張喜平，蘇　艷，王杏敏滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河北滄州061001

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復(fù)方三七散外敷對靜脈留置針?biāo)蚂o脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用*

張喜平，蘇艷，王杏敏
滄州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河北滄州061001

［摘要］目的：探討復(fù)方三七散對靜脈留置針?biāo)蚂o脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)效果，為臨床推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法：將30只成年新西蘭大耳兔隨機分為3組，每組10只，兔外耳緣靜脈血管穿刺后留置靜脈留置針，每天注射生理鹽水20 mL。對照組不用任何藥物，硫酸鎂組給予50％硫酸鎂紗布濕敷，復(fù)方三七散組給予復(fù)方三七散藥粉和70％酒精混合藥糊外敷，每天換藥1次，連續(xù)觀察10天后處死，取外耳緣靜脈標(biāo)本制作切片，觀察HE染色法和TUNEL法標(biāo)本的細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果：HE染色法和TUNEL法都顯示復(fù)方三七散組細(xì)胞凋亡均少于其他2組（P＜0.05）。結(jié)論：復(fù)方三七散外敷對靜脈留置針?biāo)蚂o脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用，且效果優(yōu)于硫酸鎂。

［關(guān)健詞］復(fù)方三七散；靜脈留置針；靜脈炎；細(xì)胞凋亡

Effects of Compound SanQi Powder for External Use on Venous Indwelling Needle-induced Cellular Apoptosis in Venous Endothelium

ZHANG Xiping,SU Yan,WANG Xingmin
Cangzhou Medical College，Cangzhou 061001,China

Abstract Objective:To provide theoretical evidence for clinical spread and application by exploring the effects of compound SanQi powder on venous indwelling needle-induced cellular apoptosis in venous endothelium.Methods:Thirty rabbits were randomized into three groups,ten rabbits each group,the rabbits were injected with physiological saline each day,20mL,after auricular vein of the rabbit were punctured and venous indwelling needle was retained,the control group was unhandled,magnesium sulfate group accepted 50％ magnesium sulfate wet compress,compound SanQi powder group compound SanQi powder and 70％ alcohol for external use,dressing changed once each day,the rabbits were sacrificed after observing for ten days consecutively,the sample of rabbit auricular vein was taken out and the slice was made,cellular apoptosis of the sample was observed after dealt with HE staining method and TUNEL method.Results:The results of HE staining method and TUNEL method demonstrated that compound SanQi powder was less than other two groups in cellular apoptosis (P＜0.05).Conclusion:Compound SanQi powder for external use could protect venous indwelling needle-induced cellular apoptosis in venous endothelium,and its effects are superior to these of magnesium sulfate.

Keywords compound SanQi powder;venous indwelling needle;phlebitis;cellular apoptosis

靜脈留置針的廣泛應(yīng)用極大地方便了臨床護(hù)理工作，然而隨著留置時間的增長，患者靜脈炎的發(fā)生率也隨之增高。因此尋求能夠延長靜脈留置針留置時間的方法和藥物就很有必要了。臨床運用自擬方劑“復(fù)方三七散”外敷防治靜脈留置針?biāo)蚂o脈炎取得一定療效。為進(jìn)一步探求其防治機理，筆者觀察了復(fù)方三七散對兔耳緣靜脈留置針?biāo)蚂o脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡保護(hù)作用的實驗研究，現(xiàn)報道如下：

1　材料與方法

1.1材料及藥物選用同種健康新西蘭大耳兔30只(購自河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，合格證號：醫(yī)動字第DK0507-0108)，月齡：5個月，普通級，體質(zhì)量3.5～4.0 kg，雌雄各半，實驗前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。美國BD公司生產(chǎn)Vialon材料制成的24G靜脈留置針，3M透明敷貼；生理鹽水注射液；封管液采用含量為25 U/mL肝素鹽水。TUNEL試劑盒為promega公司的末端熒光標(biāo)記TUNEL試劑盒。中藥復(fù)方三七散的配制選用中藥三七、大黃、遠(yuǎn)志、葛根、冰片，以4∶2∶2∶2∶1的比例混合，粉碎，過120目篩，備用。

1.2實驗動物及分組選取同種健康新西蘭大耳兔30只，隨機分為3組，每組10只，單籠飼養(yǎng)，每只兔籠上按分組編號。3組大耳兔在體質(zhì)量、性別、健康狀況方面，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。第1組右耳為靜脈留置針空白對照小組，左耳為復(fù)方三七散外敷治療小組；第2組右耳為靜脈留置針空白對照小組，左耳為硫酸鎂外敷治療小組；第3組右耳為硫酸鎂外敷治療小組，左耳為復(fù)方三七散外敷治療小組。

