呂　倩， 涂云華， 李　劍， 劉濤華， 張榮慶， 羅　垚， 康穎倩*

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 微生物學(xué)教研室， 貴州 貴陽　550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 皮膚性病科， 貴州 貴陽　550004)

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不同來源茶樹組織的茶多酚含量比較*

呂倩1**， 涂云華2， 李劍1， 劉濤華1， 張榮慶1， 羅垚1， 康穎倩1***

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 微生物學(xué)教研室， 貴州 貴陽550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 皮膚性病科， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 比較不同茶樹組織中茶多酚的含量，為茶樹修剪枝葉的利用提供參考。方法： 通過生石灰水沉淀法提取綠茶樹的新鮮葉、干燥葉、新鮮樹枝、干燥樹枝的茶多酚粗提取物和純化茶多酚，比較4種茶樹組織的茶多酚粗提取物質(zhì)量及提取率；采用分光光度計(jì)法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)茶多酚吸光度(A)值，繪制茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過4種茶樹組織純化茶多酚的吸光度(A)值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得茶多酚含量并計(jì)算其純度，比較4種茶樹組織純化茶多酚含量和純度。結(jié)果: 茶樹組織茶多酚粗提取物質(zhì)量及提取率從高到低依次為新鮮葉、干燥葉、新鮮樹枝及干燥樹枝，茶多酚含量從高到低依次為新鮮葉、干燥葉、新鮮樹枝及干燥樹枝，純度從高到低依次則為新鮮葉、新鮮樹枝、干燥葉及干燥樹枝。結(jié)論: 新鮮茶葉和新鮮茶樹枝的茶多酚含量較高，可為茶葉及茶樹枝綜合開發(fā)利用提供參考。

[關(guān)鍵詞]茶； 茶多酚； 生石灰水沉淀法； 萃取，茶樹組織； 分光光度法

充分開發(fā)茶葉的用途，開展茶葉的綜合利用是一項(xiàng)具有重要意義的研究課題。茶多酚是上世紀(jì)初日本科學(xué)家發(fā)現(xiàn)的一種茶葉提取物，是一種天然抗氧化劑[1-3]，具有抗衰老、抗癌、消除人體過剩的自由基、抗輻射、降低血脂等功效[4-7]。在日常生活中人們通常用炒熟的茶葉來泡制茶水，很少使用新鮮茶葉或茶樹枝。而在茶園中，定期修剪保持茶樹采摘面積是茶葉豐產(chǎn)的重要措施，每年產(chǎn)生大量的廢棄修剪枝葉，造成不必要的浪費(fèi)[8]。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于不同來源茶樹組織所含茶多酚含量研究報(bào)道較少，本研究以茶樹組織的新鮮葉、干燥葉、新鮮樹枝及干燥樹枝為原料，通過生石灰水沉淀法提取茶多酚并測(cè)定其含量，為茶葉加工過程中的大量修剪枝葉充分開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料、試劑與儀器

選用貴州省遵義市鳳岡縣經(jīng)處理后的綠茶樹不同部位(新鮮葉、干燥葉、新鮮樹枝及干燥樹枝)為供試茶樹組織，茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品、722分光光度計(jì)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、乙酸乙酯、酒石酸亞鐵溶液。

1.2方法

1.2.1提取茶多酚采用生石灰水沉淀法[9]提取。稱取茶組織190 g，加適量蒸餾水后100 ℃加熱20 min，過濾，收集濾液。向?yàn)V液中加入適量石灰水調(diào)節(jié)濾液 pH 7～8，靜置 24 h。利用循環(huán)水式真空泵加速使濾液抽入濾瓶，抽濾完全后小心刮取布氏漏斗中濾紙上的石灰水提取物。用乙酸乙酯溶解石灰水提取物，將溶解液置于已經(jīng)加入等量鹽酸分液漏斗中，進(jìn)行萃取，放出下層鹽酸溶液，再放出上層乙酸乙酯溶液。用水浴回流蒸餾裝置回收乙酸乙酯，將回收乙酸乙酯后剩余的物質(zhì)干燥，得到茶多酚粗提取物。重復(fù)乙酸乙酯萃取步驟，得到純化的茶多酚晶體。

1.2.2繪制茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線[1]稱取茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品0.25 g，加水定容至250 mL，混勻，即為1 g/L茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、2.0、3.0及4.0 mL各加水至10 mL(換算后每克茶組織中分別含31.061、61.943、92.962及122.374 mg茶多酚)，分別加酒石酸亞鐵溶液10 mL，加入pH 7.5的磷酸緩沖液至50 mL，在波長(zhǎng)540 nm處分別測(cè)定吸光度值(A)，以每克茶組織所含茶多酚含量為縱坐標(biāo)，吸光度值(A)為橫坐標(biāo)，繪制茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線[10]。

1.2.3純化茶多酚含量及純度精確稱取200 mg茶多酚置于100 mL的燒杯中，加入30 mL沸水冷卻后轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，準(zhǔn)確量取1 mL置入25 mL的容量瓶中，加入5 mL的酒石酸鐵，用標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液(pH=7.5)稀釋至刻度，于波長(zhǎng) 540 nm處測(cè)定吸光度值(A)，從茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得茶多酚的含量。根據(jù)獲得的茶多酚含量計(jì)算4種茶樹組織提取的茶多酚純度，茶多酚純度(%)=茶多酚質(zhì)量/提取的茶多酚粗品質(zhì)量×100[11]。

2結(jié)果

2.1茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定結(jié)果繪制茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)。得到線性回歸方y(tǒng)=205.5x+0.221，R2=1，表明曲線具有良好的線性關(guān)系?？筛鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得不同茶樹組織的茶多酚含量。

