張?zhí)煲怼　”R艷萍　　葉宏波　　管敏昌　　杭金國　　湯衛(wèi)紅.浙江省臺(tái)州市恩澤醫(yī)療集團(tuán)路橋醫(yī)院呼吸科，浙江臺(tái)州　38050；.浙江省臺(tái)州市恩澤醫(yī)療集團(tuán)路橋醫(yī)院兒科，浙江臺(tái)州　38050

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布地奈德對支氣管哮喘患者肺泡灌洗液TGF-β1表達(dá)的影響

張?zhí)煲?盧艷萍1葉宏波1管敏昌2▲杭金國2湯衛(wèi)紅2
1.浙江省臺(tái)州市恩澤醫(yī)療集團(tuán)路橋醫(yī)院呼吸科，浙江臺(tái)州318050；2.浙江省臺(tái)州市恩澤醫(yī)療集團(tuán)路橋醫(yī)院兒科，浙江臺(tái)州318050

[摘要]目的探討布地奈德對BA患者氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中TGF-β1表達(dá)影響。方法選擇我科2010年2月～2014年2月住院AABA患者按就診時(shí)間分為常規(guī)組和治療組各45例。常規(guī)組予綜合治療，治療組在此基礎(chǔ)上予布地奈德吸入，療程均為3周，對兩組治療前后BALF中TGF-β1水平進(jìn)行檢測。結(jié)果常規(guī)組治療前、治療1周、治療3周BALF中TGF-β1濃度分別為（223.98±58.48）ng/L、（189.04±44.57）ng/L、（158.33±37.66）ng/L，治療組治療前、治療1周、治療3周BALF中TGF-β1濃度分別為（231.60±61.11）ng/L、（170.31±32.19）ng/L、（135.20±17.94）ng/L；治療1周后，治療組與常規(guī)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），治療3周后，治療組與常規(guī)組比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；BALF中TGF-β1水平與BA分級(jí)呈正相關(guān)（r=0.938，P＜0.01）。結(jié)論BALF中TGF-β1能反映BA氣道炎癥情況，布地奈德能顯著降低BALF中TGF-β1水平。

[關(guān)鍵詞]支氣管哮喘；支氣管肺泡灌洗液；TGF-β1；布地奈德

支氣管哮喘（bronchial asthma，BA）是由多種細(xì)胞參與的氣道慢性炎癥性疾病，具有氣道可逆性和高反應(yīng)性等特點(diǎn)，反復(fù)發(fā)作可導(dǎo)致氣道重塑。目前全球哮喘發(fā)病率為5％～6％，患病率和病死率呈不斷上升趨勢[1]。研究顯示，轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth fac tor β1，TGF-β1）是氣道慢性炎癥及氣道重塑主要介質(zhì)，具有刺激氣道平滑肌細(xì)胞增殖和促進(jìn)肺纖維化等作用[2]。吸入糖皮質(zhì)激素（inhaled corticosteroid，ICS）能有效地緩解哮喘急性發(fā)作和減輕氣道慢性炎癥，達(dá)到良好的抗炎效果。為闡明TGF-β1在BA中作用機(jī)制，我們通過對支氣管哮喘急性發(fā)作（acute attack of bronchial asthma，AABA）患者ICS治療前后BALF中TGF-β1水平進(jìn)行檢測，探討TGF-β1在BA中的作用，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

2010年2月～2014年2月我院確診BA患者，均簽署知情同意書。所有患者均符合2013年中華醫(yī)學(xué)會(huì)《中國支氣管哮喘防治指南》BA的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，年齡18～50歲，按就診時(shí)間分為常規(guī)組45例，輕度14例，中度19例，重度12例；男24例，女21例，病程（18.07± 6.39）年，（35.9±6.5）歲；治療組45例，輕度14例，中度20例，重度11例；男23例，女22例；病程（16.87± 4.86）年；平均（35.4±7.2）歲，對照組45例為同期懷疑支氣管異物而進(jìn)行支氣管鏡檢查者，其中男22例，女23例，平均年齡（34.4±7.6）歲。三組性別、年齡、病程、病情等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

