張 林， 李元波， 朱麗萍， 張愛軍

（1.成都中醫(yī)藥大學，四川成都610075；2.揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司，四川成都611830；3.四川省中醫(yī)藥科學院，四川成都610041）

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多指標優(yōu)選香芍顆粒揮發(fā)油中β-環(huán)糊精的包合工藝

張 林1，3， 李元波2， 朱麗萍1，3， 張愛軍3*

（1.成都中醫(yī)藥大學，四川成都610075；2.揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司，四川成都611830；3.四川省中醫(yī)藥科學院，四川成都610041）

摘要:目的 提高揮發(fā)油在香芍顆粒中的穩(wěn)定性。方法 建立測定桉油精的HPLC方法，并以包合物的含油率、包合率、收率、桉油精的轉(zhuǎn)移率為考察指標，采用正交試驗法優(yōu)選揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的比例、水與β-環(huán)糊精的比例以及研磨時間，總評“歸一值”進行統(tǒng)計分析，薄層層析法、差示掃描量熱法（DSC）驗證包合物。結(jié)果 最佳包合工藝條件為油與β-環(huán)糊精的比例為1∶8，水與β-環(huán)糊精的比例為3∶1，研磨60 min。在包合過程中，揮發(fā)油的性質(zhì)未發(fā)生改變，其與β-環(huán)糊精已形成包合物。結(jié)論 該優(yōu)選工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)鍵詞:香芍顆粒；揮發(fā)油；β-環(huán)糊精；桉油精；HPLC；正交試驗；總評“歸一值”

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.049

香芍顆粒方中的川芎、豆蔻、木香等6味藥含有藥用揮發(fā)油，在沖服時易逸出，引起患者不適，順應(yīng)性差，為提高該成分在顆粒劑中的穩(wěn)定性，并掩蓋不適氣味，故對其進行包合。本課題組前期對揮發(fā)油進行了辛烯基琥珀酸酯化淀粉與β-環(huán)糊精包合的研究，確定選擇β-環(huán)糊精作為包合材料。包合物的制備方法有飽和水溶液法、超聲法、研磨法等［1］，其中研磨法更適用于工業(yè)化生產(chǎn)［2］，故本實驗選擇研磨法進行包合物制備。另外，引入桉油精轉(zhuǎn)移率作為考察指標，因為β-環(huán)糊精具有特殊的分子結(jié)構(gòu)（閉合筒狀），外部是親水性的表面，而內(nèi)部則是一個具有一定尺寸的手性疏水管腔，能包合一定大小的藥物分子，形成一種特殊的包合物［3］。由于揮發(fā)油中各成分的分子大小不一，桉油精作為處方中豆蔻的有效成分，并且含有量高，故需考察其分子大小是否適合β-環(huán)糊精的筒狀結(jié)構(gòu)。然后，以包合物的含油率、包合率、收率、桉油精的轉(zhuǎn)移率為指標，采用總評“歸一值”對香芍膠囊中揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合工藝進行優(yōu)化。

1 儀器與材料

AUW200D分析天平（日本島津公司）；Q200差示掃描量熱儀（美國TA儀器公司）；DZF-6050AB真空干燥箱；安捷倫1200高效液相色譜儀。β-環(huán)糊精（揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司，符合《中國藥典》2010年版標準）；桉油精對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110788-201105，純度99.9％）。川芎對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號120918-201110），其他藥材由揚子江藥業(yè)集團四川海蓉藥業(yè)有限公司提供并鑒定，均符合藥典規(guī)定。乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的提取 取6味處方藥材，加5倍于藥材量的水，揮發(fā)油提取器回流提取5 h，靜置，取油層，即得。揮發(fā)油得率為1.04％。

2.2 揮發(fā)油密度測定［4]取提取后的揮發(fā)油1 mL，測得其密度為0.926 1 g/mL。

2.3 包合物的制備 取揮發(fā)油、β-環(huán)糊精、水適量，將三者混合均勻，研磨一定時間，取出，干燥，打粉，石油醚洗滌粉末，除去表面揮發(fā)油，干燥，精密稱重，即得。

2.4 空白回收率 精密量取揮發(fā)油適量，置于500 mL圓底燒瓶中，加入蒸餾水300 mL，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，油水混合液用乙醚萃取3次，每次10 mL，合并乙醚層液，揮干，精密稱定，即得。計算空白回收率為71.39％。

2.5 桉油精含有量測定方法

2.5.1 色譜條件 Diamonsi1C18（2）色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相水-乙腈（53: 47）；檢測波長203 nm；柱溫30℃；體積流量1.0 mL/min；進樣量10 μL。

2.5.2 對照品溶液制備 精密稱取桉油精標準品5 mg，置于10 mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，即得。

2.5.3 供試品溶液的制備 精密稱取揮發(fā)油10 mg，置于10 mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.6 空白桉油精回收率測定 按“2.4”項下方法回收揮發(fā)油，取回收前及回收后的揮發(fā)油適量，按“2.5”項下方法測定。計算空白桉油精的回收率為72.15％。然后，精密稱取桉油精對照品適量，加乙腈制成0.659 5 mg/m L溶液，分別吸取1、3、5、7、10、15、20、25、30 μL，按上述色譜條件測定峰面積。以桉油精進樣量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，回歸方程為Y=118.48X+4.029 2，r=0.999 9，表明在0.659 5～19.785 0 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 考察指標的計算 以包合物的含油率、包合率、收率、桉油精的轉(zhuǎn)移率為考察指標，計算公式如下:

