王宏立，倪金鳳

(1畢節(jié)市第一人民醫(yī)院，四川畢節(jié)551700；2唐山市婦幼保健院)

非洲淋巴細(xì)胞瘤病毒感染兒童體液免疫相關(guān)指標(biāo)變化及意義

王宏立1，倪金鳳2

(1畢節(jié)市第一人民醫(yī)院，四川畢節(jié)551700；2唐山市婦幼保健院)

目的 探討非洲淋巴細(xì)胞瘤病毒(EBV)感染兒童體液免疫相關(guān)指標(biāo)變化及意義。方法 選取EBV感染兒童428例(觀察組)，其中0～2歲92例、3～5歲281例、6～14歲55例；正常健康兒童428例(對照組)，其中0～2歲90例、3～5歲280例、6～14歲58例。兩組均留取外周血，檢測淋巴細(xì)胞總數(shù)、B淋巴細(xì)胞及其亞群百分比，B淋巴細(xì)胞活化因子(BAFF)及其受體(BR3)陽性表達(dá)細(xì)胞百分比，血清IgG、IgA、IgE及補(bǔ)體C3、C4水平。結(jié)果 觀察組各年齡段患兒外周血CD19+總B細(xì)胞、CD19+CD38+抗體分泌細(xì)胞百分比，BAFF、BR3陽性表達(dá)細(xì)胞百分比，血清IgG、IgA及補(bǔ)體C3水平均明顯低于對照組同年齡段者(P均<0.01)；其他指標(biāo)組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。結(jié)論 EBV感染患兒外周血B細(xì)胞、抗體分泌細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞表面BAFF和BR3表達(dá)及血清IgG、IgA、補(bǔ)體C3水平均下降；體液免疫功能受損可能參與了EBV感染的發(fā)生。

非洲淋巴細(xì)胞瘤病毒；兒童；體液免疫；B淋巴細(xì)胞

非洲淋巴細(xì)胞瘤病毒(EBV)是一種皰疹病毒科γ亞科的DNA病毒。EBV感染可累及全身多個系統(tǒng)[1]，感染癥狀多樣，且多不典型，早期診斷困難。兒童對EBV的易感性高[2]，感染后可表現(xiàn)為傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)、X-連鎖淋巴組織增生性疾病(XLP)、慢性活動性EBV感染(CAEBV)、EBV感染相關(guān)噬血細(xì)胞淋巴組織細(xì)胞增多癥(EBV-HLH)等， IM是其典型表現(xiàn)[3,4]。EBV感染的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為主要與細(xì)胞免疫有關(guān)。本研究探討EBV感染兒童體液免疫相關(guān)指標(biāo)變化及意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年3月～2014年6月畢節(jié)市第一人民醫(yī)院兒科收治的EBV感染患兒428例(觀察組)，均符合EBV診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；男221例，女207例；年齡8個月～14歲，其中0～2歲92例、3～5歲281例、6～14歲55例；臨床表現(xiàn)：IM 183例，XLP 135例，CAEBV 23例，EBV-HLH 87例。選取同期在本院體檢健康兒童428例作為對照組，男220例，女208例；年齡8個月～14歲，其中0～2歲90例、3～5歲280例、6～14歲58例。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 相關(guān)指標(biāo)觀察 兩組均于清晨抽取空腹靜脈血10 mL(觀察組取血時均未接受腎上腺皮質(zhì)激素及免疫抑制劑等治療)，分為兩份，一份加入乙二胺四乙酸二鈉抗凝，置于4 ℃冰箱保存，用于檢測B淋巴細(xì)胞；另一份于37 ℃溫箱放置1 h，置于4 ℃冰箱過夜，3 000 r/min離心10 min，收集上清置于4 ℃冰箱保存，用于免疫球蛋白及補(bǔ)體檢測。