①所有病例均符合2013年《中國支氣管哮喘防治指南》中AABA的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；②年齡18～50歲；③近2個(gè)月未曾接受過糖皮質(zhì)激素和（或）其他免疫抑制劑等治療者；④所有研究對象均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，且患者和家屬知情同意；⑤研究對象能耐受支氣管鏡操作。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)

①除BA外的慢性呼吸道疾病如支氣管擴(kuò)張、慢性阻塞性肺病、支氣管肺癌等；②近2個(gè)月曾接受過糖皮質(zhì)激素或免疫調(diào)節(jié)劑等治療者；③病情嚴(yán)重需有創(chuàng)通氣者；④能引起TGF-β1水平改變者如糖尿病、腎病和心血管疾病等；⑤不能耐受支氣管鏡檢查者；⑥風(fēng)濕免疫性疾病者如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等；⑦拒絕或未按研究方案完成者。

1.4肺功能檢測及BA分級(jí)

應(yīng)用德國耶格肺功能儀對所有研究對象進(jìn)行監(jiān)測，內(nèi)容主要包括：第1秒用力呼氣容積（forced expi ratory volume in one second，F(xiàn)EV1）、用力肺活量（forced vital capacity，F(xiàn)VC）、第1秒用力呼氣容積占用力肺活量百分比（FEV1/FVC）。BA分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的《支氣管哮喘診治指南》標(biāo)準(zhǔn)[4]，分為輕度、中度、重度和危重，即輕度：FEV1/FVC＜70％，F(xiàn)EV1占預(yù)計(jì)值％≥80％；中度：FEV1/FVC＜70％，50％≤FEV1占預(yù)計(jì)值％＜80％；重度：FEV1/FVC＜70％，30％≤FEV1占預(yù)計(jì)值％＜50％；危重：FEV1 /FVC＜70％，F(xiàn)EV1占預(yù)計(jì)值％＜30％或FEV1占預(yù)計(jì)值％＜50％伴有慢性呼吸衰竭。

1．5支氣管肺泡灌洗（BAL）

應(yīng)用富士能EB-270S型電子支氣管鏡，按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的《診斷性可彎曲支氣管鏡應(yīng)用指南（2008年版）》[5]進(jìn)行操作，支氣管鏡嵌頓于右側(cè)中葉開口處，注入生理鹽水10 mL，并回收約50％，置-30℃冰箱內(nèi)保存。

1.6ELISA檢測BALF中TGF-β1含量

采用ELISA法檢測BALF中TGF-β1水平，ELISA試劑盒由晶美生物技術(shù)北京有限公司提供，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。

1.7治療方法

常規(guī)組按AABA臨床路徑（吸氧、大環(huán)內(nèi)酯類抗菌素抗炎5～7 d，并予氨茶堿0.25 g靜滴解痙等對癥治療），并予霧化吸入平喘[硫酸特布他林霧化溶液（2 mL：5 mg，阿斯利康公司，批號(hào)H20090134）]；治療組在此基礎(chǔ)上予增加布地奈德溶液（1 mg：2 mL，阿斯利康公司，批號(hào)300500）霧化吸入，兩組療程均為3周。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對資料進(jìn)行分析，各組數(shù)據(jù)檢驗(yàn)前均進(jìn)行方差齊性和正態(tài)分布檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（±s）表示，并進(jìn)行t檢驗(yàn)；多組間的比較采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用直線回歸分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1BA不同治療時(shí)間和不同發(fā)作程度BALF中TGF-β1比較

