-α concentration to investigate curative effect by thalidomide for UC. Results Thalidomide group had reduced diarrhea times， and some rats had positive occult blood， without any visible bloody stools. TNF-α concentrations in thalidomide group， sulfasalazine group and model group were respectively （19.51±8.06）， （40.88±14.24）， （115.32±9.60） pg/ml. Thalidomide group had higher reducing degree of serum TNF-α concentration than sulfasalazine group， and the difference had statistical significance （P<0.01）. Conclusion Thalidomide is effective in treating UC， and it can remarkably relieve colitis. It shows better effect in reducing TNF-α concentration than sulfasalazine.

【Key words】 Thalidomide； Sulfasalazine； 2，4，6-trinitro-benzene-sulfonic acid； Ulcerative colitis

UC是一種病因不明的直腸和結(jié)腸慢性非特異性炎癥性疾病。其病因和發(fā)病機制尚不清楚， 目前大多學(xué)者認為免疫異常是其發(fā)病的主要原因， 受到國內(nèi)外學(xué)者們的重視， 已經(jīng)成為臨床研究的重點之一， 隨著對細胞因子研究的進展， 人們發(fā)現(xiàn)細胞因子TNF-α與UC的發(fā)病密切相關(guān)。沙利度胺作為一種免疫調(diào)節(jié)劑， 目前認為是腫瘤壞死因子TNF-α的特異性調(diào)節(jié)藥物， 所以沙利度胺可通過抑制這種因子的作用而治療UC。本研究通過研究治療前后UC大鼠的血清中TNF-α的表達情況， 進而探討沙利度胺治療UC的療效， 及腫瘤壞死因子在發(fā)病機制中的作用及臨床意義， 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料

1. 1. 1 實驗動物清潔及健康成年雄Wistar大鼠， 平均體質(zhì)量（250±20）g， 由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供及飼養(yǎng)。

1. 1. 2 實驗試劑TNBS購自美國Sigma 公司；沙利度胺購自常州制藥廠有限公司；柳氮磺吡啶購自上海信誼嘉華藥業(yè)有限公司；大鼠TNF-αELISA 試劑盒購自欣博盛生物科技有限公司。

1. 1. 3 實驗儀器保溫箱（上海儀器總廠）；濕盒及通風柜， 光學(xué)顯微鏡， 低溫冰箱：臺式離心機， 450-酶標儀。

1. 2 實驗方法

1. 2. 1 造模及分組 清潔及健康成年雄性Wistar大鼠21只， 隨機分為模型組、柳氮磺吡啶組及沙利度胺組， 每組7只。模型組不給予干預(yù)、沙利度胺組給予沙利度胺200 mg/（kg·d）、柳氮磺吡啶組給予柳氮磺吡啶100 mg/（kg·d）。建立TNBS結(jié)腸炎動物模型[1]：三組大鼠實驗前禁食（不禁水） 24 h， 實驗時腹腔注射10%的水合氯醛（0.3 ml/100 g體質(zhì)量） 使大鼠麻醉， 而后將一直徑2.0 mm、長約12 cm 的硅膠管用石蠟油潤滑， 由肛門插入大鼠體內(nèi)約8 cm， 緩慢注入含100 mg/kg TNBS 的0.25 ml無水乙醇溶液， 提起大鼠尾部， 倒置10 min， 使造模劑充分滲入大鼠腸腔內(nèi)。造模后使動物保持平躺， 自然清醒， 自由飲食。

1. 2. 2 檢測方法 用ELISA法記錄三組大鼠血清中TNF-α含量進行比較。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 大鼠一般狀況 造模后第1天即出現(xiàn)肉眼血便， 模型組一直有血便及腹瀉， 食欲不振、 毛色粗糙、 體質(zhì)量開始下降。沙利度胺組大鼠腹瀉次數(shù)減少， 部分有隱血陽性， 一直未出現(xiàn)肉眼血便， 食欲恢復(fù)、 毛色光滑、 體質(zhì)量逐漸增加。實驗后， 沙利度胺組與柳氮磺吡啶組大鼠體質(zhì)量優(yōu)于實驗前（P<0.01）；柳氮磺吡啶組與沙利度胺組大鼠體質(zhì)量比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 三組大鼠實驗前后體質(zhì)量比較（ x-±s， g）

組別 例數(shù) 實驗前 實驗后

模型組 7 249.8±0.5 232.8±0.4

沙利度胺組 7 222.9±0.3 253.7±0.6a

柳氮磺吡啶組 7 229.7±0.4 249.9±0.4ab

注：與實驗前比較， aP<0.01；與沙利度胺組比較， bP>0.05

2. 2 組織病理改變 模型組鏡下可見腺管排列紊亂或消失， 黏膜及黏膜下層血管高度擴張充血， 大量炎細胞浸潤， 浸潤黏膜下或固有層， 部分浸潤全層， 以中性粒細胞、淋巴細胞為主。沙利度胺組鏡下黏膜及黏膜淺層僅有少量中性粒細胞、淋巴細胞浸潤， 組織損傷較輕， 炎癥程度較模型組明顯減輕。柳氮磺吡啶組可見黏膜消失或部分消失， 腺體排列紊亂， 炎性細胞浸潤， 但較模型組有所減輕。

2. 3 血清TNF-α在各組表達 沙利度胺組、柳氮磺吡啶組、模型組TNF-a的濃度分別為（19.51±8.06）、（40.88±14.24）、（115.32±9.60）pg/ml， 沙利度胺組降低血清TNF-α濃度的幅度高于柳氮磺吡啶組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

