陳永傳，崔亞利，李艷，任颯爽

(1.北京善方醫(yī)院檢驗科，北京 100027；2.北京豐臺醫(yī)院檢驗科，北京 100071)

不同稀釋液對肌酸激酶及其MB型同工酶測定的影響

陳永傳1，崔亞利2，李艷1，任颯爽1

(1.北京善方醫(yī)院檢驗科，北京 100027；2.北京豐臺醫(yī)院檢驗科，北京 100071)

目的 了解不同的稀釋液對肌酸激酶(CK)及其MB型同工酶(CK-MB)測定結(jié)果的影響。方法 收集2009年5月至2014年5月在北京豐臺醫(yī)院門診及病房治療的患者，采用生理鹽水、去離子水、正常血清作為稀釋液，按1：10的比例對568例CK及CK-MB大于各自正常參考范圍的血清樣本進行稀釋，根據(jù)統(tǒng)計分析比較稀釋前后樣本CK及CK-MB測定值的差異。結(jié)果 568例稀釋前原始血清樣本CK、CK-MB范圍分別在1 400～1 610 U/L、232～251 U/L之間，原始血清、生理鹽水1:10稀釋、去離子水1:10稀釋、正常血清1:10稀釋后結(jié)果分別為(1 522.3±60)U/L、(243.7±12)U/L；(1 568±55)U/L、(251±10)U/L；(1 543±51)U/L、(247±10)U/L；(1 798±63)U/L、(288±15)U/L。生理鹽水、去離子水稀釋的樣本稀釋前后結(jié)果比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，正常血清稀釋的樣本測定值與稀釋前比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。樣本經(jīng)生理鹽水、去離子水、正常血清稀釋后的CK、CK-MB與稀釋前原始血清相關(guān)系數(shù)r分別為0.991、0.990，0.982、0.993，0.975、0.980，均r＞0.97，呈顯著相關(guān)。放置一定時間內(nèi)的CK及CK-MB測定值比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。結(jié)論 正常血清不適合作為高濃度CK、CK-MB的稀釋液，而生理鹽水和去離子水適合作為稀釋液。

肌酸激酶；MB型同工酶；生理鹽水；去離子水；正常血清

肌酸激酶(Creatine kinase，CK)也被稱為肌酸磷酸激酶(CPK)，主要存在于心肌、骨骼肌，其次在腦組織，另有極少量存在于肝臟、平滑肌和紅細胞，主要起到催化肌酸與ATP高能磷酸鍵轉(zhuǎn)移的作用，為肌肉收縮提供能量[1]。CK同工酶有三種：CK-MB為心肌型，CK-MM為骨骼肌型，CK-BB為腦型。臨床上，CK及CK-MB測定是判斷心肌損傷的重要指標。部分心肌損傷可造成血清中CK及CK-MB超過試劑盒檢測的線性范圍，必須經(jīng)過稀釋才能測出，而不同的稀釋液對測定結(jié)果的影響差異較大。為了選擇合適的稀釋液，本文采用三種稀釋液對線性范圍內(nèi)血清CK及CK-MB進行檢測分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Olympus AU2700生化檢測儀。試劑、校準品、質(zhì)控品均為原裝配套產(chǎn)品。儀器按說明書進行操作和維護保養(yǎng)，用原裝校準品、質(zhì)控液進行校準和質(zhì)控，以保證實驗結(jié)果準確。

1.2 樣本收集 選取2009年5月至2014年5月在北京豐臺醫(yī)院門診及病房治療的患者，共568例，其中男性300例，女性268例。所有患者的CK、CK-MB原始血清測定值均大于各自正常參考范圍(CK參考范圍：≤171 U/L；CKMB參考范圍：＜24 U/L)，同時所有病例CK、CK-MB原始血清測定值均落在各自線性范圍(CK線性范圍：10～2 000 U/L；CK-MB線性范圍：線性范圍：10～2 000 U/L)之內(nèi)。血清樣本-20℃以下保存?zhèn)溆?，所有樣本避免溶血和脂血?/p>

1.3 檢測方法 具體操作按試劑盒說明書進行。儀器處于良好狀態(tài)，室內(nèi)質(zhì)控在控，嚴格按照儀器的操作步驟進行操作。收集的樣本用生理鹽水、去離子水、正常血清分別做1:10稀釋，所有測試均連續(xù)測定3次取均值，將測定結(jié)果均值乘以稀釋倍數(shù)，即為最終結(jié)果。

1.4 重現(xiàn)性評價 從收集的樣本中隨機取100份血清，分別用生理鹽水、去離子水、正常血清做1:10稀釋，每個樣品每種稀釋液各分裝三個密閉管放置，在0 h、12 h、24 h分別取1份室溫平衡30 min后進行測定，所有測試均連續(xù)測定3次取均值，將測定結(jié)果均值乘以稀釋倍數(shù)，即為最終結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學方法 應用SPSS20統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，多組間兩兩均數(shù)比較采用SNK-q檢驗。檢驗標準為α=0.05。兩組數(shù)據(jù)間采用Pearson分析，相關(guān)系數(shù)r＞0.97為高度相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 不同稀釋液稀釋前后測定的CK、CKMB結(jié)果 收集的樣本用生理鹽水、去離子水、正常血清分別按1：10稀釋后測定表明，正常血清稀釋的樣品測定值與稀釋前CK及CK-MB測定值比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而生理鹽水和去離子水稀釋樣品與稀釋前測定值比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 不同稀釋液稀釋前后測定的CK、CK-MB值比較(U/L，±s)

表1 不同稀釋液稀釋前后測定的CK、CK-MB值比較(U/L，±s)