1.3靜脈留置針的操作方法指定一名經(jīng)驗豐富的護(hù)士進(jìn)行操作，選取兔外耳緣靜脈血管，用剃毛刀剃去實驗兔耳毛，選取兔外耳緣靜脈距耳尖1 cm處為穿刺點，皮膚常規(guī)消毒后，用BD 24G靜脈留置針由耳尖向耳根方向穿刺，刺入靜脈見回血后沿靜脈方向?qū)⒋┐提槾倘肷僭S，邊拔出針芯邊將導(dǎo)管全部輕輕送入靜脈，以常規(guī)輸液貼固定，緩慢勻速注射生理鹽水20 mL，15分鐘注完。如有外滲廢棄不用。注射完畢時生理鹽水2 mL脈沖式正壓封管，妥善固定包扎。用自制兔耳套包裹雙耳，以防抓脫。每隔24小時摘下兔耳套，按編號順序再次注射。

1.4各組藥物外敷方法復(fù)方三七散外敷小組：以穿刺血管為中線兩側(cè)各寬1 cm，共寬2 cm，以穿刺點為標(biāo)記遠(yuǎn)心端1 cm，近心端5 cm，共長約6 cm的矩形面積，作為藥物外敷范圍。每日注射生理鹽水20 mL，正壓封管后外敷一次。將復(fù)方三七散藥粉和70％酒精按2∶1比例混合成糊狀，用棉簽涂抹在外敷范圍，厚度2 mm左右，外敷后用保鮮膜覆蓋。24小時后用生理鹽水棉球擦去外敷藥，觀察局部皮膚，再采用同樣的藥物、方法外敷，1次/d。硫酸鎂外敷組：紗布需4層，用50％硫酸鎂溶液浸濕紗布濕敷，外敷后用保鮮膜覆蓋，24小時后更換紗布，范圍同復(fù)方三七散組。每日注射生理鹽水20 mL。靜脈留置針空白對照小組：每日常規(guī)注射生理鹽水20mL，正壓封管后不做外敷。

1.5對各組動物處理實驗開始后，每天上午9∶00開始按編號順序進(jìn)行注射、外敷藥物，然后給予正常飲食和水，觀察實驗兔飲食、活動情況。相同操作進(jìn)行240小時(10天)后，實驗兔按編號順序進(jìn)行腹腔麻醉，左右兩耳均切取活體標(biāo)本。切取活體標(biāo)本約5.5cm×1cm，即取以穿刺血管為中線兩側(cè)各寬0.5cm，共寬1 cm，以穿刺點為標(biāo)記遠(yuǎn)心端切取1.0 cm，近心端切取4.5 cm，共長約5.5 cm的矩型標(biāo)本，立即放入Bouin氏固定液中固定。

1.6形態(tài)學(xué)觀察及凋亡細(xì)胞檢測3組標(biāo)本均取材后立即放入Bouin氏固定液，固定24小時后常規(guī)脫水透明，石蠟包埋，從穿刺點端連續(xù)切片10張，厚度5～7 μm，脫蠟至水。做如下檢測：1)HE染色法：每份標(biāo)本10張切片中，從第1張開始間隔取5張切片進(jìn)行HE染色，光鏡觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)改變，獲得有價值切片258張，其中空白對照組90張，硫酸鎂組82張復(fù)方三七散組86張。2) TUNEL法：對每份標(biāo)本剩余5張切片采用TdT介導(dǎo)的dUTP末端標(biāo)記法檢測，實驗步驟按說明書進(jìn)行，獲得有價值切片262張，其中空白對照組92張，硫酸鎂組84張，復(fù)方三七散組86張。

1.7結(jié)果判斷HE染色：光鏡觀察耳緣靜脈內(nèi)皮連續(xù)光滑，血管周圍結(jié)構(gòu)清晰，未見典型凋亡細(xì)胞為陰性；血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)模糊，細(xì)胞有不同程度的圍繞核膜的染色質(zhì)濃縮，胞質(zhì)空泡樣改變和細(xì)胞皺縮，胞膜出現(xiàn)“皰樣結(jié)構(gòu)”為陽性［1］；TUNEL法［2］：顯示亮綠色熒光即為凋亡細(xì)胞，熒光顯微鏡下觀察分為4級：無凋亡(-)：未見或≤3個亮綠色熒光點；輕度(+)：3～7個亮綠色熒光點；中度(++)：8～15個亮綠色熒光點；重度(+++)：＞15個亮綠色熒光點［3］。

