馬琳 項(xiàng)顆 孫莉

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院老年病科，長(zhǎng)春13 0 0 2 1）

陽(yáng)和膠囊對(duì)去勢(shì)后骨質(zhì)疏松癥大鼠血清B G P、E2、L H、F S H 表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究※

馬琳 項(xiàng)顆 孫莉*

（吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院老年病科，長(zhǎng)春13 0 0 2 1）

目的通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊的藥效作用作出正確評(píng)價(jià)。方法對(duì)去勢(shì)模型大鼠分別以3.2 4、1.6 2、0.8 1 g藥粉/k g體重劑量灌胃給藥15周后，分別測(cè)定血清中骨鈣素（B G P）、雌激素（E2）、促卵泡激素（F S H）、促黃體生成素（L H）含量及脛骨、股骨骨密度。結(jié)果院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊對(duì)血清中B G P、E2、L H、F S H含量及脛骨和股骨骨密度均有一定的提升作用，其中骨鈣素及促黃體生成素含量與模型組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異顯著。結(jié)論院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊具有提升血清中B G P、E2、L H、F S H含量及改善骨密度作用。

去勢(shì)；大鼠；骨鈣素；雌激素；促卵泡激素；促黃體生成素；骨質(zhì)疏松證；骨瘺

骨質(zhì)疏松癥是世界最流行的人類疾病之一［1］，全世界患病總?cè)藬?shù)超過(guò)2億，發(fā)病率位居常見(jiàn)病、多發(fā)病的第6位［2］。我國(guó)老年人口居于世界首位，現(xiàn)有骨質(zhì)疏松癥患者9000萬(wàn)，占總?cè)丝诘?.1%，預(yù)計(jì)到2050年將增加到2.2億，那時(shí)全世界一半以上的骨質(zhì)疏松性骨折將發(fā)生在亞洲，而絕大多數(shù)是在我國(guó)［3］［4］。隨著我國(guó)老年人口的增加，骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率處于上升趨勢(shì)，給社會(huì)帶來(lái)巨大危害，已被WHO列入三大老年病之一。積極開(kāi)展高效的預(yù)防與治療骨質(zhì)疏松癥的中醫(yī)藥研究對(duì)于降低老年人群骨折率、提升老年人生活質(zhì)量等都具有重要意義。我科室多年來(lái)在中醫(yī)藥防治老年骨質(zhì)疏松癥方面做了大量工作，取得了一些成績(jī)。我們采用院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊治療該病，臨床證實(shí)療效可靠，可明顯改善患者臨床癥狀。為了進(jìn)一步探討陽(yáng)和膠囊防治老年骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)制，我們近三年又進(jìn)行了陽(yáng)和膠囊對(duì)去勢(shì)后骨質(zhì)疏松癥大鼠血清BGP、E2、LH、FSH表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究，為新藥開(kāi)發(fā)研究提供依據(jù)，為探索骨質(zhì)疏松癥新的防治技術(shù)奠定基礎(chǔ)。結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物wistar種大白鼠（由延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供）

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑陽(yáng)和膠囊（由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室提供），膠囊內(nèi)容物棕色粉末，沒(méi)有生藥量標(biāo)示，0.3 g藥粉/粒。實(shí)驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配至所需濃度。

陽(yáng)性藥選用（1）戊酸雌二醇片（Bayer），淡黃色片，1 mg/片，批號(hào)226B。（2）仙靈骨葆膠囊，貴州同濟(jì)堂制藥有限公司，膠囊內(nèi)容物為棕黃色藥粉，0.5 g藥粉/粒，批號(hào)1303125。骨鈣素、雌激素、促卵泡激素、促黃體生成素酶聯(lián)免疫試劑盒由上海常斤生物科技有限公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器DNM-9602酶標(biāo)儀：北京普朗新技術(shù)有限公司；洗板機(jī)：芬蘭（Thermo Labsystems）；TG16W微量高速離心機(jī)；GNP-9080隔水式恒溫培養(yǎng)箱；美國(guó)HOLOGIC雙能X線骨密度儀。