2.8 正交試驗設(shè)計 根據(jù)預(yù)實驗及文獻［5-7］，以揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的比例（A）、水與β-環(huán)糊精的比例（B）、包合時間（C）為考察因素，采用多指標評價工藝條件，引入總評“歸一值”（overa11 desirabi1ity，OD）來考察指標的綜合效果，Hassan法對4個指標進行歸一化處理［8］，取值越大越好，計算公式如下:

dmax=（Yi-Ymin）/（Ymax-Ymin）（Ymin為指標中的最小值；Ymax為指標中的最大值）

最后，采用L9（34）正交表進行試驗，正交試驗因素和水平設(shè)置見表1。

表1　揮發(fā)油包合工藝的正交試驗因素和水平

2.9 正交試驗與分析結(jié)果 按“2.3”項下方法和正交實驗表進行實驗，結(jié)果見表2。

表2　揮發(fā)油包合工藝的正交試驗結(jié)果

計算ODS、ODG并分別進行直觀分析，結(jié)果見表3，方差分析見表4。

由表可知，影響香芍顆粒中揮發(fā)油的包合物含油率、包合率、收率、桉油精轉(zhuǎn)移率的因素依次為油與β-環(huán)糊精的比例（A）＞包合時間（C）＞水與β-環(huán)糊精的比例（B），最優(yōu)組合是A3B3C2。其中，B因素的2水平與3水平差異較小，而且影響因素最小，為節(jié)約成本，B因素選取2水平，則最佳工藝條件為A3B2C2，即油與β-環(huán)糊精的比例為1∶8，水與β-環(huán)糊精的比例為3∶1，研磨60 min。2.10 驗證實驗 按上述優(yōu)選的工藝條件重復3次，得到干燥包合物，測定結(jié)果見表5，然后以表2中各指標的Ymax和Ymin計算ODS與ODG。由表可知，包合率均在90％以上，轉(zhuǎn)移率均在95％以上，而且收率較高，ODS的RSD為0.30％，ODG的RSD為0.32％，表明包合工藝的重復性和穩(wěn)定性均較好。

表3　直觀分析結(jié)果

表4　方差分析結(jié)果

表5　驗證實驗結(jié)果

2.11 包合物的定性驗證

2.11.1 薄層層析法 取包合前與包合后的揮發(fā)油適量，各加乙酸乙酯制成每1 mL約含5 mg揮發(fā)油的溶液。取川芎對照藥材，按《中國藥典》2010年版川芎項下鑒定（3）中對照藥材的制備方法制備，再取桉油精對照品適量，加正己烷制成每1 mL約含5 mg揮發(fā)油的溶液。吸取包合前與包合后的揮發(fā)油各5 μL，川芎對照藥材和桉油精對照品溶液各1 μL，點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（9∶1）為展開劑展開，取出，晾干，在紫外燈365 nm下檢視，噴以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果，包合前與包合后的揮發(fā)油與川芎對照藥材在相同位置處分別顯相同顏色的亮藍色熒光斑點，與桉油精對照品在相同位置處分別也顯相同顏色的斑點，表明揮發(fā)油包合前后成分的性質(zhì)無變化。

2.11.2 差示掃描量熱法（DSC）［10］取β-環(huán)糊精、β-環(huán)糊精包合物、β-環(huán)糊精與揮發(fā)油的混合物分別進行DSC檢驗，掃描速率10℃/min，結(jié)果見圖1。由圖1B可知，包合物的β-環(huán)糊精吸熱峰峰形與位置較圖1BA、圖1BC發(fā)生了明顯的變化，而且在222℃左右不顯示揮發(fā)油的吸熱峰，說明包合物新物相已經(jīng)形成。

圖1　差示掃描量熱法掃描圖

3 討論

本實驗以包合物的含油率、包合率、收率、桉油精的轉(zhuǎn)移率為考察指標，通過正交試驗法和總評“歸一值”的合用，從各個角度對工藝進行了較全面的評價，優(yōu)選出工藝的重復性和穩(wěn)定性較好，可為相關(guān)產(chǎn)品的研究提供參考。

桉油精屬于小分子揮發(fā)性化合物，故對其含有量測定在《中國藥典》2010年版及文獻均采用GC法，但色譜柱和色譜條件的差異較大，但由于HPLC法有更好的普適性，故藥典及文獻在建立多種揮發(fā)性成分含有量測定時也采用該方法檢測［11］。本實驗采用了HPLC法，對香芍顆粒中揮發(fā)油的桉油精進行含有量測定，測定方法經(jīng)方法學研究，具有可行性，故采用HPLC法測定桉油精的含有量。

同時，采用歸一值的算術(shù)和（ODS）與幾何平均數(shù)（ODG）進行多指標的綜合評價。為避免一項或多項指標的歸一值為0時，導致總評歸一值為0，使正交試驗分析結(jié)果出現(xiàn)誤差，滕亮［9］等建議使用ODS代替ODG來評價綜合效果。但本實驗各指標的最小值（Ymin）和最大值（Ymax）都在同一工藝條件，ODS也出現(xiàn)了一項0值，故對兩者分別進行綜合評價。結(jié)果表明，ODS和ODG的統(tǒng)計效果一致。

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*通信作者:張愛軍（1968—），女，研究員，從事新藥研發(fā)與基礎(chǔ)研究工作。Te1:（028）85255137，13880898533，E-mai1: ajzh33@ sohu.com

作者簡介:張 林（1990—），男，碩士，從事中藥理論與應(yīng)用研究。Te1: 15184442276，E-mai1: 1107056200@qq.com

基金項目:國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃—863計劃（2014AA022202）

收稿日期:2014-12-10

中圖分類號:R944

文獻標志碼:B

文章編號:1001-1528（2016）02-0447-04