1.8統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)據(jù)使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，3組獨立樣本計數(shù)資料比較采用行乘列表的χ2檢驗，若有統(tǒng)計學(xué)差異則采用卡方分割進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

實驗結(jié)束后采用HE染色切片3組間血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡程度比較顯示：3組間細(xì)胞凋亡陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=203.190，P=0.0001)，見表1。3組間兩兩比較顯示：硫酸鎂組與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；復(fù)方三七散組與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；復(fù)方三七散組與硫酸鎂組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表1　采用HE染色3組間血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡程度分布構(gòu)成比

表2　3組間血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況的比較

采用TUNEL法切片3組間血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡程度比較顯示：3組間細(xì)胞凋亡陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=114.829，P=0.000 1)，見表3。3組間兩兩比較顯示：硫酸鎂組與空白對照組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；復(fù)方三七散組與空白對照組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；復(fù)方三七散組與硫酸鎂組對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表4。

表3　TUNEL法3組間血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡程度構(gòu)成比　例

表4　采用TUNEL法3組間血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況的比較

3　討論

血管內(nèi)皮細(xì)胞是血管內(nèi)壁表面覆蓋的一層細(xì)胞，屬單層扁平細(xì)胞，對血管壁起到屏障作用。同時，內(nèi)皮細(xì)胞還有傳遞信息、調(diào)節(jié)分泌等多種重要功能。在生理情況下，血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和再生同時進(jìn)行，凋亡和再生的細(xì)胞數(shù)量保持一個平衡的穩(wěn)定狀態(tài)，從而維持血管正常的生理功能［4］。病理過程中，有很多原因可以導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡。靜脈留置針對穿刺點的血管內(nèi)皮細(xì)胞可產(chǎn)生機械性刺激，從而導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的外形變形、細(xì)胞簇集、細(xì)胞內(nèi)骨架重排，甚至凋亡。留置針對血管的介入，可部分阻塞血管，致使血液流動緩慢，改變血流切變，也可引起血管內(nèi)皮細(xì)胞脫落。另外，留置針穿刺時切割穿刺點血管，損傷了血管內(nèi)皮的完整性，再加上靜脈留置針對血管壁的刺激，局部可引起炎癥反應(yīng)。炎癥反應(yīng)致使氧自由基增多，血液中活性氧含量增多，出現(xiàn)氧應(yīng)激狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，改變細(xì)胞內(nèi)酶活性的變化從而誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡［5］。此外，靜脈留置針可使局部血流變慢，產(chǎn)生血栓，血栓可促進(jìn)局部細(xì)胞凋亡［6］，而細(xì)胞凋亡又可加速血栓的形成［7］，這是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的又一機理。綜上所述，靜脈留置針?biāo)蚂o脈炎是細(xì)胞凋亡的原因，如能積極地預(yù)防靜脈炎的發(fā)生必將有效地保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免于或減少凋亡。

從實驗可見采用HE染色法，3組間血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況對比顯示復(fù)方三七散組細(xì)胞凋亡均少于其他2組(P＜0.05)。采用TUNEL法3組間血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況與采用HE染色法一致。這充分說明，復(fù)方三七散外敷具有防治靜脈留置針?biāo)蚂o脈炎而導(dǎo)致的血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用。而且，其防治效果好于硫酸鎂溶液濕敷。

中醫(yī)認(rèn)為靜脈炎的發(fā)生病因病機常為濕熱內(nèi)蘊，氣滯血瘀。本實驗所用中藥自擬方劑復(fù)方三七散針對此病機而設(shè)，由三七、大黃、葛根、遠(yuǎn)志、冰片組成。這些中藥是臨床治療相關(guān)疾病的常用藥物。三七活血化瘀；大黃清熱解毒，遠(yuǎn)志消腫散結(jié)；葛根現(xiàn)代藥理研究有擴張局部毛細(xì)血管，增加局部血液循環(huán)的作用；冰片有增強藥物滲透皮膚的作用。5藥合用，共同起到防治靜脈炎的作用，臨床療效較好。通過本次實驗，再次驗證：復(fù)方三七散外敷可起到防治靜脈留置針?biāo)蚂o脈炎的作用，進(jìn)而保護(hù)靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞減少凋亡，其效果確切，值得同道借鑒和推廣。

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作者簡介：張喜平(1977—)，女，主管護(hù)師。研究方向：中醫(yī)護(hù)理。

*基金項目：滄州市2013年科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計劃項目（編號131302081）。

收稿日期：2015-07-27

［中圖分類號］R285.6

［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A

［文章編號］1004-6852(2016)02-0016-03