1.2.1 外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)、B淋巴細(xì)胞及亞群百分比 取抗凝血標(biāo)本，采用全自動細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)全血淋巴細(xì)胞總數(shù)。100 μL抗凝血標(biāo)本中分別加入CD19單克隆抗體、CD25單克隆抗體、ECD-CD19、PECD20、FITC-CD27、PE-CD38及同型陰性對照IgG-FITC和IgG-PE各20 μL，4 ℃靜置30 min，加紅細(xì)胞裂解液，1 000 r/min離心10 min，PBS重懸，采用流式細(xì)胞儀計數(shù)B淋巴細(xì)胞總數(shù)及亞群百分比。淋巴細(xì)胞標(biāo)記物：B淋巴細(xì)胞為CD19+，初始B淋巴細(xì)胞為CD19+CD20+CD27-，記憶性B淋巴細(xì)胞為CD19+CD20+CD27+，抗體分泌細(xì)胞為CD19+CD38+。

1.2.2 B淋巴細(xì)胞活化因子(BAFF)及其受體(BR3)檢測 取抗凝血標(biāo)本，分別加入B淋巴細(xì)胞活化因子FITC-BAFF及其受體PE-BR3、同型陰性對照，采用流式細(xì)胞儀計數(shù)BAFF、BR3陽性細(xì)胞百分比。具體步驟同1.2.1。

1.2.3 免疫球蛋白及補(bǔ)體檢測 取血清標(biāo)本，采用速率散射比濁法檢測免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、IgE，采用ELISA法檢測補(bǔ)體C3、C4。

2 結(jié)果

2.1 外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)、B淋巴細(xì)胞及其亞群百分比 觀察組各年齡段患兒外周血CD19+總B細(xì)胞、CD19+CD38+抗體分泌細(xì)胞百分比均較對照組同年齡段者降低(P均<0.01)。見表1。

2.2 外周血BAFF、BR3陽性細(xì)胞百分比 觀察組各年齡段患兒外周血BAFF、BR3陽性細(xì)胞百分比均低于對照組同年齡段者(P均<0.01)。見表2。

表1 兩組外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)、B淋巴細(xì)胞及其亞群百分比比較±s)

注：與對照組同年齡段者比較，*P<0.01。

2.3 血清IgG、IgA、IgE和補(bǔ)體C3、C4觀察組各年齡段患兒血清IgG、IgA、補(bǔ)體C3水平均較同年齡段對照組降低(P均<0.01)。見表3。

3 討論

EBV是一種人類普遍感染的雙鏈DNA皰疹病毒，人是EBV的惟一宿主，超過90%的人群感染過EBV，感染后可終身攜帶病毒造成潛伏感染[6]。

表2 兩組BAFF、BR3陽性細(xì)胞百分比比較±s)

注：與對照組同年齡段比較，*P<0.01。

表3 兩組血清IgG、IgA、IgE和補(bǔ)體C3、C4水平比較

注：與對照組同年齡段比較，*P<0.01。

EBV感染主要導(dǎo)致EBV侵襲性疾病和免疫性疾病，可涉及血液、腎臟、肝臟、呼吸道、淋巴結(jié)等器官系統(tǒng)[7]。此外，EBV感染還被認(rèn)為與鼻咽癌、 淋巴瘤、 胃癌等多種腫瘤發(fā)生密切相關(guān)[8]。兒童對于EBV的易感性更高，流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國3～5歲兒童EBV VCA-Ig抗體的陽性檢出率達(dá)90%以上。IM是兒童EBV感染典型表現(xiàn)，也是造成兒童EBV感染后長期發(fā)熱的主要因素之一[9]。EBV感染患兒年齡越小臨床表現(xiàn)越不典型，免疫力低者病死率較高。

EBV感染的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為主要與細(xì)胞免疫有關(guān)。EBV感染激發(fā)強(qiáng)烈的T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)，分泌炎性介質(zhì)，導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞分化異常，機(jī)體出現(xiàn)異常細(xì)胞免疫反應(yīng)。因此認(rèn)為，T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在EBV感染發(fā)生、發(fā)展過程中具有決定性作用[10]。成熟B細(xì)胞在EBV感染免疫中也具有不可忽視的作用。EBV首先感染口咽部的上皮細(xì)胞并在其內(nèi)復(fù)制增殖，由于淋巴組織中B細(xì)胞具有EBV受體，因此受感染附近的B淋巴細(xì)胞是EBV侵襲的靶細(xì)胞，被感染的B細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)傳遞病毒抗原信息至全身其他部位，進(jìn)而導(dǎo)致相應(yīng)的全身性感染[11]。此外，EBV可終生潛伏在B細(xì)胞中無法被機(jī)體免疫系統(tǒng)完全清除，當(dāng)機(jī)體免疫機(jī)能缺陷時，潛伏的EBV再次激活并大量復(fù)制，呈持續(xù)活動性狀態(tài)，導(dǎo)致EBV感染的癥狀和體征持續(xù)存在或退而復(fù)現(xiàn)。