2 過(guò)程和方法

2.1 模型制造取雌性大鼠50只，以2%戊巴比妥鈉（40mg/kg）麻醉，腹位固定，軀干下1/3處仔細(xì)消毒清潔皮膚，離脊柱兩側(cè)各1.5 cm處作縱向切口（1 cm），分離肌肉層，可見(jiàn)淡黃色脂肪團(tuán)，剝離脂肪團(tuán)找出卵巢，結(jié)扎與子宮角連接處，剪掉卵巢及多余絲線，將組織推回腹腔，縫合切口，局部清潔消毒，術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)，正常飲水、攝食。

2.2 給藥方法術(shù)后三日將大鼠分組，假手術(shù)組（進(jìn)行手術(shù)過(guò)程，不切除卵巢）做正常對(duì)照，其余鼠隨機(jī)分為六組，模型對(duì)照組、雌二醇對(duì)照組、仙靈骨葆對(duì)照組、陽(yáng)和膠囊高中低三個(gè)劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組和陽(yáng)和膠囊組每日給藥一次，連續(xù)15周，假手術(shù)組和模型對(duì)照組每日給予等體積水。

2.3 觀測(cè)指標(biāo)末次給藥后1 h，麻醉動(dòng)物，腹主動(dòng)脈采血，分離血清，分別按酶聯(lián)免疫試劑盒中所要求操作方法做標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定血清中BGP、E2、LH、FSH含量，并提取大鼠脛骨和股骨，分別測(cè)定骨密度。

3 結(jié)果

見(jiàn)表1。

表1 各組B G P、E2、F S H、L H及骨密度值比較表（±s）

表1 各組B G P、E2、F S H、L H及骨密度值比較表（±s）

注：給藥組與模型組比較*P＜0.0 5**P＜0.0 1***P＜0.0 0 1，假手術(shù)組與模型組比較△P＜0.0 5△△P＜0.0 1

組別給藥劑量（g藥粉/ k g）動(dòng)物數(shù)B G P（p g / m l；x ± s D）E2（p g / m l；x ± s D）F S H（n g / m l；x ± s D）L H（n g / m l；x ± s D）B M D（g / c m2）脛骨股骨假手術(shù)組模型對(duì)照組戊酸雌二醇片（12 μ g / k g）仙靈骨葆膠囊陽(yáng)和膠囊組1陽(yáng)和膠囊組2陽(yáng)和膠囊組3 --12 μ g / k g 2 . 163 . 2 4 1 . 6 2 0 . 8 18 8 8 8 8 8 8 2 0 7 . 0 6 ± 2 1 . 7 9△△17 2 . 3 9 8 ± 2 1 . 6 6 19 6 . 16 1 ± 2 3 . 0 4*19 9 . 8 6 8 ± 3 2 . 19*19 5 . 8 0 6 ± 17 . 6 3*1 77 . 5 8 7 ± 3 2 . 15 18 3 . 3 5 9 ± 3 2 . 3 12 14 . 7 6 3 ± 2 6 . 8 1△18 5 . 5 12 ± 2 3 . 9 5 2 0 6 . 2 9 1 ± 18 . 7 6*2 0 3 . 13 9 ± 2 9 . 5 2 2 0 2 . 2 4 5 ± 3 0 . 2 3 19 3 . 2 0 1 ± 3 6 . 7 11 9 0 . 9 5 6 ± 3 6 . 15 4 3 . 2 9 4 ± 5 . 8 4△△3 1 . 17 6 ± 7 . 8 6 3 7 . 3 3 8 ± 7 . 0 5 3 6 . 9 2 5 ± 3 . 7 3 3 6 . 2 13 ± 5 . 9 5 3 1 . 8 2 1 ± 6 . 5 6 3 3 . 3 0 1 ± 6 . 5 9 7 . 4 0 7 ± 0 . 9 2△6 . 11 1 ± 1 . 0 17 . 4 9 3 ± 1 . 7 1*7 . 10 0 ± 0 . 9 4*7 . 3 2 2 ± 1 . 2 6*6 . 6 5 1 ± 1 . 2 0 6 . 5 4 9 ± 1 . 3 9 0 . 2 3 3 ± 0 . 0 4 10 . 2 0 8 ± 0 . 0 3 2 0 . 2 2 7 ± 0 . 0 14 0 . 2 2 2 ± 0 . 0 3 2 0 . 2 18 ± 0 . 0 3 5*0 . 2 13 ± 0 . 0 2 2 0 . 2 11 ± 0 . 0 2 7 0 . 2 5 2 ± 0 . 0 4 9 0 . 2 17 ± 0 . 0 3 4 0 . 2 4 6 ± 0 . 0 2 8 0 . 2 4 2 ± 0 . 0 16 0 . 2 3 4 ± 0 . 0 3 6*0 . 2 3 2 ± 0 . 0 5 2 0 . 2 2 2 ± 0 . 0 13