常規(guī)組治療前、治療1周、治療3周BALF中TGF-β1濃度比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=56.55，P＜0.01）；而治療組治療前、治療1周、治療3周BALF中TGF-β1濃度比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=74.78，P＜0.01），提示兩組治療后BALF中TGF-β1濃度均有顯著下降。治療前常規(guī)組與治療組與BALF中TGF-β1濃度比較，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.49；11.84，P＜0.01），而常規(guī)組與治療組BALF中TGF-β1濃度無顯著差異（t=0.61，P＞0.05）。治療第1周BALF中TGF-β1濃度比較，治療組顯著低于常規(guī)組（t=2.28，P＜0.05）；而治療第3周BALF中TGF-β1濃度比較，治療組顯著低于常規(guī)組更明顯（t=3.72，P＜0.01）。見表1。

2.2AABA不同喘息程度BALF中TGF-β1比較

常規(guī)組和治療組哮喘患者不同喘息程度BALF中TGF-β1濃度比較，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 490.02；104.31，P＜0.01），而兩組哮喘不同喘息程度BALF中TGF-β1濃度兩兩比較，常規(guī)組和治療組輕度與中度患者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.91；7.44，P＜0.01）；常規(guī)組和治療組中度與重度患者比較差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.92；10.13，P＜0.01），提示隨著BA加重，BALF中TGF-β1濃度顯著升高（P＜0.01）（表2）。

表1　兩組不同治療時(shí)間BALF中TGF-β1比較（±s，ng/L）

表1　兩組不同治療時(shí)間BALF中TGF-β1比較（±s，ng/L）

注：對照組BALF中TGF-β1為（123.33±5.62）ng/L

223.98±58.48 231.60±61.11 0.61 ＞0.05 189.04±44.57 170.31±32.19 2.28 ＜0.05 158.33±37.66 135.20±17.94 3.72 ＜0.01 56.55 74.78 ＜0.01 ＜0.01治療前　　治療第1周　治療第3周　F值　P組別　n常規(guī)組治療組t值P 45 45

表2　AABA不同喘息程度BALF中TGF-β1比較（±s，ng/L）

表2　AABA不同喘息程度BALF中TGF-β1比較（±s，ng/L）

14 14 218.63±11.43 236.05±29.09 19 20 308.08±12.63 311.27±11.88 12 11組別常規(guī)組治療組159.14±12.64 162.64±27.79例數(shù)　　中度例數(shù)　　重度例數(shù)喘息程度輕度

2.3AABA患者BALF中TGF-β1水平與BA發(fā)作程度相關(guān)性

兩組AABA患者BALF中TGF-β1水平與BA發(fā)作程度呈正相關(guān)（r=0.938，P＜0.01）。見封三圖1。

3　討論

BA是由多種細(xì)胞和細(xì)胞因子參與的氣道慢性炎癥性疾病。但BA確切發(fā)病機(jī)制尚未完全明了。肺功能在一定程度上可評估BA病情，但不適合BA嚴(yán)重患者。炎癥介質(zhì)可趨化各種炎癥細(xì)胞，并釋放各種酶，導(dǎo)致肺功能逐步惡化[6]。細(xì)胞因子是指由免疫細(xì)胞或某些非免疫細(xì)胞分泌的具有生物學(xué)效應(yīng)的小分子蛋白物質(zhì)，具有介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和參與免疫應(yīng)答等功能[7]。多項(xiàng)研究表明[8-9]，炎癥介質(zhì)如IL-8、IL-5、IL-25等參與BA病理過程。因此，阻斷炎癥介質(zhì)的活性，對于抑制哮喘的炎性反應(yīng)、控制哮喘癥狀及復(fù)發(fā)有積極臨床意義[10]。由于外周血和誘導(dǎo)痰均不能直接反應(yīng)小氣道炎癥情況，存在一定的局限性。BALF主要來自支氣管亞段，可直接的反映小氣道炎癥，BALF炎性介質(zhì)水平有助于判斷BA衡量病情和轉(zhuǎn)歸[11]。