由于新生兒、兒童與成人B淋巴細(xì)胞水平有所區(qū)別，故本研究將EBV感染患兒及健康兒童按0～2歲、3～5歲和6～14歲年齡段分組。結(jié)果表明，三個年齡組EBV感染患兒與相應(yīng)年齡段健康兒童外周血淋巴細(xì)胞總量及初始B細(xì)胞、記憶性B細(xì)胞比例比較均無統(tǒng)計學(xué)差異，而淋巴細(xì)胞總量、抗體分泌細(xì)胞比例均較相應(yīng)年齡段健康兒童下降。提示EBV感染患兒的體液免疫功能受損，抗體產(chǎn)生受抑，EBV主要感染B淋巴細(xì)胞。

BAFF是表達(dá)于多種免疫細(xì)胞的Ⅱ型跨膜蛋白，BAFF在B 淋巴細(xì)胞的成熟、增殖、活化和發(fā)揮免疫功能過程中發(fā)揮重要作用。而BR3是BAFF的受體之一，能與BAFF結(jié)合從而維持B淋巴細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)及體液免疫平衡[12]。BAFF及BR3表達(dá)增加可在一定程度上增強(qiáng)B細(xì)胞的成熟、存活、增殖和分化等，維持B細(xì)胞穩(wěn)態(tài)及體液免疫平衡[13]。本研究中0～2歲、3～5歲和6～14歲EBV感染患兒的外周血BAFF、BR3陽性表達(dá)細(xì)胞百分比均低于同年齡段健康兒童，提示EBV感染患兒B細(xì)胞活化功能受損。

作為EBV感染人體后的主要宿主細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞被激活并轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生針對EBV特異性抗原分子的一系列抗體。一般情況下EBV感染后3天就可檢測到抗體，1周后抗體量快速增加，并在2～3周達(dá)到頂峰，持續(xù)約7周，其中IgM起峰快但持續(xù)時間不如IgG。EBV特異性抗體主要包括抗殼抗原抗體(EBV-CA)、抗早期抗原抗體(EBV-EA)和抗核心抗原抗體(EBV-NA16)[14]。EBV感染首先產(chǎn)生的是EBV-CA IgM抗體及隨后的EBV-CA IgG抗體，最后是EBV-EA抗體，而EBV-NA16抗體通常在EBV感染晚期產(chǎn)生。因此，檢測EBV感染患者血清抗體類型，根據(jù)EBV感染期間產(chǎn)生不同抗體的特點可初步判斷感染時期[15]。但機(jī)體的免疫反應(yīng)復(fù)雜，相關(guān)抗原產(chǎn)生的抗體存在時間差異性，EBV感染存在持續(xù)性，故臨床僅以某一時期血清抗體類型及水平診斷原發(fā)性EBV感染存在一定缺陷。本研究結(jié)果顯示，觀察組各年齡段患兒血清IgG、IgA和補(bǔ)體C3水平均低于對照組同年齡段者，但血清IgM、IgE和補(bǔ)體C4水平組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。IgM和IgE主要出現(xiàn)在疾病的早期，而IgG和IgA在疾病發(fā)生、發(fā)展過程中持續(xù)存在，可反映機(jī)體體液免疫狀況。進(jìn)一步提示EBV感染患兒體液免疫受損。

綜上所述，EBV感染患兒體液免疫功能受損，這可能是其發(fā)病的主要原因。

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倪金鳳 (E-mail: 464941664@qq.com )

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.20.027

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1002-266X(2016)20-0070-03

2015-11-19)