4 結(jié)論

院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊，去勢(shì)模型大鼠以3.24、1.62、0.81 g藥粉/kg體重劑量灌胃給藥，對(duì)血清中BGP、E2、LH、FSH含量及脛骨和股骨骨密度均有一定的提升作用，其中骨鈣素及促黃體生成素含量影響與模型組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異顯著。

5 討論

骨質(zhì)疏松癥（OP）是中老年人群中的常見(jiàn)、多發(fā)病，臨床以腰背痛、骨關(guān)節(jié)痛、骨折及駝背和身高縮短等位主要表現(xiàn)。據(jù)統(tǒng)計(jì)［5］，60歲以上的老年人發(fā)病率最高，50歲以上的女性年齡每增加10歲，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率增加10%。該病不僅減低了患者本人的生存質(zhì)量，而且給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。

目前，中西醫(yī)在治療骨質(zhì)疏松癥方面的藥物很多，但尚無(wú)一種成熟有效的治療方案。西藥主要分兩大類：一類是包括降鈣素、雙磷酸鹽、維生素D、鈣劑等骨吸收的抑制劑；另一類是促進(jìn)骨形成的藥物，包括氟化物，甲狀旁腺激素（PTH）及PTH片［6］。西藥治療副作用較多，需對(duì)其各項(xiàng)理化指標(biāo)進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)，以確保臨床藥物治療的安全性［7］。中醫(yī)藥在本病的治療中以其療效確切、副作用少、價(jià)格低廉等特點(diǎn)凸顯出巨大的優(yōu)勢(shì)。骨質(zhì)疏松癥在中醫(yī)學(xué)中屬于“骨痿”、“骨瘦”、“骨枯”、“骨極”、“骨肉疏薄”等疾病的范疇，腎主骨生髓，腎中精氣的盛衰決定著骨骼的強(qiáng)壯與衰弱，腎虛是骨痿發(fā)生的根本?！端貑?wèn)經(jīng)注節(jié)解·瘦論》云：“腎主骨，骨借髓以強(qiáng)，身憑足以任。腎虧則髓虛，髓虛則骨枯而足無(wú)力以任身?！薄端貑?wèn)·痿論》亦云［8］：“腎乃水臟，水不勝火，則骨枯而髓虛，發(fā)為骨痿”。因此，正是體現(xiàn)治病必求其本的原則，《素問(wèn)·痿論》提出了“骨痿者，補(bǔ)腎以治之”。我院院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊由熟地、補(bǔ)骨脂、炮姜、牛膝、枳殼、肉桂、菟絲子、白芥子等藥物組成，全方從溫補(bǔ)腎陽(yáng)入手，溫陽(yáng)與補(bǔ)血并用，滋補(bǔ)與辛散同施，使溫而不燥，滋而不膩，扶正祛邪，標(biāo)本同治，共奏溫經(jīng)通陽(yáng)，補(bǔ)腎壯骨之功。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察了院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊對(duì)去勢(shì)大鼠的骨密度及BGP、E2、LH、FSH水平的影響，探討了陽(yáng)和膠囊治療骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)制。研究結(jié)果表明：我院院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊可以不同程度地改善骨質(zhì)疏松模型大鼠的血清BGP、E2、LH、FSH水平，提高骨密度，其中骨鈣素及促黃體生成素含量與模型組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較差異顯著。中醫(yī)藥治療骨質(zhì)疏松癥的特色在于全身調(diào)整，中藥對(duì)骨質(zhì)疏松癥的作用是通過(guò)多途徑、多層次、多靶點(diǎn)的綜合藥理作用而實(shí)現(xiàn)的，既從根本著手，又兼顧骨質(zhì)疏松所產(chǎn)生的表象，如疼痛、腰膝酸軟等，標(biāo)本同治，通過(guò)對(duì)機(jī)體全身性的調(diào)節(jié)作用，達(dá)到糾正機(jī)體激素平衡和負(fù)鈣平衡作用的功效。有現(xiàn)代研究表明［9］，腎虛時(shí)免疫功能下降，內(nèi)分泌系統(tǒng)奈亂并有微量元素的改變，下丘腦-垂體-性腺軸功能的減退，性激素水平下降，進(jìn)而引起成骨功能下降，使單位體積的骨組織含量減少，從而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了院內(nèi)制劑陽(yáng)和膠囊通過(guò)調(diào)節(jié)微量元素，改善骨代謝，從而對(duì)骨質(zhì)疏松癥起到治療作用。然而，骨的代謝是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，由多種因素參與其中，所以確切作用機(jī)制的闡明尚有待進(jìn)一步研究。