注：與稀釋前原始血清比較，t=2.358，aP＜0.05；t=2.786，bP＜0.05。

樣本 標本總例數(shù)CK CK-MB稀釋前原始血清生理鹽水1：10稀釋去離子水1：10稀釋正常血清1：10稀釋568 568 568 568 1522.3±60 1568±55 1543±51 1798±63a243.7±12 251±10 247±10 288±15b

2.2 不同稀釋液稀釋后CK及CK-MB的相關(guān)性 生理鹽水1:10稀釋CK、CK-MB與稀釋前原始血清相關(guān)系數(shù)r分別為0.991、0.990，去離子水1:10稀釋CK、CK-MB與稀釋前原始血清相關(guān)系數(shù)r分別為0.982、0.993，正常血清1:10稀釋CK、CK-MB與稀釋前原始血清相關(guān)系數(shù)r分別為0.975、0.980，均r＞0.97，呈顯著相關(guān)。

2.3 不同稀釋液稀釋后CK及CK-MB測定值重現(xiàn)性評價 比較樣本經(jīng)生理鹽水、去離子水、正常血清稀釋后，放置一定時間內(nèi)的CK及CK-MB測定值的重現(xiàn)性，結(jié)果表明樣品經(jīng)三種溶劑稀釋后，在0 h、12 h、24 h測定值間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，重現(xiàn)性較好，見表2。

表2 不同稀釋液稀釋后CK及CK-MB重現(xiàn)性評價(U/L，±s)

表2 不同稀釋液稀釋后CK及CK-MB重現(xiàn)性評價(U/L，±s)

注：與0 h比較，aP＞0.05，bP＞0.05；與12 h比較，cP＞0.05。

測定時間CK CK-MB正常血清369±12 372±12a368±5bc0 h 12 h 24 h生理鹽水1198±23 1203±19a1201±17bc去離子水1210±20 1193±23a1207±26bc正常血清1260±17 1267±20a1253±19bc生理鹽水343±7 346±6a340±9bc去離子水341±11 343±12a344±9bc

3 討論

CK是細胞內(nèi)重要的能量代謝酶,分布廣泛，主要存在于骨骼肌、心肌和腦組織中，CK有3種同工酶：CK-MM、CK-MB和CK-BB。生理情況下，CK及CK-MB水平受性別、年齡、地域、種族、運動狀態(tài)等多種因素的影響。CK-MB主要存在于心肌細胞的外漿層,當炎癥或梗死等原因引起心肌細胞受損或壞死時該酶大量釋放入血，引起血清中CK和CK-MB增高，是臨床診斷急性心肌梗死(AMI)常用的酶學指標。此外，肌肉損傷、腦損傷，或應用他汀類降脂藥、核苷類抗病毒藥，也可能會使CK及CK-MB升高，過勞、飲酒、肌肉注射也可能導致特發(fā)性CK及CK-MB持續(xù)升高[2]。因此臨床上常常遇到CK及CK-MB升高接近甚至超過檢測線性范圍的情況，而此時如果不對樣本進行稀釋，所得結(jié)果不可靠，容易導致臨床誤判。因此，在臨床工作中對超過檢測線性范圍的CK及CK-MB稀釋研究顯得尤為重要。

酶學生化測定是一系列的酶促反應過程，該過程中許多因素均可影響酶活性，如pH值、溫度、抑制劑、激活劑和介質(zhì)等[3]。其中介質(zhì)因素的影響往往被忽視，特別是待測血清中酶活性超過了檢測方法線性范圍時，需要對標本進行稀釋檢測，選用的稀釋液常常會影響檢測結(jié)果的準確性[4]。

血清CK、CK-MB超過試劑盒的檢測范圍時需要適當稀釋后才能測出結(jié)果，但由于人體血清中存在有一種內(nèi)源性抑制物質(zhì)，當對血清進行稀釋后其中的抑制物質(zhì)也被稀釋，稀釋后的標本測定結(jié)果較真值要高[5]本試驗是在溫度等條件一致的情況下，觀察不同的稀釋液對CK及CK-MB測定的影響。本試驗中采用三種介質(zhì)：生理鹽水、去離子水及正常血清。對高值樣本進行稀釋后分析表明，經(jīng)正常血清稀釋的樣本，CK及CK-MB值與稀釋前差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，不能作為CK、CK-MB高值血清的稀釋液使用。其原因是正常血清作為稀釋液對高值血清CK、CK-MB進行稀釋后，測定時也把正常血清的CK、CK-MB值帶入了測定中，為減少誤差，需要把帶入的CK、CK-MB值從測定中扣除掉，這需要進一步的研究分析。而生理鹽水及去離子水稀釋的樣本與稀釋前差異無統(tǒng)計學意義。此外重現(xiàn)性和相關(guān)性分析均表明，三種溶劑稀釋后所測定樣本的CK及CK-MB值與稀釋前相比重現(xiàn)性較好，并且存在顯著的相關(guān)性，這些結(jié)果表明生理鹽水和去離子水適合作為CK、CK-MB高值血清樣本的稀釋液。

目前，臨床上常用的血清稀釋液為：生理鹽水、去離子水、正常人低值血清及緩沖液[6]。不同的測定項目、不同的方法及不同的儀器都會對標本稀釋液相應的要求[7]。本研究表明，生理鹽水、去離子水稀釋后的樣本與稀釋前差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，適合做高值CK及CK-MB血清稀釋介質(zhì)。

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[5]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].3版.長沙:東南大學出版社,2006:422.

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R446.6

B

1003—6350（2016）15—2569—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.15.058

2015-12-27)

崔亞利。E-mail：chenyc717@sohu.com