表2 血清中TNF-α在各組的表達比較（ x-±s， pg/ml）

組別 例數(shù) TNF-α

模型組 7 115.32±9.60

沙利度胺組 7 19.51±8.06a

柳氮磺吡啶組 7 40.88±14.24ab

注：與模型組比較， aP<0.01；與沙利度胺組比較， bP<0.01

3 討論

沙利度胺最初作為一種鎮(zhèn)靜劑和止吐劑用于臨床， 后來因發(fā)現(xiàn)其有較強的致胎兒海豹樣畸形作用而被禁止使用， 直至1997 年Wettstein 等[2]報道了1例皮質(zhì)類固醇治療無效的克羅恩病患者經(jīng)沙利度胺治療獲得改善后受到重視， 隨后出現(xiàn)沙利度胺治療UC的個案報導(dǎo)及更多的實驗研究。

有相關(guān)學(xué)者[3]通過對內(nèi)鏡下活動期UC患者的腸黏膜TNF-α的分泌量研究發(fā)現(xiàn)， 活動期UC患者腸黏膜TNF-α數(shù)量顯著高于非活動期， TNF-α與炎癥程度密切相關(guān)。鄒莉波等[4]檢測TNBS結(jié)腸炎模型大鼠血清TNF-α含量時， 發(fā)現(xiàn)均顯著高于正常對照組， 且與疾病嚴重程度成正相關(guān)。近年來已有研究用ELISA法檢測UC患者的結(jié)腸TNF-α的釋放程度， 發(fā)現(xiàn)活動期UC患者平均TNF-α明顯高于對照組（非活動期患者）。其中應(yīng)用5-氨基水楊酸（5-ASA）治療癥狀緩解者的TNF-α顯著下降， 治療無效者TNF-α濃度仍高， 提示腸腔內(nèi)TNF-α數(shù)量可以作為UC患者的炎癥活動性指標[5]。本實驗說明柳氮磺吡啶為治療UC的有效藥物。而目前雖然已有沙利度胺用于IBD 患者及動物模型的報道， 但其確切的機制和療效目前仍未有定論， 有待于進一步研究。

目前一些針對細胞因子失衡的免疫調(diào)節(jié)藥物的治療已經(jīng)在動物模型上取得了較好的效果。UC發(fā)病機制尚不明確， 一般認為是多環(huán)節(jié)、多因素相互作用的結(jié)果。促炎細胞因子及抑炎細胞因子失衡機制的研究無疑為研究UC的發(fā)生、發(fā)展提供了理論依據(jù)， 且有利于研制新藥及開發(fā)更有效的臨床治療手段。

本研究證實大鼠應(yīng)用沙利度胺治療后， 顯著改善UC的癥狀， TNF-α的濃度明顯低于模型組和柳氮磺吡啶組（P<0.01）， 表明沙利度胺具有減輕腸黏膜水腫， 對抗炎性細胞浸潤， 發(fā)揮抗炎的作用。實驗顯示沙利度胺與柳氮磺吡啶在減輕結(jié)腸炎癥、降低TNF-α活性及減少TNF-α的合成等方面有顯著差異， 但在升高大鼠體質(zhì)量方面無顯著差異性， 因為柳氮磺吡啶主要通過抑制TNF-α及其他因子的表達而發(fā)揮作用。依據(jù)UC大鼠血清TNF-α濃度治療前后的變化， 可推斷沙利度胺對UC的治療， 可通過抑制TNF-a的表達而發(fā)揮作用。這種因子的濃度可能作為診斷UC病情活動的生物學(xué)指標， 為臨床上UC的診斷提供一定的理論依據(jù)。

腸道組織大體觀察亦可發(fā)現(xiàn)沙利度胺治療組黏膜損傷較輕， 說明沙利度胺可作為一種新藥治療UC。沙利度胺對UC治療有效， 沙利度胺是通過降低TNF-α活性及減少TNF-α的合成而發(fā)揮作用的， 其他的作用方式可能是次要的， 這為其臨床應(yīng)用價值提供了一定的理論依據(jù)。沙利度胺雖為免疫調(diào)節(jié)劑， 但是其不抑制正常免疫， 副作用可通過減量或停藥或服用相關(guān)藥物減輕， 病情復(fù)發(fā)后再次用藥依然見效。藥物的有效性需大量臨床實驗進一步研究證實， 常規(guī)藥物治療無效的患者， 試用沙利度胺會得到意外的效果。希望大家繼續(xù)努力研制新藥， 減少不良反應(yīng)。

綜上所述， 沙利度胺治療UC有效， 能顯著減輕結(jié)腸炎癥， 降低TNF-a濃度強于柳氮磺吡啶。

參考文獻

[1]Togawa J， Nagase H， Tanaka K， et al. Lactoferrin reduces colitis in rats via modulation of the immune system and correction of cytokine imbalance. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2002， 283 （1）：187-195.

[2]Wettstein AR， Meagher AP. Thalidomide in Crohns disease. Lancet， 1997， 350（9089）：1445.

[3]Dong ZZ， Yao DF， Wu W， et al. Delayed hepatocarcinogenesis through antiangiogenic intervention in the nuclear factor-kappa B activation pathway in rats. Hepatobiliary Pancreat Dis Int， 2010， 9（2）：169-74.

[4]鄒莉波， 劉艷， 先宇飛， 等 .復(fù)方青黛顆粒治療UC的機制.沈陽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報， 2006， 23（2）：119-122.

[5]Desreumaux P， Uhosh S. Review article： mode of action and delivery of 5-aminosalicylic acid-new evidence. Aliment Pharmacol Ther， 2006， 24（Suppl 1）：2-9.

[收稿日期：2016-01-28]