［1］［1］EismanJA.Genetics of Osteoporosis［J］.EndocrRev，1999，20：788-804

［2］趙冀偉.骨質(zhì)疏松藥物治療概述［J］.天津藥學(xué)，2004，16（2）：6 8 3.

［3］宋紅湘.腎益精法治療骨質(zhì)疏松癥8 4例［J］.陜西中醫(yī)，2 0 0 3，2 4（12）：10 7 5-10 77.

［4］趙建，崔書(shū)國(guó)，國(guó)延軍，等.補(bǔ)腎壯骨活血膠囊治療骨質(zhì)疏松癥15 9例［J］.四川中醫(yī)，2005，2 3（7）：7 1-7 2.

［5］周久貿(mào)，劉浩，蔣森，等.沈陽(yáng)地區(qū)2 2 8 8例骨密度測(cè)定及骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率分析［J］.中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)影像雜志，2 0 0 8，19（2）：12 1-12 4.

［6］［6］UchioY，OchiM，AdachiN，etal.Intraos seou shy pertension and ve-nouscongestion in osteon ecrosis of the knee.Clin Or thop.2001.

［7］郭增平.骨質(zhì)疏松癥及其發(fā)生機(jī)制［J］.生物學(xué)教學(xué)，2 0 0 8，3 3（5）：8-10.

［8］吳犀翎，李躍華.原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥中醫(yī)藥內(nèi)治法文獻(xiàn)研究［J］.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).2011（11）：5 4 3.

［9］寇美靜，鄒小娟.腎虛與骨質(zhì)疏松癥［J］.湖北中醫(yī)學(xué)曉學(xué)報(bào)，2006，8（4）：6 1-6 2.

MA Lin； XIANG Ke； Sun Li
（Department of Geriatrics； Jilin Provincial Academy of Traditional Chinese Medicine； Changcun 130021； China）

Objective Through animal eXPeriments，to make a correct evaluation of effect on hosPital PreParation Yanghe caPsule. Methods The ovariectomized model rats were 3.24，1.62 and 0.81g Powder/kg weight dose gavage for 15 weeks，then serum osteocalcin（BGP），estrogen（E2），Promoting luteinizing hormone and follicle stimulating hormone（FSH），luteinizing hormone（LH）and the content of tibial and femoral bone mineral density were measured seParately.Results HosPital PreParation Yanghe caPsule on serum BGP，E2，LH，F(xiàn)SH and the content of tibia and femur bone density had a certain Promotion effect.The effect of osteocalcin and luteinizing hormone content and model grouP had statistically significant difference.Conclusion HosPital PreParation Yanghe caPsule can Promote serum BGP，E2，LH and FSH content，and imProve bone density.

ovariectomized；rat；osteocalcin；estrogen；follicle stimulating hormone；luteinizing hormone；osteoPorosis；atroPhic debility of bones

10.3 9 6 9/j.issn.1672-2 77 9.2016.11.0 6 5

1672-2 77 9（2016）-11-0 14 4-0 3

：楊杰本文校對(duì)：孫莉

2016-0 4-0 8）

吉林省科技廳自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（N o：2 0 13 0 10 11 2 9 J C）

＊通訊作者：Xiangke1961@163.com