圖1　茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1　Tea polyphenols standard curve

2.2茶多酚粗提取物質(zhì)量及提取率

初步回收乙酸乙酯后，所得茶多酚的粗提取物質(zhì)量及提取率從高到低依次為新鮮葉、干燥葉、新鮮樹枝及干燥樹枝，見表1。

2.3純化茶多酚的茶湯顏色、含量及純度

從茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得的結(jié)果顯示，4種茶樹組織中，新鮮葉的茶多酚含量最高，其次為干燥葉、新鮮樹枝及干燥樹枝；純度從高到低依次則為新鮮葉、新鮮樹枝、干燥葉及干燥樹枝；4種茶樹組織茶湯顏色均為黃褐色。見表2。

表1　茶多酚粗提取物質(zhì)量及提取率

表2　不同來源茶樹組織所提取的純化茶

3討論

茶葉經(jīng)過加工熱炒后能夠較長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)藏，其滋味和香氣更加令人愉悅，其細(xì)胞組織使更多的對(duì)人體有益的物質(zhì)能夠容易地通過沖泡而被人們吸收[12]。而在茶園中，定期修剪保持茶樹采摘面積是茶葉豐產(chǎn)的重要措施，每年會(huì)產(chǎn)生大量的廢棄修剪枝葉[10]。直接修剪的枝葉容易導(dǎo)致茶園土壤酸化[3]，不僅影響耕地，還會(huì)對(duì)茶園的生態(tài)系統(tǒng)造成影響。茶多酚是茶葉中多羥基酚類化合物的混合物[13]，占茶葉干重的15%～30%[14]。

目前，提取茶多酚的技術(shù)和方法已經(jīng)十分成熟和穩(wěn)定，從茶葉中提取茶多酚的純度已高達(dá)99%。本研究通過生石灰水沉淀法[9]提取不同茶樹組織的茶多酚，結(jié)果表明新鮮葉的茶多酚含量最高?？赡苁切迈r茶葉保持了茶葉最原始自然的狀態(tài)，儲(chǔ)存的多酚類物質(zhì)含量最高。說明在不經(jīng)過加工、干燥的情況下，新鮮茶葉能最大程度保留茶多酚。而干燥茶葉經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存，水分蒸發(fā)，組織細(xì)胞受損，部分化學(xué)物質(zhì)被氧化，因此茶多酚含量低于新鮮茶葉。不論干燥與否，茶葉中茶多酚均含量高于茶樹枝。但新鮮茶樹枝的茶多酚含量?jī)H比干燥茶葉小一點(diǎn)。這為茶園中大量的廢棄枝葉的再利用給予啟發(fā)。并且新鮮茶樹枝茶多酚純度高于干燥茶葉，說明利用新鮮茶樹枝提取茶多酚方法可行。綜上，新鮮茶葉和新鮮茶樹枝的茶多酚含量較高，可為茶葉及茶樹枝綜合開發(fā)利用提供參考。

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(2015-11-25收稿，2016-02-09修回)

中文編輯： 吳昌學(xué)； 英文編輯： 劉華

Comparative Study on Content of Tea Polyphenols Extracted from Different Tea Plant Tissue

LYU Qian1， TU Yunhua2， LI Jian1， LIU Taohua1， ZHANG Rongqing1， LUO Yao1， KANG Yingqian1

(1.DepartmentofMicrobiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,GuizhouChina; 2.DepartmentofDermatologyandVenerealDisease,theAffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To compare the tea polyphenols amount extracted from different tea plant tissure, and to provide the scientific reference for full development and utilization of tea branches and tea leaves. Methods: The tea polyphenols from four different tea plant tissue(fresh tea leaves, dry tea leaves, fresh tea branch and dry tea branch) were extracted by limewater precipitation method. The quality of tea polyphenols crude extract and rate of extraction were compared between 4 different tea plant tissue. Spectrophotometry was adopted to determine absorbance of tea polyphenols of standard concentration and the standard curve of tea polyphenols was plotted, by which the tea polyphenols content and purity of 4 different tea plant tissue was calculated and compared. Results: In 4 different tea plant tissue, the quality of tea polyphenols crude extract and rate of extraction from high to low in order were fresh tea leaves, dry tea leaves, fresh tea branch and dry tea branch, the tea polyphenols content from high to low in order were fresh tea leaves, dry tea leaves, fresh tea branch and dry tea branch, and the tea polyphenols purity from high to low in order were fresh tea leaves, fresh tea branch, dry tea leaves and dry tea branch. Conclusion: The tea polyphenols content in fresh tea leaves and fresh tea branch is relatively high. The study provides the scientific reference for full development and utilization of tea branches and tea leaves.

[Key words]tea; tea polyphenols; lime water precipitation; extraction; tea plant tissue; spectrophotometry

[中圖分類號(hào)]Q657.8

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1000-2707(2016)03-0265-03

*[基金項(xiàng)目]國(guó)家自然基金地方項(xiàng)目(31060006，31260029)； 貴州省社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)項(xiàng)目[黔科合SY字(2011)3017號(hào)]； 貴州省衛(wèi)生廳科技項(xiàng)目(gzwkj2010-1-025)； 貴陽市科技局社會(huì)發(fā)展與民生計(jì)劃[筑科合同(2011103)16號(hào)]

**貴州醫(yī)科大學(xué)2013級(jí)碩士研究生

***通信作者 E-mail:joycekangtokyo@qq.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-03-17網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160317.1024.020.html