TGF-β1是一種重要致纖維化細(xì)胞因子之一，與BA氣道重塑密切相關(guān)[12]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[13]，哮喘大鼠BALF及肺組織中TGF-β1的表達(dá)增多，加重了氣道重塑；布地奈德霧化吸入可減少氣道局部TGF-β1的表達(dá)，在一定程度上干預(yù)BA氣道重塑[14]。劉永生等[15]研究發(fā)現(xiàn)，血清TGF-β1的表達(dá)與BA患者FEV1、FEV1/FVC％呈負(fù)相關(guān)，提示TGF-β1參與BA氣道重塑。范大平等[16]進(jìn)一步AABA患者血清和誘導(dǎo)痰中TGF-β1濃度進(jìn)行檢測，結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)血清和誘導(dǎo)痰中TGF-β1濃度與BA發(fā)作程度密切相關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)BA急性發(fā)作期BALF中TGF-β1水平顯著升高（P＜0.01），且隨著BA發(fā)作加重，BALF中TGF-β1水平增高明顯；直線回歸顯示，BALF中TGF-β1濃度與BA發(fā)作程度均呈顯著正相關(guān)（r=0.938，P＜0.01），提示BALF中TGF-β1濃度可反映了BA氣道炎癥。布地奈德是一種吸入型的糖皮質(zhì)激素，具有明顯抗炎和抑制炎癥介質(zhì)釋放的作用[17]，且在支氣管哮喘中的療效已得到肯定[18]，且具有局部濃度高、所用劑量小和不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)[19]。本研究發(fā)現(xiàn)，布地奈德吸入可顯著降低AABA患者BALF中TGF-β1水平（P＜0.05）（治療第1周），并隨著治療時(shí)間延長下降更明顯（P＜0.01）（治療第3周），提示布地奈德吸入能顯著降低BALF中TGF-β1的濃度。

綜上所述，TGF-β1是參與BA氣道炎癥重要炎癥介質(zhì)[20]，布地奈德吸入能顯著降低BALF中TGF-β1的濃度，該生化提標(biāo)有望早期識(shí)別AABA，并且對AABA臨床療效評價(jià)有參考價(jià)值。

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Impaction of budesonide on the expression of TGF-β1in patients with bronchoalveolar lavage of asthma

ZHANG Tianyi1LU Yanping1YE Hongbo1GUAN Minchang2HANG Jinguo2TANG Weihong2
1.Department of Respiratory, Taizhou Enze Medical Center, Luqiao Hospital, Taizhou 318050, China; 2.Department of Pediatrics, Taizhou Enze Medical Center, Luqiao Hospital, Taizhou 318050, China

[Abstract]Objective To observe the impaction of budesonide on the expression of TGF-β1 in bronchoalveolar lavage of asthma. Methods The patients hospitalized in our department from February 2010 to February 2014 for the acute attack of asthma were selected and divided into the conventional group and the treatment group according to visiting time, with 45 cases each. The conventional group was treated with comprehensive therapy and the treatment group was treated with budesonide inhalation therapy on basis of the conventional group, and the course of treatment were 3 weeks. The levels of TGF-β1in BALF were measured before treatment and after treatment. Results The level of TGF-β1before treatment, 1 week, 3 weeks of treatment were（223.98±58.48）ng/L,（189.04±44.57）ng/L,（158.33±37.66）ng/L in the conventional group respectively, and（231.60±61.11）ng/L,（170.31±32.19）ng/L,（135.20±17.94）ng/L in the treatment group respectively. There were significant differences between the treatment group and conventional group after 1 week of treatment（P＜0.05）and the same after 3 weeks of treatment（P＜0.01）. And the concentration of TGF-β1in BALF were positively correlated with classification of asthma（r=0.938, P＜0.01）. Conclusion The level of TGF-β1can reflect airway inflammation of asthma, which can be significantly decrease by budesonide.

[Key words]Asthma; Bronchoalveolar lavage; TGF-β1; Budesonide

收稿日期：（2015-08-07）

通訊作者▲

［基金項(xiàng)目］浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生一般研究計(jì)劃（2015KYB446）；臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心（集團(tuán)）科研基金項(xiàng)目（15EZA2）；浙江省第一批臺(tái)州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（1301ky49）

[中圖分類號(hào)]R562.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1673-9701（2016）01-0016-03